1. O proizvodnji epruveta za uzorkovanje virusa
Epruvete za uzorkovanje virusa pripadaju proizvodima medicinskih uređaja. Većina domaćih proizvođača registrovana je prema prvoklasnim proizvodima, a malo kompanija je registrovano prema proizvodima druge klase. Nedavno, kako bi zadovoljile hitne potrebe Wuhana i drugih mjesta, mnoge kompanije su uzele „kanal za hitne slučajeve“ „Prijavite se za prvoklasnu dozvolu za snimanje. Cijev za uzorkovanje virusa sastoji se od štapića za uzorkovanje, otopine za konzerviranje virusa i vanjskog pakovanja. Budući da ne postoji jedinstveni nacionalni standard ili industrijski standard, proizvodi različitih proizvođača uvelike se razlikuju.
1. Bris za uzorkovanje: Bris za uzorkovanje direktno kontaktira mjesto uzorkovanja, a materijal glave za uzorkovanje je usko povezan sa naknadnom detekcijom. Glava štapića za uzorkovanje treba biti izrađena od poliesterskog (PE) sintetičkog vlakna ili rajona (vještačko vlakno). Kalcijum alginatni sunđer ili štapići od drveta (uključujući štapiće od bambusa) ne mogu se koristiti, a materijal glave štapića ne može biti pamuk. Budući da pamučna vlakna imaju jaku adsorpciju proteina, nije ih lako eluirati u narednu otopinu za skladištenje; i kada se drveni štap ili bambusov štapić koji sadrži kalcijum alginat i drvene komponente razbije, namakanje u rastvoru za skladištenje će takođe adsorbovati protein, pa čak i može inhibirati naknadnu PCR reakciju. Preporučljivo je koristiti sintetička vlakna kao što su PE vlakna, poliesterska vlakna i polipropilenska vlakna za materijal glave štapića. Prirodna vlakna kao što je pamuk se ne preporučuju. Najlonska vlakna se također ne preporučuju jer najlonska vlakna (slično glavama četkice) upijaju vodu. Loše, što rezultira nedovoljnim volumenom uzorkovanja, što utiče na stopu detekcije. Kalcijum alginat sunđer je zabranjen za uzorkovanje materijala za bris! Drška štapića ima dva tipa: slomljena i ugrađena. Slomljeni bris se stavlja u epruvetu za skladištenje nakon uzorkovanja, a poklopac epruvete se lomi nakon što je slomljen sa položaja blizu glave za uzorkovanje; ugrađeni štapić direktno stavlja bris za uzorkovanje u epruvetu za skladištenje nakon uzorkovanja, a poklopac epruvete za skladištenje je ugrađen. Poravnajte malu rupu sa vrhom ručke i zategnite poklopac cevi. Upoređujući ove dvije metode, ova druga je relativno sigurna. Kada se slomljeni štapić koristi u kombinaciji s epruvetom manje veličine, može uzrokovati prskanje tekućine u epruveti kada se slomi, a punu pažnju treba obratiti na rizik od kontaminacije uzrokovane nepravilnom upotrebom proizvoda. Preporučljivo je koristiti šuplju ekstrudiranu cijev od polistirena (PS) ili cijev za ubrizgavanje polipropilena (PP) za materijal ručke štapića. Bez obzira koji se materijal koristi, aditivi kalcijum alginata se ne mogu dodavati; drveni štapići ili bambusovi štapići. Ukratko, bris za uzorkovanje treba da obezbedi količinu uzorkovanja i količinu oslobađanja, a odabrani materijali ne smeju imati supstance koje utiču na naknadno ispitivanje.
2. Rešenje za očuvanje virusa: Postoje dve vrste rešenja za očuvanje virusa koje se široko koriste na tržištu, jedno je rešenje za održavanje virusa modifikovano na osnovu transportnog medijuma, a drugo je modifikovano rešenje za lizat ekstrakcije nukleinske kiseline.
Glavna komponenta prvog je Eagle's Basic Kultur Medium (MEM) ili Hankova uravnotežena sol, kojoj se dodaju soli, aminokiseline, vitamini, glukoza i proteini neophodni za preživljavanje virusa. Ovaj rastvor za skladištenje koristi fenol crvenu natrijumovu so kao indikator i rastvor. Kada je pH vrijednost 6,6-8,0, otopina je ružičasta. Potrebna glukoza, L-glutamin i protein se dodaju u rastvor za konzerviranje. Protein se obezbjeđuje u obliku fetalnog goveđeg seruma ili goveđeg serumskog albumina, koji može stabilizirati proteinski omotač virusa. Budući da je rastvor za konzerviranje bogat nutrijentima, pogodan je za preživljavanje virusa, ali i za rast bakterija. Ako je otopina za konzerviranje kontaminirana bakterijama, ona će se razmnožavati u velikim količinama. Ugljični dioksid u njegovim metabolitima će uzrokovati pad pH otopine za konzerviranje s ružičaste. Požuti. Stoga je većina proizvođača dodala antibakterijske sastojke u svoje formulacije. Preporučeni antibakterijski agensi su penicilin, streptomicin, gentamicin i polimiksin B. Natrijum azid i 2-metil se ne preporučuju Inhibitori kao što su 4-metil-4-izotiazolin-3-on (MCI) i 5-kloro-2-metil-4 -izotiazolin-3-on (CMCI) jer ove komponente utiču na PCR reakciju. Budući da je uzorak koji daje ova otopina za konzerviranje u osnovi živi virus, originalnost uzorka se može zadržati u najvećoj mjeri, a može se koristiti ne samo za ekstrakciju i detekciju nukleinskih kiselina virusa, već i za uzgoj i izolacija virusa. Međutim, treba napomenuti da kada se koristi za detekciju, ekstrakcija nukleinske kiseline i pročišćavanje moraju biti izvedeni nakon inaktivacije.
