عدة أفكار حول أنبوب أخذ عينات الفيروسات

1. حول صناعة أنابيب أخذ العينات الفيروسية
تنتمي أنابيب أخذ عينات الفيروسات إلى منتجات الأجهزة الطبية. يتم تسجيل معظم الشركات المصنعة المحلية وفقًا لمنتجات الدرجة الأولى، ويتم تسجيل عدد قليل من الشركات وفقًا لمنتجات الدرجة الثانية. في الآونة الأخيرة، من أجل تلبية الاحتياجات الطارئة لووهان وأماكن أخرى، اتخذت العديد من الشركات "قناة الطوارئ" "التقدم بطلب للحصول على إذن تسجيل من الدرجة الأولى. يتكون أنبوب أخذ عينات الفيروسات من مسحة أخذ العينات ومحلول حفظ الفيروسات والتغليف الخارجي. نظرًا لعدم وجود معيار وطني موحد أو معيار صناعي، فإن منتجات الشركات المصنعة المختلفة تختلف بشكل كبير.

1. مسحة أخذ العينات: تتصل مسحة أخذ العينات مباشرة بموقع أخذ العينات، وترتبط مادة رأس أخذ العينات ارتباطًا وثيقًا بالكشف اللاحق. ينبغي أن يكون رأس مسحة أخذ العينات مصنوعًا من ألياف البوليستر الاصطناعية (PE) أو الحرير الصناعي (ألياف صناعية). لا يمكن استخدام إسفنجة ألجينات الكالسيوم أو مسحات العصي الخشبية (بما في ذلك عصي الخيزران)، ولا يمكن أن تكون مادة رأس المسحة منتجات قطنية. نظرًا لأن ألياف القطن تتمتع بامتصاص قوي للبروتين، فليس من السهل إزالتها في محلول التخزين اللاحق؛ وعندما يتم كسر عصا خشبية أو عصا من الخيزران تحتوي على ألجينات الكالسيوم ومكونات خشبية، فإن النقع في محلول التخزين سوف يمتص البروتين أيضًا، بل ويمكن أن يمنع تفاعل PCR اللاحق. يوصى باستخدام الألياف الاصطناعية مثل ألياف PE وألياف البوليستر وألياف البولي بروبيلين لمادة رأس المسحة. لا ينصح باستخدام الألياف الطبيعية مثل القطن. لا يُنصح باستخدام ألياف النايلون أيضًا لأن ألياف النايلون (المشابهة لرؤوس فرشاة الأسنان) تمتص الماء. ضعيف، مما يؤدي إلى عدم كفاية حجم العينات، مما يؤثر على معدل الكشف. إسفنجة ألجينات الكالسيوم محظورة لأخذ عينات من مواد المسحة! مقبض المسحة له نوعان: مكسور ومدمج. يتم وضع المسحة المكسورة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات، ويتم كسر غطاء الأنبوب بعد كسره من الموضع بالقرب من رأس أخذ العينات؛ تضع المسحة المدمجة مسحة أخذ العينات مباشرة في أنبوب التخزين بعد أخذ العينات، ويتم تصميم غطاء أنبوب أنبوب التخزين بمحاذاة الفتحة الصغيرة مع الجزء العلوي من المقبض وشد غطاء الأنبوب. وبمقارنة الطريقتين، فإن الأخيرة آمنة نسبيا. عندما يتم استخدام المسحة المكسورة مع أنبوب تخزين أصغر حجمًا، فقد يتسبب ذلك في تناثر السائل في الأنبوب عند كسره، ويجب إيلاء الاهتمام الكامل لخطر التلوث الناجم عن الاستخدام غير السليم للمنتج. يوصى باستخدام أنبوب مقذوف من البوليسترين المجوف (PS) أو أنبوب تجعيد حقن البولي بروبيلين (PP) لمادة مقبض المسحة. بغض النظر عن المادة المستخدمة، لا يمكن إضافة إضافات ألجينات الكالسيوم؛ أعواد خشبية أو أعواد خيزران. باختصار، يجب أن تتأكد مسحة أخذ العينات من كمية العينة وكمية الإطلاق، ويجب ألا تحتوي المواد المختارة على مواد تؤثر على الاختبار اللاحق.

