1. Относно производството на епруветки за вземане на вирусни проби
Епруветките за вземане на проби от вируси принадлежат към медицински продукти. Повечето местни производители са регистрирани според първокласните продукти, а малко фирми са регистрирани според второкласните продукти. Наскоро, за да отговорят на спешните нужди на Ухан и други места, много компании са поели „канал за спешни случаи“ „Кандидатствайте за първокласно разрешение за запис. Епруветката за вземане на проби от вируси се състои от тампон за вземане на проби, разтвор за запазване на вируси и външна опаковка. Тъй като няма единен национален стандарт или индустриален стандарт, продуктите на различните производители се различават значително.
1. Тампон за вземане на проби: Тампонът за вземане на проби контактува директно с мястото за вземане на проби и материалът на главата за вземане на проби е тясно свързан с последващото откриване. Главата на тампона за вземане на проби трябва да бъде направена от синтетични влакна от полиестер (PE) или изкуствена коприна (изкуствени влакна). Гъба с калциев алгинат или тампони с дървени пръчици (включително бамбукови пръчици) не могат да се използват, а материалът на главата на тампона не може да бъде памучен продукт. Тъй като памучните влакна имат силна адсорбция на протеини, не е лесно да се елуират в последващия разтвор за съхранение; и когато дървена пръчка или бамбукова пръчка, съдържаща калциев алгинат и дървени компоненти, се счупи, накисването в разтвора за съхранение също ще адсорбира протеин и дори ще може да инхибира последващата PCR реакция. Препоръчва се използването на синтетични влакна като PE влакна, полиестерни влакна и полипропиленови влакна за материала на главата на тампона. Естествените влакна като памук не се препоръчват. Найлоновите влакна също не се препоръчват, защото найлоновите влакна (подобни на главите на четките за зъби) абсорбират вода. Слабо, което води до недостатъчен обем на вземане на проби, което влияе върху степента на откриване. Гъбата с калциев алгинат е забранена за вземане на проби от тампон! Дръжката за тампон е два вида: счупена и вградена. Счупеният тампон се поставя в епруветката за съхранение след вземане на проба, а капачката на епруветката се счупва след счупване от позиция близо до главата за вземане на проба; вграденият тампон директно поставя тампона за вземане на проби в тръбата за съхранение след вземане на пробата, а капакът на тръбата за съхранение е вграден. Подравнете малкия отвор с горната част на дръжката и затегнете капака на тръбата. Сравнявайки двата метода, последният е относително безопасен. Когато счупеният тампон се използва заедно с тубичка за съхранение с по-малък размер, това може да причини пръскане на течност в тубичката, когато се счупи, и трябва да се обърне пълно внимание на риска от замърсяване, причинен от неправилна употреба на продукта. Препоръчително е да използвате куха полистиролова (PS) екструдирана тръба или полипропиленова (PP) инжекционна бигована тръба за материала на дръжката на тампона. Без значение какъв материал се използва, не могат да се добавят добавки от калциев алгинат; дървени пръчки или бамбукови пръчки. Накратко, тампонът за вземане на проби трябва да гарантира количеството на вземане на проби и количеството на освобождаване, а избраните материали не трябва да съдържат вещества, които влияят на последващото тестване.
2. Решение за запазване на вируси: Има два вида разтвори за запазване на вируси, които се използват широко на пазара, единият е разтвор за поддържане на вируси, модифициран въз основа на транспортната среда, а другият е модифициран разтвор за лизат за екстракция на нуклеинова киселина.
Основният компонент на първото е основната културална среда на Eagle (MEM) или балансираната сол на Hank, към която се добавят солите, аминокиселините, витамините, глюкозата и протеините, необходими за оцеляването на вируса. Този разтвор за съхранение използва фенолночервена натриева сол като индикатор и разтвор. Когато рН е 6,6-8,0, разтворът е розов. Необходимата глюкоза, L-глутамин и протеин се добавят към разтвора за консервиране. Протеинът се предоставя под формата на фетален говежди серум или говежди серумен албумин, който може да стабилизира протеиновата обвивка на вируса. Тъй като разтворът за консервиране е богат на хранителни вещества, той благоприятства оцеляването на вируса, но също така е полезен за растежа на бактериите. Ако разтворът за консервиране е замърсен с бактерии, те ще се размножават в големи количества. Въглеродният диоксид в неговите метаболити ще доведе до падане на рН на разтвора за консервиране от розово. Става жълто. Поради това повечето производители са добавили антибактериални съставки към своите формулировки. Препоръчваните антибактериални средства са пеницилин, стрептомицин, гентамицин и полимиксин B. Натриев азид и 2-метил не се препоръчват Инхибитори като 4-метил-4-изотиазолин-3-он (MCI) и 5-хлоро-2-метил-4 -изотиазолин-3-он (CMCI), тъй като тези компоненти имат ефект върху PCR реакцията. Тъй като пробата, осигурена от този разтвор за консервиране, е основно жив вирус, оригиналността на пробата може да бъде запазена в най-голяма степен и тя може да се използва не само за извличане и откриване на вирусни нуклеинови киселини, но и за култивиране и изолиране на вируси. Все пак трябва да се отбележи, че когато се използва за откриване, екстракцията и пречистването на нуклеинова киселина трябва да се извършват след инактивиране.
