عدة أفكار حول أنبوب أخذ عينات الفيروس

1. حول تصنيع أنابيب أخذ عينات الفيروسات
تنتمي أنابيب أخذ عينات الفيروس إلى منتجات الأجهزة الطبية. يتم تسجيل معظم الشركات المصنعة المحلية وفقًا لمنتجات الدرجة الأولى ، ويتم تسجيل عدد قليل من الشركات وفقًا لمنتجات الدرجة الثانية. في الآونة الأخيرة ، من أجل تلبية الاحتياجات الطارئة لـ Wuhan والأماكن الأخرى ، أخذت العديد من الشركات "قناة الطوارئ" "تقدم بطلب للحصول على إذن من الدرجة الأولى. يتكون أنبوب أخذ عينات الفيروس من مسحة أخذ العينات ، وحل الحفاظ على الفيروسات والتعبئة الخارجية. نظرًا لعدم وجود معيار أو معيار وطني موحد ، فإن منتجات مختلف الشركات المصنعة تختلف اختلافًا كبيرًا.

1. يجب تصنيع رأس تم أخذ العينات من الألياف الاصطناعية للبوليستر (PE) (الألياف من صنع الإنسان). لا يمكن استخدام إسفنجة الكالسيوم أو مسحات عصا خشبية (بما في ذلك عصي الخيزران) ، ولا يمكن أن تكون مادة رأس المسحة منتجات قطنية. نظرًا لأن ألياف القطن لديها امتصاص قوي للبروتين ، فليس من السهل الانتقال إلى حل التخزين اللاحق ؛ وعندما يتم كسر عصا خشبية أو عصا من الخيزران التي تحتوي على ألجينات الكالسيوم والمكونات الخشبية ، فإن الاستمتاع في محلول التخزين سوف يعزز البروتين ، وحتى يمكن أن يمنع تفاعل PCR اللاحق. يوصى باستخدام الألياف الاصطناعية مثل ألياف PE وألياف البوليستر وألياف البولي بروبيلين لمواد رأس المسحة. لا ينصح بالألياف الطبيعية مثل القطن. لا ينصح ألياف النايلون أيضًا لأن ألياف النايلون (على غرار رؤوس فرشاة الأسنان) تمتص الماء. الفقراء ، مما يؤدي إلى عدم كفاية حجم أخذ العينات ، مما يؤثر على معدل الكشف. يحظر إسفنجة الجينات الكالسيوم لأخذ عينات من مواد المسحة! مقبض المسحة له نوعان: مكسور ومدمج. يتم وضع المسحة المكسورة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات ، ويتم كسر غطاء الأنبوب بعد كسره من الموضع بالقرب من رأس أخذ العينات ؛ تضع المسحة المدمجة مباشرة مسحة أخذ العينات في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات ، وتم تصميم غطاء أنبوب التخزين في محاذاة الفتحة الصغيرة مع الجزء العلوي من المقبض وتشديد غطاء الأنبوب. مقارنة الطريقتين ، فإن الأخير آمن نسبيا. عندما يتم استخدام المسحة المكسورة بالاقتران مع أنبوب تخزين أصغر حجمًا ، فقد يتسبب ذلك في رش السائل في الأنبوب عند كسره ، ويجب إيلاء الاهتمام الكامل لخطر التلوث الناجم عن الاستخدام غير السليم للمنتج. يوصى باستخدام أنبوب البوليسترين المجوف (PS) أو أنبوب حقن البولي بروبيلين (PP) لمادة مقبض المسحة. بغض النظر عن المواد المستخدمة ، لا يمكن إضافة إضافات Alginate الكالسيوم ؛ عصي خشبية أو عصي الخيزران. باختصار ، يجب أن تضمن مسحة أخذ العينات كمية أخذ العينات ومقدار الإصدار ، ويجب ألا يكون للمواد المحددة مواد تؤثر على الاختبار اللاحق.

