Diverses reflexions sobre el tub de mostreig de virus

1. Sobre la fabricació de tubs de mostreig de virus
Els tubs de mostreig de virus pertanyen a productes de dispositius mèdics. La majoria dels fabricants nacionals estan registrats segons els productes de primera classe i poques empreses estan registrades segons els productes de segona classe. Recentment, per tal de satisfer les necessitats d'emergència de Wuhan i d'altres llocs, moltes empreses han pres el "canal d'emergència" "Demaneu el permís de registre de primera classe. El tub de mostreig de virus es compon d'un hisop de mostreig, solució de preservació de virus i embalatge exterior. Com que no hi ha cap estàndard nacional unificat o estàndard de la indústria, els productes de diversos fabricants varien molt.

1. Hisop de mostreig: el hisop de mostreig contacta directament amb el lloc de mostreig i el material del capçal de mostreig està estretament relacionat amb la detecció posterior. El capçal de mostreig ha d'estar fet de fibra sintètica de polièster (PE) o de raió (fibra artificial). No es poden utilitzar esponges d'alginat de calci o bastonets de fusta (inclosos els pals de bambú) i el material del capçal de l'esponja no pot ser productes de cotó. Com que la fibra de cotó té una forta adsorció de proteïnes, no és fàcil eluir a la solució d'emmagatzematge posterior; i quan es trenca un pal de fusta o un pal de bambú que conté alginat de calci i components de fusta, el remull de la solució d'emmagatzematge també adsorbirà proteïnes, i fins i tot pot inhibir la reacció de PCR posterior. Es recomana utilitzar fibres sintètiques com la fibra de PE, la fibra de polièster i la fibra de polipropilè per al material del capçal del hisop. No es recomana utilitzar fibres naturals com el cotó. Les fibres de niló tampoc es recomanen perquè les fibres de niló (similars als capçals dels raspalls de dents) absorbeixen aigua. Pobre, donant lloc a un volum de mostreig insuficient, afectant la taxa de detecció. Es prohibeix l'esponja d'alginat de calci per a la presa de mostres de material de hisop! El mànec de hisop té dos tipus: trencat i integrat. El hisop trencat es col·loca al tub d'emmagatzematge després del mostreig i la tapa del tub es trenca després de trencar-se des de la posició propera al capçal de mostreig; el hisop integrat posa directament el hisop de mostreig al tub d'emmagatzematge després del mostreig, i la coberta del tub d'emmagatzematge està integrada. Alineeu el petit forat amb la part superior del mànec i premeu la coberta del tub. Comparant els dos mètodes, aquest últim és relativament segur. Quan el hisop trencat s'utilitza juntament amb un tub d'emmagatzematge de mida més petita, pot provocar esquitxades de líquid al tub quan es trenca, i s'ha de prestar tota l'atenció al risc de contaminació causat per un ús inadequat del producte. Es recomana utilitzar un tub extruït de poliestirè buit (PS) o un tub de plegat per injecció de polipropilè (PP) per al material del mànec del hisop. Independentment del material que s'utilitzi, no es poden afegir additius d'alginat de calci; pals de fusta o pals de bambú. En resum, el hisop de mostreig ha de garantir la quantitat de mostreig i la quantitat d'alliberament, i els materials seleccionats no han de tenir substàncies que afectin les proves posteriors.