Друг вид консервиращ разтвор, приготвен на базата на лизат за екстракция на нуклеинова киселина, основните компоненти са балансирани соли, EDTA хелатиращ агент, гуанидинова сол (като гуанидин изотиоцианат, гуанидин хидрохлорид и др.), анионно повърхностно активно вещество (като додекан натриев сулфат), катионен повърхностноактивни вещества (като тетрадецилтриметиламониев оксалат), фенол, 8-хидроксихинолин, дитиотреитол (DTT), протеиназа К и други компоненти. Този разтвор за съхранение е за директно разцепване на вируса, за да освободи нуклеиновата киселина и да елиминира РНКазата. Ако се използва само за RT-PCR, той е по-подходящ, но лизатът може да инактивира вируса. Този вид проба не може да се използва за разделяне на вирусна култура.
Хелатиращият агент с метални йони, използван в разтвора за запазване на вируса, се препоръчва да използва EDTA соли (като дикалиева етилендиаминтетраоцетна киселина, динатриева етилендиаминтетраоцетна киселина и др.) и не се препоръчва използването на хепарин (като натриев хепарин, литиев хепарин), за да не се повлияе на откриването на PCR.
3. Консервираща тръба: Материалът на консервиращата тръба трябва да бъде избран внимателно. Има данни, които предполагат, че полипропиленът (Polypropylene) е свързан с адсорбцията на нуклеинова киселина, особено при концентрация на йони с високо напрежение, полиетиленът (Polyethylene) е по-предпочитан от полипропилена (Polypropylene) Лесна за хващане ДНК/РНК. Полиетилен-пропилен полимер (Polyallomer) пластмаса и някои специално обработени полипропилен (Polypropylene) пластмасови контейнери са по-подходящи за съхранение на ДНК/РНК. Освен това, когато използвате чупещ се тампон, епруветката за съхранение трябва да се опита да избере контейнер с височина над 8 cm, за да предотвратите пръскане на съдържанието и замърсяване, когато тампонът се счупи.
4. Вода за разтвор за консервиране на производството: ултрачистата вода, използвана за разтвор за консервиране на производството, трябва да бъде филтрирана през ултрафилтрационна мембрана с молекулно тегло 13 000, за да се осигури отстраняването на полимерни примеси от биологични източници, като РНКаза, ДНКаза и ендотоксин, и обикновеното пречистване не се препоръчва. Вода или дестилирана вода.
2. Използване на епруветки за вземане на вирусни проби
Вземането на проби с помощта на епруветката за вземане на проби от вируси се разделя главно на вземане на проби от орофарингеал и назофарингеали:
1. Вземане на орофарингеална проба: Първо натиснете езика с езиковия депресор, след това изпънете главата на тампона за вземане на проба в гърлото, за да избършете двустранните фарингеални сливици и задната фарингеална стена, и избършете задната фарингеална стена с лека сила, избягвайте да докосвате езика единица.
2. Назофарингеална проба: измерете разстоянието от върха на носа до ушната мида с тампон и маркирайте с пръст, вкарайте тампона за вземане на проба в носната кухина по посока на вертикалния нос (лицето), тампонът трябва да се простира поне половината от дължината на ушната мида до върха на носа, оставете тампона в носа за 15-30 секунди, внимателно завъртете 3-5 пъти и извадете тампона.
Не е трудно да се види от начина на използване, дали е орофарингеален тампон или назофарингеален тампон, вземането на проби е техническа задача, която е трудна и замърсена. Качеството на събраната проба е пряко свързано с последващото откриване. Ако събраната проба има ниско вирусно натоварване, лесно е да се предизвикат фалшиви отрицателни резултати, трудно е да се потвърди диагнозата.
Време на публикуване: 21 юни 2020 г