2. محلول الحفاظ على الفيروسات: هناك نوعان من حلول الحفاظ على الفيروسات المستخدمة على نطاق واسع في السوق، أحدهما عبارة عن محلول صيانة فيروسات معدل على أساس وسيط النقل، والآخر عبارة عن محلول معدل لمحلول استخلاص الحمض النووي.
المكون الرئيسي للأول هو وسط الاستزراع الأساسي لـ Eagle (MEM) أو ملح هانك المتوازن، والذي يضاف مع الأملاح والأحماض الأمينية والفيتامينات والجلوكوز والبروتين الضروري لبقاء الفيروس. يستخدم محلول التخزين هذا ملح الصوديوم الأحمر الفينول كمؤشر ومحلول. عندما تكون قيمة الرقم الهيدروجيني 6.6-8.0، يكون المحلول ورديًا. تتم إضافة الجلوكوز والجلوتامين والبروتين الضروري إلى محلول الحفظ. يتم توفير البروتين على شكل مصل بقري جنيني أو ألبومين مصل بقري، والذي يمكنه تثبيت الغلاف البروتيني للفيروس. نظرًا لأن محلول الحفظ غني بالمواد المغذية، فهو يساعد على بقاء الفيروس ولكنه مفيد أيضًا لنمو البكتيريا. إذا كان محلول الحفظ ملوثا بالبكتيريا، فسوف تتكاثر بكميات كبيرة. سيؤدي ثاني أكسيد الكربون الموجود في مستقلباته إلى انخفاض درجة الحموضة في محلول الحفظ من اللون الوردي إلى اللون الأصفر. ولذلك، أضافت معظم الشركات المصنعة مكونات مضادة للبكتيريا إلى تركيباتها. العوامل المضادة للبكتيريا الموصى بها هي البنسلين والستربتومايسين والجنتاميسين والبوليميكسين ب. لا يوصى باستخدام أزيد الصوديوم و2-ميثيل مثبطات مثل 4-ميثيل-4-إيزوثيازولين-3-واحد (MCI) و5-كلورو-2-ميثيل-4 -إيزوثيازولين -3-وان (CMCI) لأن هذه المكونات لها تأثير على تفاعل PCR. نظرًا لأن العينة المقدمة بواسطة محلول الحفظ هذا هي في الأساس فيروس حي، فيمكن الحفاظ على أصالة العينة إلى أقصى حد، ويمكن استخدامها ليس فقط لاستخراج الأحماض النووية للفيروس والكشف عنها، ولكن أيضًا لزراعة و عزل الفيروسات. ومع ذلك، تجدر الإشارة إلى أنه عند استخدامه للكشف، يجب إجراء استخراج الحمض النووي وتنقيته بعد التعطيل.
نوع آخر من محاليل الحفظ يتم إعداده على أساس محلول استخلاص الحمض النووي، والمكونات الرئيسية هي الأملاح المتوازنة، وعامل خالب EDTA، وملح الجوانيدين (مثل إيزوثيوسيانات جوانيدين، وهيدروكلوريد جوانيدين، وما إلى ذلك)، والمواد الخافضة للتوتر السطحي الأنيونية (مثل دوديكان كبريتات الصوديوم)، والكاتيونية. المواد الخافضة للتوتر السطحي (مثل أكسالات رباعي ديسيل تريميثيل الأمونيوم)، والفينول، 8-هيدروكسي كينولين، ديثيوثريتول (DTT)، بروتيناز K ومكونات أخرى، محلول التخزين هذا هو تقطيع الفيروس مباشرة لإطلاق الحمض النووي والقضاء على RNase. إذا تم استخدامه فقط لـ RT-PCR، فهو أكثر ملاءمة، لكن المحللة يمكنها تعطيل الفيروس. لا يمكن استخدام هذا النوع من العينات لفصل ثقافة الفيروس.