Druga vrsta rastvora za konzerviranje pripremljena na bazi lizata ekstrakcije nukleinske kiseline, glavne komponente su uravnotežene soli, EDTA helirajući agens, gvanidin so (kao što je gvanidin izotiocijanat, gvanidin hidrohlorid, itd.), anionski surfaktant (kao što je dodekan natrijum sulfat), kationski surfaktanti (kao što je tetradeciltrimetilamonijum oksalat), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiotreitol (DTT), proteinaza K i druge komponente, Ovo rešenje za skladištenje je za direktno cepanje virusa kako bi se oslobodila nukleinska kiselina i eliminisala RNKaza. Ako se koristi samo za RT-PCR, prikladniji je, ali lizat može inaktivirati virus. Ova vrsta uzorka ne može se koristiti za odvajanje kulture virusa.
Za helirajuće sredstvo metalnih jona koji se koristi u otopini za očuvanje virusa preporučuje se korištenje EDTA soli (kao što su dikalijum etilendiamintetraoctena kiselina, dinatrijum etilendiamintetraoctena kiselina, itd.), a ne preporučuje se upotreba heparina (kao što je natrijum heparin, litijum heparin), kako ne bi uticali na PCR detekciju.
3. Tuba za konzerviranje: Materijal tube za konzerviranje treba pažljivo odabrati. Postoje podaci koji upućuju na to da je polipropilen (polipropilen) povezan sa adsorpcijom nukleinske kiseline, posebno pri koncentraciji jona visoke napetosti, polietilen (polietilen) je poželjniji od polipropilena (polipropilena). Lako shvatiti DNK/RNA. Polietilen-propilen polimer (polialomer) plastika i neki posebno obrađeni polipropilenski (polipropilen) plastični kontejneri su pogodniji za skladištenje DNK/RNA. Osim toga, kada se koristi lomljivi štapić, epruveta za skladištenje treba pokušati odabrati posudu s visinom većom od 8 cm kako bi se spriječilo prskanje i kontaminacija sadržaja kada se bris slomi.
4. Voda za proizvodno konzerviranje rastvora: Ultra čistu vodu koja se koristi za proizvodnu konzervaciju treba filtrirati kroz ultrafiltracijsku membranu molekulske težine od 13.000 kako bi se osiguralo uklanjanje polimernih nečistoća iz bioloških izvora, kao što su RNaza, Dnaza i endotoksin, i obično prečišćavanje se ne preporučuje. Voda ili destilovana voda.
2. Upotreba epruveta za uzorkovanje virusa
Uzimanje uzoraka pomoću epruvete za uzorkovanje virusa uglavnom se dijeli na uzorkovanje orofarinksa i uzorkovanje nazofarinksa:
1. Uzimanje orofaringealnog uzorka: Prvo pritisnite jezik depresorom jezika, zatim produžite glavu štapića za uzimanje uzorka u grlo da obrišete obostrane faringealne krajnike i stražnji zid ždrijela i laganom silom obrišite stražnji zid ždrijela, izbjegavajte dodirivanje jezika jedinica.
2. Uzimanje nazofarinksa: štapićem izmjerite udaljenost od vrha nosa do ušne resice i označite prstom, ubacite bris za uzorkovanje u nosnu šupljinu u smjeru okomitog nosa (lice), bris treba da se proteže najmanje pola dužine ušne školjke do vrha nosa, ostavite bris u nosu 15-30 sekundi, lagano ga rotirajte 3-5 puta i izvucite bris.
Iz načina upotrebe nije teško uočiti, da li se radi o brisu orofarinksa ili nazofaringealnog brisa, uzorkovanje je tehnički zadatak, koji je težak i kontaminiran. Kvalitet prikupljenog uzorka direktno je povezan sa naknadnom detekcijom. Ako prikupljeni uzorak ima virusno opterećenje nisko, lako je izazvati lažne negativne rezultate, teško je potvrditi dijagnozu.
Vrijeme objave: Jun-21-2020
