عدة أفكار حول أنبوب أخذ عينات الفيروس

1. حول تصنيع أنابيب أخذ عينات الفيروسات
تنتمي أنابيب أخذ عينات الفيروس إلى منتجات الأجهزة الطبية. يتم تسجيل معظم الشركات المصنعة المحلية وفقًا لمنتجات الدرجة الأولى ، ويتم تسجيل عدد قليل من الشركات وفقًا لمنتجات الدرجة الثانية. في الآونة الأخيرة ، من أجل تلبية الاحتياجات الطارئة لـ Wuhan وأماكن أخرى ، أخذت العديد من الشركات "قناة الطوارئ" "تنطبق للحصول على إذن من الدرجة الأولى. يتكون أنبوب أخذ عينات الفيروسات من مسحة أخذ العينات ، وحل الحفاظ على الفيروسات والتعبئة الخارجية. نظرًا لعدم وجود معيار وطني موحد أو معايير الصناعة ، تتراوح منتجات مختلف المصنعين بشكل كبير.

1. يجب تصنيع رأس تم أخذ العينات من الألياف الاصطناعية للبوليستر (PE) (الألياف من صنع الإنسان). لا يمكن استخدام إسفنجة الكالسيوم أو مسحات عصا خشبية (بما في ذلك عصي الخيزران) ، ولا يمكن أن تكون مادة رأس المسحة منتجات قطنية. نظرًا لأن ألياف القطن لديها امتصاص قوي للبروتين ، فليس من السهل الانتقال إلى حل التخزين اللاحق ؛ وعندما يتم كسر عصا خشبية أو عصا من الخيزران التي تحتوي على ألجينات الكالسيوم والمكونات الخشبية ، فإن الاستمتاع في محلول التخزين سوف يعزز البروتين ، وحتى يمكن أن يمنع تفاعل PCR اللاحق. يوصى باستخدام الألياف الاصطناعية مثل ألياف PE وألياف البوليستر وألياف البولي بروبيلين لمواد رأس المسحة. لا ينصح بالألياف الطبيعية مثل القطن. لا ينصح ألياف النايلون أيضًا لأن ألياف النايلون (على غرار رؤوس فرشاة الأسنان) تمتص الماء. الفقراء ، مما يؤدي إلى عدم كفاية حجم أخذ العينات ، مما يؤثر على معدل الكشف. يحظر إسفنجة الجينات الكالسيوم لأخذ عينات من مواد المسحة! مقبض المسحة له نوعان: مكسور ومدمج. يتم وضع المسحة المكسورة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات ، ويتم كسر غطاء الأنبوب بعد كسره من الموضع بالقرب من رأس أخذ العينات ؛ تضع المسحة المدمجة مباشرة مسحة أخذ العينات في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات ، وتم تصميم غطاء أنبوب التخزين في محاذاة الفتحة الصغيرة مع الجزء العلوي من المقبض وتشديد غطاء الأنبوب. مقارنة الطريقتين ، فإن الأخير آمن نسبيا. عندما يتم استخدام المسحة المكسورة بالاقتران مع أنبوب تخزين أصغر حجمًا ، فقد يتسبب ذلك في رش السائل في الأنبوب عند كسره ، ويجب إيلاء الاهتمام الكامل لخطر التلوث الناجم عن الاستخدام غير السليم للمنتج. يوصى باستخدام أنبوب البوليسترين المجوف (PS) أو أنبوب حقن البولي بروبيلين (PP) لمادة مقبض المسحة. بغض النظر عن المواد المستخدمة ، لا يمكن إضافة إضافات Alginate الكالسيوم ؛ عصي خشبية أو عصي الخيزران. باختصار ، يجب أن تضمن مسحة أخذ العينات كمية أخذ العينات ومقدار الإصدار ، ويجب ألا يكون للمواد المحددة مواد تؤثر على الاختبار اللاحق.

