1. O výrobě zkumavek pro odběr virů
Zkumavky na odběr virů patří k produktům zdravotnických prostředků. Většina tuzemských výrobců je registrována podle prvotřídních výrobků a jen málo firem je registrováno podle výrobků druhé třídy. V poslední době, aby se vyhovělo nouzovým potřebám Wu-chanu a dalších míst, mnoho společností využilo „nouzový kanál“ „Požádejte o povolení k prvotřídnímu záznamu. Zkumavka na odběr viru se skládá ze vzorkovacího tamponu, roztoku pro konzervaci viru a vnějšího obalu. Protože neexistuje jednotná národní norma nebo průmyslová norma, produkty různých výrobců se velmi liší.
1. Vzorkovací tampon: Vzorkovací tampon se přímo dotýká místa odběru a materiál vzorkovací hlavy úzce souvisí s následnou detekcí. Hlava odběrového tamponu by měla být vyrobena z polyesterového (PE) syntetického vlákna nebo umělého vlákna. Nelze použít houbu z alginátu vápenatého nebo dřevěné tyčinky (včetně bambusových tyčinek) a materiál hlavy tamponu nesmí být bavlněné výrobky. Protože bavlněné vlákno má silnou adsorpci proteinu, není snadné jej eluovat do následného skladovacího roztoku; a když se rozbije dřevěná tyčinka nebo bambusová tyčinka obsahující alginát vápenatý a dřevěné složky, namáčení ve skladovacím roztoku také adsorbuje protein, a dokonce může inhibovat následnou PCR reakci. Pro materiál tampónové hlavy se doporučuje použít syntetická vlákna jako PE vlákno, polyesterové vlákno a polypropylenové vlákno. Přírodní vlákna, jako je bavlna, se nedoporučují. Nylonová vlákna se také nedoporučují, protože nylonová vlákna (podobně jako hlavice zubního kartáčku) absorbují vodu. Špatné, což má za následek nedostatečný objem vzorku, což ovlivňuje rychlost detekce. Houba s alginátem vápenatým je zakázána pro odběr materiálu tampónem! Rukojeť tamponu má dva typy: zlomená a vestavěná. Rozbitý tampon se po odběru umístí do skladovací zkumavky a uzávěr zkumavky se rozlomí po rozlomení z polohy blízko vzorkovací hlavy; vestavěný tampon vloží vzorkovací tampon přímo do skladovací zkumavky po odběru vzorků a kryt zkumavky je zabudován Zarovnejte malý otvor s horní částí rukojeti a utáhněte kryt zkumavky. Ve srovnání obou metod je ta druhá relativně bezpečná. Pokud je rozbitý tampon použit ve spojení se skladovací zkumavkou menší velikosti, může při rozbití způsobit vystříknutí kapaliny do zkumavky a je třeba věnovat plnou pozornost riziku kontaminace způsobené nesprávným použitím produktu. Jako materiál rukojeti tamponu se doporučuje použít dutou polystyrenovou (PS) extrudovanou trubici nebo polypropylenovou (PP) injekční rýhovací trubici. Bez ohledu na použitý materiál nelze přidávat přísady alginátu vápenatého; dřevěné tyče nebo bambusové tyče. Vzorkovací tampon by zkrátka měl zajistit množství odběru a množství uvolnění a vybrané materiály nesmí mít látky ovlivňující následné testování.
2. Řešení pro uchování virů: Na trhu jsou široce používané dva druhy roztoků pro uchování virů, jeden je roztok pro údržbu viru upravený na základě transportního média a druhý je modifikovaný roztok pro extrakci lyzátu nukleové kyseliny.
Hlavní složkou první je Eagle's basic kultivační médium (MEM) nebo Hankova vyvážená sůl, do které jsou přidány soli, aminokyseliny, vitamíny, glukóza a proteiny nezbytné pro přežití viru. Tento skladovací roztok používá sodnou sůl fenolové červeně jako indikátor a roztok. Při hodnotě pH 6,6-8,0 je roztok růžový. Do konzervačního roztoku se přidá potřebná glukóza, L-glutamin a protein. Protein je poskytován ve formě fetálního bovinního séra nebo hovězího sérového albuminu, které mohou stabilizovat proteinový obal viru. Protože konzervační roztok je bohatý na živiny, přispívá k přežití viru, ale také prospívá růstu bakterií. Pokud je konzervační roztok kontaminován bakteriemi, rozmnoží se ve velkém množství. Oxid uhličitý v jeho metabolitech způsobí, že pH konzervačního roztoku klesne z růžové barvy. Proto většina výrobců přidala do svých přípravků antibakteriální přísady. Doporučené antibakteriální látky jsou penicilin, streptomycin, gentamicin a polymyxin B. Azid sodný a 2-methyl se nedoporučují Inhibitory jako 4-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) a 5-chlor-2-methyl-4 -isothiazolin-3-on (CMCI), protože tyto složky mají vliv na PCR reakci. Vzhledem k tomu, že vzorek poskytovaný tímto konzervačním roztokem je v podstatě živý virus, lze v maximální míře zachovat originalitu vzorku a lze jej použít nejen pro extrakci a detekci nukleových kyselin viru, ale také pro kultivaci a izolace virů. Je však třeba poznamenat, že při použití pro detekci musí být extrakce a purifikace nukleové kyseliny provedena po inaktivaci.