يوصى باستخدام عامل خالب الأيونات المعدنية المستخدم في محلول حفظ الفيروسات باستخدام أملاح EDTA (مثل حمض ثنائي إيثيلين أمين رباعي أسيتيك ثنائي البوتاسيوم، وحمض إيثيلين أمين رباعي أسيتيك ثنائي الصوديوم، وما إلى ذلك)، ولا ينصح باستخدام الهيبارين (مثل هيبارين الصوديوم، وهيبارين الليثيوم)، حتى لا يؤثر على كشف PCR.
3. أنبوب الحفظ: يجب اختيار مادة أنبوب الحفظ بعناية. هناك بيانات تشير إلى أن مادة البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) مرتبطة بامتصاص الحمض النووي، خاصة عند تركيز أيونات التوتر العالي، والبولي إيثيلين (البولي إيثيلين) أكثر تفضيلاً من البولي بروبيلين (البولي بروبيلين) ومن السهل فهم الحمض النووي/الحمض النووي الريبوزي (RNA). يعتبر بلاستيك بوليمر البولي إيثيلين بروبيلين (Polyallomer) وبعض الحاويات البلاستيكية المصنوعة من مادة البولي بروبيلين (Polypropene) المعالجة خصيصًا أكثر ملاءمة لتخزين الحمض النووي/الحمض النووي الريبوزي (RNA). بالإضافة إلى ذلك، عند استخدام مسحة قابلة للكسر، يجب أن يحاول أنبوب التخزين اختيار حاوية يزيد ارتفاعها عن 8 سم لمنع تناثر المحتويات وتلوثها عند كسر المسحة.

4. الماء لمحلول الحفاظ على الإنتاج: يجب ترشيح الماء عالي النقاء المستخدم في محلول الحفاظ على الإنتاج من خلال غشاء الترشيح الفائق بوزن جزيئي يبلغ 13000 لضمان إزالة شوائب البوليمر من المصادر البيولوجية، مثل RNase، DNase، والسموم الداخلية، و لا ينصح بالتنقية العادية. الماء أو الماء المقطر.

2. استخدام أنابيب أخذ العينات الفيروسية

يتم تقسيم أخذ العينات باستخدام أنبوب أخذ عينات الفيروس بشكل أساسي إلى أخذ عينات من البلعوم الفموي وأخذ عينات من البلعوم الأنفي:

1. أخذ عينات من البلعوم: اضغط أولاً على اللسان باستخدام خافض اللسان، ثم قم بمد رأس مسحة أخذ العينات إلى الحلق لمسح اللوزتين البلعوميتين وجدار البلعوم الخلفي، وامسح جدار البلعوم الخلفي بقوة خفيفة، وتجنب لمس اللسان. وحدة.

2. أخذ عينة من البلعوم الأنفي: قم بقياس المسافة من طرف الأنف إلى شحمة الأذن بمسحة ووضع علامة بالإصبع، أدخل مسحة العينة في تجويف الأنف في اتجاه الأنف العمودي (الوجه)، يجب أن تمتد المسحة نصف طول شحمة الأذن على الأقل حتى طرف الأنف، واترك المسحة في الأنف لمدة 15-30 ثانية، ثم قم بتدويرها بلطف 3-5 مرات، ثم اسحب المسحة.
ليس من الصعب أن نرى من طريقة الاستخدام، سواء كانت مسحة من البلعوم أو مسحة من البلعوم الأنفي، أخذ العينات مهمة فنية، وهي صعبة وملوثة. ترتبط جودة العينة المجمعة ارتباطًا مباشرًا بالكشف اللاحق. إذا كانت العينة التي تم جمعها تحتوي على حمل فيروسي منخفض، فمن السهل أن تسبب نتائج سلبية كاذبة، ومن الصعب تأكيد التشخيص.