2. حل الحفاظ على الفيروسات: هناك نوعان من حلول الحفاظ على الفيروسات المستخدمة على نطاق واسع في السوق ، أحدهما هو حل صيانة الفيروسات المعدلة استنادًا إلى وسيط النقل ، والآخر هو حل معدّل لاستخراج الحمض النووي.
المكون الرئيسي في السابق هو وسط الثقافة الأساسية لـ Eagle (MEM) أو ملح هانك المتوازن ، والذي يضاف مع الأملاح والأحماض الأمينية والفيتامينات والجلوكوز والبروتين اللازمة لبقاء الفيروس. يستخدم محلول التخزين هذا ملح الصوديوم الأحمر فينول كمؤشر ومحلول. عندما تكون قيمة الرقم الهيدروجيني 6.6-8.0 ، يكون الحل ورديًا. تتم إضافة الجلوكوز الضرورية والغلوتامين والبروتين إلى محلول الحفظ. يتم توفير البروتين في شكل مصل الأبقار الجنين أو ألبومين مصل البقري ، والذي يمكن أن يستقر قشرة البروتين في الفيروس. نظرًا لأن محلول الحفظ غني بالمواد المغذية ، فهو مواتٍ لبقاء الفيروس ولكنه مفيد أيضًا لنمو البكتيريا. إذا كان محلول الحفظ ملوثًا بالبكتيريا ، فسوف يتضاعف بكميات كبيرة. سيؤدي ثاني أكسيد الكربون في مستقلباتها إلى انخفاض درجة الحموضة في المحافظة من اللون الوردي. لذلك ، أضاف معظم الشركات المصنعة مكونات مضادة للبكتيريا إلى تركيباتها. العوامل المضادة للبكتيريا الموصى بها هي البنسلين ، الستربتومايسين ، الجنتاميسين والبوليمايكسين B. أزيد الصوديوم و 2-ميثيل لا ينصح به مثبطات مثل 4-methyl-4-isothiazolin-3-one (MCI) و 5-chloro-2-methyl-4-isothiazolin-3-One. نظرًا لأن العينة التي يوفرها حل الحفظ هذا هي في الأساس فيروس مباشر ، يمكن الحفاظ على أصالة العينة إلى أقصى حد ، ويمكن استخدامه ليس فقط لاستخراج واكتشاف الأحماض النووية الفيروس ، ولكن أيضًا لزراعة الفيروسات وعزلها. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أنه عند استخدامه للكشف ، يجب إجراء استخراج الحمض النووي وتنقية بعد تعطيل.
نوع آخر من محلول الحفاظ على المحافظة المعد بناءً على محلمي استخراج الحمض النووي ، والمكونات الرئيسية هي أملاح متوازنة ، وعامل خلل EDTA ، وملح غوانيدين (مثل isothiocyanate guanidine ، و guanidine hydrochloride ، وما إلى ذلك) Oxalate) ، الفينول ، 8-هيدروكسيكينولين ، ديثيوثريتول (DTT) ، البروتينات K والمكونات الأخرى ، فإن محلول التخزين هذا هو ربط الفيروس مباشرة لإطلاق الحمض النووي والقضاء على RNase. إذا تم استخدامه فقط لـ RT-PCR ، فهو أكثر ملاءمة ، ولكن يمكن أن تعطل الفيروس. لا يمكن استخدام هذا النوع من العينة لفصل ثقافة الفيروس.

يوصى باستخدام عامل تخيب أيون المعادن المستخدم في محلول الحفاظ على الفيروسات باستخدام أملاح EDTA (مثل حمض الإيثيلينيتيتيتريتيتريتيتريتيتسيوم ديبوتاسيوم ، و disodium ethylenediaminetraacetic acid ، وما إلى ذلك) ، ولا ينصح باستخدامه للهيبارين (مثل الهيبارين الصوديوم ، ليثيوم هيبارين) ، وكذلك لا يؤثر
3. أنبوب الحفظ: يجب اختيار مادة أنبوب الحفظ بعناية. هناك بيانات تشير إلى أن البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) يرتبط بامتصاص الحمض النووي ، وخاصة في تركيز أيون الشد العالي ، والبولي إيثيلين (البولي إيثيلين) هو أكثر تفضيلًا من البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) سهلة فهم الحمض النووي/الحمض النووي الريبي. تعتبر البلاستيك البلاستيكي البولي إيثيلين-بروبيلين (polyallomer) وبعض الحاويات البلاستيكية البولي بروبيلين المصنعة خصيصًا (البولي بروبيلين) أكثر ملاءمة لتخزين الحمض النووي الريبي/الحمض النووي الريبي. بالإضافة إلى ذلك ، عند استخدام مسحة قابلة للكسر ، يجب أن يحاول أنبوب التخزين تحديد حاوية بارتفاع أكبر من 8 سم لمنع حدوثها وتلوثها عند كسر المسحة.

4. المياه لمحلول الحفاظ على الإنتاج: يجب ترشيح المياه الفائقة المستخدمة في محلول الحفاظ على الإنتاج من خلال غشاء الترشيح الفائق مع وزن جزيئي قدره 13000 لضمان إزالة شوائب البوليمر من المصادر البيولوجية ، مثل RNase ، و DNase ، والسموم الداخلي ، ولا ينصح التنقيب العادي. الماء أو الماء المقطر.

2. استخدام أنابيب أخذ عينات الفيروس

يتم تقسيم أخذ العينات باستخدام أنبوب أخذ عينات الفيروس إلى أخذ عينات من البلعوم وأخذ عينات البلعوم الأنفي:

1.

2. أخذ عينات البلعوم الأنفي: قم بقياس المسافة من طرف الأنف إلى فص الأذن مع مسحة وعلامة بإصبع ، وأدخل تمثال العينات في تجويف الأنف في اتجاه الأنف العمودي (الوجه) ، يجب أن يمتد المسحة على الأقل من طول الفص في الأذن إلى أطراف الأنف ، وترك SWAB في الأنف 15-30.
ليس من الصعب رؤيتها من طريقة الاستخدام ، سواء كانت مسحة البلعوم أو مسحة البلعوم الأنفي ، وأخذ العينات مهمة فنية ، وهي صعبة وملوسة. ترتبط جودة العينة التي تم جمعها مباشرة بالاكتشاف اللاحق. إذا كانت العينة التي تم جمعها لها حمولة فيروسية منخفضة ، فمن السهل التسبب في سلبيات خاطئة ، يصعب تأكيد التشخيص.