Další druh konzervačního roztoku připraveného na bázi extrakčního lyzátu nukleové kyseliny, hlavními složkami jsou vyvážené soli, chelatační činidlo EDTA, sůl guanidinu (jako je guanidin isothiokyanát, guanidin hydrochlorid atd.), aniontové povrchově aktivní činidlo (jako je dodekan síran sodný), kationtové povrchově aktivní látky (jako je tetradecyltrimethylamonium oxalát), fenol, 8-hydroxychinolin, dithiothreitol (DTT), proteináza K a další složky. Tento skladovací roztok má přímo štěpit virus, aby se uvolnila nukleová kyselina a odstranila se RNáza. Pokud se používá pouze pro RT-PCR, je vhodnější, ale lyzát může inaktivovat virus. Tento druh vzorku nelze použít pro separaci virové kultury.
Chelatační činidlo na bázi kovových iontů používané v roztoku pro konzervaci virů se doporučuje pro použití solí EDTA (jako je kyselina ethylendiamintetraoctová dvojdraselná, kyselina ethylendiamintetraoctová disodná atd.) a nedoporučuje se používat heparin (jako je heparin sodný, heparin lithný), aby to neovlivnilo detekci PCR.
3. Konzervační zkumavka: Materiál konzervační zkumavky by měl být vybrán pečlivě. Existují údaje, které naznačují, že polypropylen (polypropylen) souvisí s adsorpcí nukleové kyseliny, zejména při vysoké koncentraci iontů, polyethylen (polyethylen) je výhodnější než polypropylen (polypropylen) Snadno uchopitelná DNA/RNA. Polyethylen-propylenový polymer (Polyallomer) plast a některé speciálně zpracované polypropylenové (Polypropylen) plastové nádoby jsou vhodnější pro skladování DNA/RNA. Kromě toho by se při použití rozbitného tampónu měla zkumavka pokusit vybrat nádobu s výškou větší než 8 cm, aby se zabránilo potřísnění a kontaminaci obsahu při rozbití tamponu.
4. Voda pro produkční konzervační roztok: Ultračistá voda použitá pro produkční konzervační roztok by měla být filtrována přes ultrafiltrační membránu s molekulovou hmotností 13 000, aby bylo zajištěno odstranění polymerních nečistot z biologických zdrojů, jako je RNáza, DNáza a endotoxin a běžné čištění se nedoporučuje. Voda nebo destilovaná voda.
2. Použití zkumavek pro odběr virů
Odběr vzorků pomocí zkumavky pro odběr virů se dělí hlavně na odběry z orofaryngu a odběry z nosohltanu:
1. Odběr vzorků z orofaryngu: Nejprve stiskněte jazyk jazykovým depresorem, poté natáhněte hlavu odběrového tamponu do hrdla, abyste otřeli oboustranné hltanové mandle a zadní stěnu hltanu, a otřete zadní stěnu hltanu lehkou silou, nedotýkejte se jazyka jednotka.
2. Odběr z nosohltanu: tampónem změřte vzdálenost od špičky nosu k ušnímu boltci a označte prstem, odběrový tampon vložte do nosní dutiny ve směru svislého nosu (obličeje), tampon by měl přesahovat nejméně v polovině délky ušního boltce ke špičce nosu. Nechte tampon v nose po dobu 15-30 sekund, jemně otočte 3-5krát a vytáhněte tampon.
Ze způsobu použití není těžké poznat, zda se jedná o orofaryngeální výtěr nebo výtěr z nosohltanu, odběr je technický úkol, který je obtížný a kontaminovaný. Kvalita odebraného vzorku přímo souvisí s následnou detekcí. Pokud má odebraný vzorek virovou nálož Nízká, snadno způsobí falešnou negativitu, obtížně se potvrdí diagnóza.
Čas odeslání: 21. června 2020
