1. Аб вырабе прабірак для ўзяцця вірусаў
Прабіркі для ўзяцця вірусаў належаць да медыцынскіх вырабаў. Большая частка айчынных вытворцаў зарэгістраваная па прадукцыі першага гатунку, і нямногія кампаніі — па прадукцыі другога гатунку. Нядаўна, каб задаволіць надзвычайныя патрэбы Уханя і іншых месцаў, многія кампаніі скарысталіся «экстраным каналам» «Падаць заяўку на дазвол на першакласны запіс». Прабірка для ўзяцця вірусаў складаецца з тампона для ўзяцця проб, раствора для захавання вірусаў і знешняй упакоўкі. Паколькі адзінага нацыянальнага або галіновага стандарту не існуе, прадукцыя розных вытворцаў моцна адрозніваецца.
1. Тампон для адбору пробаў: тампон для адбору пробаў непасрэдна датыкаецца з месцам адбору пробаў, і матэрыял галоўкі для адбору пробаў цесна звязаны з наступным выяўленнем. Галоўка тампона для адбору пробаў павінна быць зроблена з поліэфірнага (ПЭ) сінтэтычнага валакна або віскозы (штучнае валакно). Губка з альгінату кальцыя або тампоны з драўлянай палачкі (уключаючы бамбукавыя палачкі) нельга выкарыстоўваць, а матэрыялам галоўкі тампона не могуць быць баваўняныя вырабы. Паколькі баваўнянае валакно мае моцную адсорбцыю бялку, яго няпроста элюіраваць у наступны раствор для захоўвання; і калі драўляная палачка або бамбукавая палачка, якая змяшчае альгінат кальцыя і драўляныя кампаненты, зламаная, замочванне ў растворы для захоўвання таксама адсарбуе бялок і нават можа затармазіць наступную рэакцыю ПЦР. Рэкамендуецца выкарыстоўваць сінтэтычныя валакна, такія як ПЭ валакно, поліэфірнае валакно і поліпрапіленавае валакно для матэрыялу галоўкі тампона. Натуральныя матэрыялы, такія як бавоўна, не рэкамендуюцца. Нейлонавыя валакна таксама не рэкамендуюцца, таму што нейлонавыя валакна (падобныя на насадкі для зубных шчотак) паглынаюць ваду. Дрэнна, што прыводзіць да недастатковага аб'ёму выбаркі, што ўплывае на хуткасць выяўлення. Губка з альгінату кальцыя забароненая для ўзяцця мазкоў! Ручка для тампона бывае двух відаў: ламаная і ўбудаваная. Зламаны тампон змяшчаюць у прабірку для захоўвання пасля ўзяцця пробы, а каўпачок прабіркі разбіваюць пасля таго, як яе зламалі з месца побач з галоўкай пробы; убудаваны тампон непасрэдна змяшчае тампон для адбору ў трубку для захоўвання пасля ўзяцця пробы, а вечка трубкі для захоўвання ўбудавана. Сумесціце невялікае адтуліну з верхняй часткай ручкі і зацягніце крышку трубкі. Калі параўноўваць абодва спосабу, то апошні з'яўляецца адносна бяспечным. Калі зламаны тампон выкарыстоўваецца ў спалучэнні з цюбікам для захоўвання меншага памеру, гэта можа выклікаць распырскванне вадкасці ў цюбіку, калі ён зламаны, і неабходна звярнуць поўную ўвагу на рызыку заражэння, выкліканага няправільным выкарыстаннем прадукту. Рэкамендуецца выкарыстоўваць полую экструдаваную трубку з полістыролу (PS) або поліпрапіленавую (PP) ін'екцыйную трубку для згінання ў якасці матэрыялу ручкі тампона. Незалежна ад таго, які матэрыял выкарыстоўваецца, нельга дадаваць дабаўкі альгіната кальцыя; драўляныя або бамбукавыя палачкі. Карацей кажучы, тампон для адбору пробаў павінен забяспечваць колькасць адбору пробаў і колькасць вылучэнняў, а ў выбраных матэрыялах не павінна быць рэчываў, якія ўплываюць на наступнае тэставанне.
2. Раствор для захавання вірусаў: на рынку шырока выкарыстоўваюцца два віды раствораў для захавання вірусаў: адзін - гэта раствор для падтрымання вірусаў, мадыфікаваны на аснове транспартнага асяроддзя, а другі - гэта мадыфікаваны раствор для экстракцыі лізата нуклеінавай кіслаты.
Асноўным кампанентам першага з'яўляецца асноўная пажыўная асяроддзе Ігла (MEM) або збалансаваная соль Хэнка, у якую дададзены солі, амінакіслоты, вітаміны, глюкоза і бялок, неабходныя для выжывання віруса. У гэтым растворы для захоўвання ў якасці індыкатара і раствора выкарыстоўваецца натрыевая соль чырвонага фенолу. Пры рн 6,6-8,0 раствор мае ружовы колер. Неабходную глюкозу, L-глютамін і бялок дадаюць у кансервавальны раствор. Бялок падаецца ў выглядзе фетальной бычынай сыроваткі або бычынага сыроватачна альбуміна, які можа стабілізаваць бялковую абалонку віруса. Паколькі раствор для захавання багаты пажыўнымі рэчывамі, ён спрыяе выжыванню віруса, але таксама спрыяе росту бактэрый. Калі раствор для захавання забруджаны бактэрыямі, яны будуць размнажацца ў вялікіх колькасцях. Дыяксід вугляроду ў яго метабалітах прывядзе да таго, што pH кансервацыйнага раствора панізіцца з ружовага, становіцца жоўтым. Таму большасць вытворцаў дадаюць у свае склады антыбактэрыйныя кампаненты. Рэкамендуемыя антыбактэрыйныя сродкі - пеніцылін, стрэптаміцын, гентаміцін і поліміксін B. Не рэкамендуюцца азід натрыю і 2-пазначаў. Такія інгібітары, як 4-пазначаў-4-ізатыазолін-3-он (MCI) і 5-хлор-2-пазначаў-4 -изотиазолин-3-он (CMCI), паколькі гэтыя кампаненты ўплываюць на рэакцыю ПЦР. Паколькі ўзор, атрыманы гэтым кансервавальным растворам, у асноўным з'яўляецца жывым вірусам, арыгінальнасць узору можа быць захавана ў найбольшай ступені, і яго можна выкарыстоўваць не толькі для экстракцыі і выяўлення нуклеінавых кіслот віруса, але і для культывавання і вылучэнне вірусаў. Аднак варта адзначыць, што пры выкарыстанні для выяўлення экстракцыю і ачыстку нуклеінавых кіслот неабходна праводзіць пасля інактывацыі.