2. حل الحفاظ على الفيروسات: هناك نوعان من حلول الحفاظ على الفيروسات المستخدمة على نطاق واسع في السوق ، أحدهما هو حل صيانة الفيروسات المعدلة استنادًا إلى وسيط النقل ، والآخر هو حل معدّل لاستخراج الحمض النووي.
المكون الرئيسي في السابق هو وسط الثقافة الأساسية لـ Eagle (MEM) أو ملح هانك المتوازن ، والذي يضاف مع الأملاح والأحماض الأمينية والفيتامينات والجلوكوز والبروتين اللازمة لبقاء الفيروس. يستخدم محلول التخزين هذا ملح الصوديوم الأحمر فينول كمؤشر ومحلول. عندما تكون قيمة الرقم الهيدروجيني 6.6-8.0 ، يكون الحل ورديًا. تتم إضافة الجلوكوز الضرورية والغلوتامين والبروتين إلى محلول الحفظ. يتم توفير البروتين في شكل مصل الأبقار الجنين أو ألبومين مصل البقري ، والذي يمكن أن يستقر قشرة البروتين في الفيروس. نظرًا لأن محلول الحفظ غني بالمواد الغذائية ، فهو يفضي إلى بقاء الفيروس ولكنه مفيد أيضًا لنمو البكتيريا. إذا كان محلول الحفظ ملوثًا بالبكتيريا ، فسوف يتضاعف بكميات كبيرة. سيؤدي ثاني أكسيد الكربون في مستقلباتها إلى انخفاض درجة الحموضة في المحافظة من اللون الوردي. لذلك ، أضاف معظم الشركات المصنعة مكونات مضادة للبكتيريا إلى تركيباتها. العوامل المضادة للبكتيريا الموصى بها هي البنسلين ، الستربتومايسين ، الجنتاميسين والبوليميكسين B. أزيد الصوديوم و 2-ميثيل مثبطات مثل 4-ميثيل-4-إيزوثياوزولين -3-واحد (MCI) و 5-كلورو---ميثيل -4 -Sothiazolin-3-One (CMCI) لأن هذه المكونات لها تأثير على رد فعل PCR. نظرًا لأن العينة التي يوفرها حل الحفظ هذا هي في الأساس فيروس مباشر ، يمكن الحفاظ على أصالة العينة إلى أقصى حد ، ويمكن استخدامه ليس فقط لاستخراج الأحماض النووية للفيروسات والكشف عنها ، ولكن أيضًا للزراعة و عزل الفيروسات. ومع ذلك ، تجدر الإشارة إلى أنه عند استخدامها للكشف ، يجب إجراء استخراج الحمض النووي وتنقية بعد تعطيل.
نوع آخر من محلول الحفاظ على المحافظة على أساس المحللة لاستخراج الحمض النووي ، والمكونات الرئيسية هي أملاح متوازنة ، وعامل مخبأ EDTA ، وملح guanidine (مثل isothiocyanate guanidine ، و guanidine hydrochloride ، وما إلى ذلك) الفاعل بالسطح (مثل tetradecyltrimethylammonium oxalate) ، الفينول ، 8-هيدروكسيكينولين ، dithiothreitol (DTT) ، البروتينيز K والمكونات الأخرى ، هذا محلول التخزين هو التشبث مباشرة فيروس لإطلاق الحمض النووي والقضاء على RNase. إذا تم استخدامه فقط لـ RT-PCR ، فهو أكثر ملاءمة ، ولكن يمكن أن تعطل الفيروس. لا يمكن استخدام هذا النوع من العينة لفصل ثقافة الفيروس.

يوصى باستخدام عامل تخيب أيون المعادن المستخدم في محلول الحفاظ على الفيروسات باستخدام أملاح EDTA (مثل حمض الإيثيلينيتينيتريتيتيت ديبوتاسيوم (مثل حمض الإيثيلينيتيتريتيتريتيتسيتيت ، وما إلى ذلك) ، ولا ينصح باستخدام الهيبارين الصوديوم ، ليثيوم هيبارين) ، حتى لا تؤثر على اكتشاف PCR.
3. أنبوب الحفظ: يجب اختيار مادة أنبوب الحفظ بعناية. هناك بيانات تشير إلى أن البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) يرتبط بامتصاص الحمض النووي ، وخاصة في تركيز أيون الشد العالي ، والبولي إيثيلين (البولي إيثيلين) هو أكثر تفضيلًا من البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) سهلة فهم الحمض النووي/الحمض النووي الريبي. تعتبر البلاستيك البلاستيكي البولي إيثيلين-بروبيلين (polyallomer) وبعض الحاويات البلاستيكية البولي بروبيلين المصنعة خصيصًا (البولي بروبيلين) أكثر ملاءمة لتخزين الحمض النووي الريبي/الحمض النووي الريبي. بالإضافة إلى ذلك ، عند استخدام مسحة قابلة للكسر ، يجب أن يحاول أنبوب التخزين تحديد حاوية بارتفاع أكبر من 8 سم لمنع حدوثها وتلوثها عند كسر المسحة.

4. الماء من أجل محلول الحفاظ على الإنتاج: يجب ترشيح المياه الفائقة المستخدمة في محلول الحفاظ على الإنتاج من خلال غشاء فائق الترشيح مع وزن جزيئي قدره 13000 لضمان إزالة شوائب البوليمر من المصادر البيولوجية ، مثل RNase ، DNase ، و Lenase ، و endotoxin ، و لا ينصح بالتنقية العادية. الماء أو الماء المقطر.

2. استخدام أنابيب أخذ عينات الفيروس

يتم تقسيم أخذ العينات باستخدام أنبوب أخذ عينات الفيروس إلى أخذ عينات من البلعوم وأخذ عينات البلعوم الأنفي:

1. وحدة.

2. أخذ عينات البلعوم الأنفي: قم بقياس المسافة من طرف الأنف إلى فص الأذن مع مسحة وعلامة بإصبع ، وأدخل مسحة أخذ العينات في تجويف الأنف في اتجاه الأنف العمودي (الوجه) ما لا يقل عن نصف طول فص الأذن إلى طرف الأنف ، اترك المسحة في الأنف لمدة 15-30 ثانية ، وتدوير بلطف 3-5 مرات ، وسحب المسحة.
ليس من الصعب رؤية طريقة الاستخدام ، سواء كانت مسحة البلعوم أو مسحة البلعوم الأنفي ، وأخذ العينات مهمة فنية ، وهي صعبة وملوسة. ترتبط جودة العينة التي تم جمعها مباشرة بالاكتشاف اللاحق. إذا كانت العينة التي تم جمعها لها حمولة فيروسية منخفضة ، فمن السهل التسبب في سلبيات خاطئة ، يصعب تأكيد التشخيص.