2. Solució de preservació de virus: hi ha dos tipus de solucions de preservació de virus àmpliament utilitzades al mercat, una és una solució de manteniment de virus modificada en funció del medi de transport i l'altra és una solució modificada per al lisat d'extracció d'àcids nucleics.
El component principal del primer és el medi de cultiu bàsic d'Eagle (MEM) o la sal equilibrada de Hank, que s'afegeix amb les sals, aminoàcids, vitamines, glucosa i proteïnes necessàries per a la supervivència del virus. Aquesta solució d'emmagatzematge utilitza sal de sodi vermell fenol com a indicador i solució. Quan el valor del pH és de 6,6-8,0, la solució és rosa. La glucosa, L-glutamina i proteïnes necessàries s'afegeixen a la solució de conservació. La proteïna es proporciona en forma de sèrum boví fetal o albúmina sèrica bovina, que pot estabilitzar la closca proteica del virus. Com que la solució de conservació és rica en nutrients, és favorable a la supervivència del virus però també és beneficiosa per al creixement dels bacteris. Si la solució de conservació està contaminada amb bacteris, es multiplicarà en grans quantitats. El diòxid de carboni dels seus metabòlits farà que el pH de la solució de conservació caigui de rosa. Es torna groc. Per tant, la majoria dels fabricants han afegit ingredients antibacterians a les seves formulacions. Els agents antibacterians recomanats són la penicil·lina, l'estreptomicina, la gentamicina i la polimixina B. No es recomanen l'azida de sodi i el 2-metil Inhibidors com la 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) i el 5-cloro-2-metil-4 -isotiazolin-3-ona (CMCI) perquè aquests components tenen un efecte en la reacció de PCR. Com que la mostra proporcionada per aquesta solució de preservació és bàsicament un virus viu, l'originalitat de la mostra es pot mantenir al màxim, i es pot utilitzar no només per a l'extracció i detecció d'àcids nucleics del virus, sinó també per al cultiu i aïllament de virus. Tanmateix, cal tenir en compte que quan s'utilitza per a la detecció, l'extracció i purificació d'àcids nucleics s'han de realitzar després de la inactivació.
Un altre tipus de solució de conservació preparada a base de lisat d'extracció d'àcids nucleics, els components principals són sals equilibrades, agent quelant EDTA, sal de guanidina (com isotiocianat de guanidina, clorhidrat de guanidina, etc.), tensioactiu aniònic (com dodecà sulfat de sodi), catiònic. tensioactius (com ara oxalat de tetradeciltrimetilamoni), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteïnasa K i altres components, aquesta solució d'emmagatzematge és per escindir directament el virus per alliberar l'àcid nucleic i eliminar la RNasa. Si només s'utilitza per a RT-PCR, és més adequat, però el lisat pot inactivar el virus. Aquest tipus de mostra no es pot utilitzar per a la separació de cultius de virus.

Es recomana que l'agent quelant d'ions metàl·lics utilitzat a la solució de preservació del virus utilitzi sals EDTA (com l'àcid etilendiaminotetraacètic dipotassi, l'àcid etilendiaminotetraacètic disòdic, etc.), i no es recomana utilitzar heparina (com l'heparina sòdica, l'heparina de liti), per no afectar la detecció de PCR.
3. Tub de conservació: el material del tub de conservació s'ha de seleccionar amb cura. Hi ha dades que suggereixen que el polipropilè (polipropilè) està relacionat amb l'adsorció d'àcid nucleic, especialment a concentracions d'ions d'alta tensió, el polietilè (polietilè) és més preferit que el polipropilè (polipropilè) ADN/ARN fàcil d'agafar. El plàstic de polímer de polietilè-propilè (polialòmer) i alguns envasos de plàstic de polipropilè (polipropilè) processats especialment són més adequats per a l'emmagatzematge d'ADN/ARN. A més, quan s'utilitza un hisop trencable, el tub d'emmagatzematge ha d'intentar seleccionar un recipient amb una alçada superior a 8 cm per evitar que el contingut esquiqui i es contamini quan es trenqui el hisop.

4. Aigua per a la solució de preservació de la producció: l'aigua ultrapura utilitzada per a la solució de preservació de la producció s'ha de filtrar a través d'una membrana d'ultrafiltració amb un pes molecular de 13.000 per assegurar l'eliminació d'impureses de polímers de fonts biològiques, com ara RNasa, DNasa i endotoxina, i no es recomana la purificació ordinària. Aigua o aigua destil·lada.

2. Ús de tubs de mostreig de virus

El mostreig mitjançant el tub de mostreig de virus es divideix principalment en mostreig orofarínge i mostreig nasofarínge:

1. Mostra orofaríngia: primer premeu la llengua amb el depressor de la llengua i, a continuació, esteneu el cap del hisop de mostreig a la gola per netejar les amígdales faríngies bilaterals i la paret faríngia posterior i netegeu la paret faríngia posterior amb força lleugera, evitant tocar la llengua. unitat.

2. Mostra nasofaríngia: mesura la distància des de la punta del nas fins al lòbul de l'orella amb un hisop i marca amb un dit, introdueix el hisop de mostreig a la cavitat nasal en direcció al nas vertical (cara), el hisop s'ha d'estendre. almenys la meitat de la longitud del lòbul de l'orella fins a la punta del nas, deixeu el hisop al nas durant 15-30 segons, gireu suaument 3-5 vegades i retireu-lo.
No és difícil de veure des del mètode d'ús, ja sigui un hisop orofaríngi o un hisop nasofaríngi, el mostreig és una tasca tècnica, difícil i contaminada. La qualitat de la mostra recollida està directament relacionada amb la detecció posterior. Si la mostra recollida té una càrrega viral baixa, fàcil de provocar falsos negatius, difícil de confirmar el diagnòstic.