Яшчэ адзін від кансервацыйнага раствора, прыгатаванага на аснове экстракцыйнага лізата нуклеінавых кіслот, асноўнымі кампанентамі якога з'яўляюцца збалансаваныя солі, хелатирующий агент ЭДТА, соль гуанідзіну (напрыклад, гуанідынізатыяцыянат, гуанідзіна гідрахларыд і г.д.), аніённае павярхоўна-актыўнае рэчыва (напрыклад, дадэкан сульфат натрыю), катыённы павярхоўна-актыўныя рэчывы (напрыклад, тетрадецилтриметиламмония оксалат), фенол, 8-гидроксихинолин, дитиотреитол (DTT), протеиназа K і іншыя кампаненты. Гэты раствор для захоўвання прызначаны для непасрэднага расшчаплення віруса для вызвалення нуклеінавай кіслаты і ліквідацыі РНКазы. Калі яго выкарыстоўваць толькі для RT-PCR, ён больш прыдатны, але лізат можа інактываваць вірус. Такі ўзор нельга выкарыстоўваць для падзелу культур вірусаў.
У якасці хелатирующего агента з іёнамі металаў, які выкарыстоўваецца ў растворы для захавання вірусаў, рэкамендуецца выкарыстоўваць солі ЭДТА (такія як этылендыямінтэтрауксусная кіслата дыкалія, этылендыямінтэтрауксусная кіслата дынатрыю і г.д.), і не рэкамендуецца выкарыстоўваць гепарын (напрыклад, гепарын натрыю, гепарын літыя), каб не паўплываць на выяўленне ПЦР.
3. Кансервацыйная трубка: Матэрыял кансервацыйнай трубкі трэба выбіраць старанна. Ёсць дадзеныя, якія сведчаць аб тым, што поліпрапілен (Polypropylene) звязаны з адсорбцыяй нуклеінавых кіслот, асабліва пры высокай канцэнтрацыі іёнаў напружання, поліэтылен (Polyethylene) з'яўляецца больш пераважным, чым поліпрапілен (Polypropylene). Лёгка ўспрымаць ДНК/РНК. Поліэтылен-прапіленавы палімер (Polyallomer) пластык і некаторыя спецыяльна апрацаваныя поліпрапіленавыя (Polypropylene) пластыкавыя кантэйнеры больш падыходзяць для захоўвання ДНК/РНК. Акрамя таго, пры выкарыстанні тампона, які можа разбівацца, для прабіркі для захоўвання трэба паспрабаваць выбраць кантэйнер вышынёй больш за 8 см, каб прадухіліць распырскванне і забруджванне змесціва пры разрыве тампона.
4. Вада для кансервацыйнага раствора для вытворчасці: звышчыстая вада, якая выкарыстоўваецца для кансервацыйнага раствора для вытворчасці, павінна фільтравацца праз ультрафільтрацыйную мембрану з малекулярнай масай 13000, каб забяспечыць выдаленне палімерных прымешак з біялагічных крыніц, такіх як РНКаза, ДНКаза і эндатаксіны, і звычайная ачыстка не рэкамендуецца. Вада або дыстыляваная вада.
2. Выкарыстанне прабірак для ўзяцця вірусаў
Узяцце пробаў з дапамогай прабіркі для ўзяцця вірусаў у асноўным дзеліцца на ўзяцце проб з ротаглоткі і пробы з насаглоткі:
1. Узяцце пробы з ротаглоткі: спачатку націсніце на мову пры дапамозе дэпрэсара мовы, затым працягніце галоўку тампона для ўзяцця ў горла, каб працерці двухбаковыя глоточные міндаліны і заднюю сценку глоткі, а затым працярыце заднюю сценку глоткі з лёгкай сілай, не дакранаючыся да мовы. адзінка.
2. Узяцце пробы з насаглоткі: вымерайце тампонам адлегласць ад кончыка носа да мочкі вуха і адзначце пальцам, увядзіце тампон для ўзяцця ў паражніну носа ў напрамку вертыкальнага носа (твара), тампон павінен працягвацца не менш за палову даўжыні мочкі вуха да кончыка носа. Пакіньце тампон у носе на 15-30 секунд, асцярожна круціце 3-5 разоў і выміце тампон.
Па спосабе выкарыстання няцяжка зразумець, будзь гэта мазок з ротаглоткі ці мазок з насаглоткі, адбор пробы - гэта тэхнічная задача, складаная і забруджаная. Якасць сабранага ўзору напрамую залежыць ад наступнага выяўлення. Калі сабраная проба мае нізкую вірусную нагрузку, лёгка выклікаць ілжывыя адмоўныя вынікі, цяжка пацвердзіць дыягназ.
Час публікацыі: 21 чэрвеня 2020 г
