1. Om fremstilling af virusprøverør
Virusprøverør tilhører produkter til medicinsk udstyr. De fleste indenlandske producenter er registreret efter førsteklasses produkter, og få virksomheder er registreret efter andenklasses produkter. For nylig, for at imødekomme nødbehovene i Wuhan og andre steder, har mange virksomheder taget "nødkanalen" "Ansøg om førsteklasses rekordtilladelse. Virusprøverøret er sammensat af en prøvetagningspind, viruskonserveringsopløsning og ydre emballage. Da der ikke er nogen samlet national standard eller industristandard, varierer produkterne fra forskellige producenter meget.
1. Prøvepodning: Prøvepodepinden kommer i direkte kontakt med prøvetagningsstedet, og materialet i prøvetagningshovedet er tæt forbundet med den efterfølgende detektion. Hovedet til prøveudtagningen skal være lavet af polyester (PE) syntetisk fiber eller Rayon (kunstfiber). Calciumalginatsvamp eller træpindepinde (inklusive bambuspinde) kan ikke bruges, og materialet i podehovedet kan ikke være bomuldsprodukter. Fordi bomuldsfibre har en stærk adsorption af protein, er det ikke let at eluere i den efterfølgende opbevaringsopløsning; og når en træpind eller bambuspind indeholdende calciumalginat og trækomponenter er knækket, vil opblødning i opbevaringsopløsningen også adsorbere protein, og det kan endda hæmme den efterfølgende PCR-reaktion. Det anbefales at bruge syntetiske fibre som PE-fiber, polyesterfiber og polypropylenfiber til materialet i podehovedet. Naturlige fibre såsom bomuld anbefales ikke. Nylonfibre anbefales heller ikke, fordi nylonfibre (svarende til tandbørstehoveder) absorberer vand. Dårlig, hvilket resulterer i utilstrækkelig prøvetagningsvolumen, hvilket påvirker detektionshastigheden. Calciumalginatsvamp er forbudt til prøvetagning af podepindsmateriale! Vatterhåndtag har to typer: knækket og indbygget. Den knækkede podepind anbringes i opbevaringsrøret efter prøvetagning, og rørhætten knækkes efter at være blevet brudt fra positionen nær prøveudtagningshovedet; den indbyggede podepind sætter prøvetagningsvaben direkte ind i opbevaringsrøret efter prøvetagning, og opbevaringsrørets dæksel er indbygget. Juster det lille hul med toppen af håndtaget, og stram rørdækslet. Sammenligner man de to metoder, er sidstnævnte relativt sikker. Når den knækkede vatpind bruges sammen med et opbevaringsrør af mindre størrelse, kan det forårsage væskesprøjt i røret, når det er knækket, og der skal være fuld opmærksomhed på risikoen for kontaminering forårsaget af forkert brug af produktet. Det anbefales at bruge hult polystyren (PS) ekstruderet rør eller polypropylen (PP) injektionsfolderør til materialet på vatpinden. Uanset hvilket materiale der bruges, kan calciumalginat-additiver ikke tilsættes; træpinde eller Bambuspinde. Kort sagt skal prøvetagningsvaben sikre mængden af prøveudtagning og mængden af frigivelse, og de udvalgte materialer må ikke have stoffer, der påvirker efterfølgende test.
2. Viruskonserveringsopløsning: Der er to slags viruskonserveringsopløsninger, der er meget udbredt på markedet, den ene er en virusvedligeholdelsesopløsning modificeret baseret på transportmediet, og den anden er en modificeret opløsning til nukleinsyreekstraktionslysat.
Hovedbestanddelen af førstnævnte er Eagles basiskulturmedium (MEM) eller Hanks balancerede salt, som tilsættes de salte, aminosyrer, vitaminer, glucose og protein, der er nødvendige for virusoverlevelse. Denne opbevaringsopløsning bruger phenolrødt natriumsalt som indikator og opløsning. Når pH-værdien er 6,6-8,0, er opløsningen lyserød. Den nødvendige glukose, L-glutamin og protein tilsættes til konserveringsopløsningen. Proteinet leveres i form af føtalt bovint serum eller bovint serumalbumin, som kan stabilisere virusets proteinskal. Fordi konserveringsopløsningen er rig på næringsstoffer, er den befordrende for virussens overlevelse, men også gavnlig for væksten af bakterier. Hvis konserveringsopløsningen er forurenet med bakterier, vil den formere sig i store mængder. Kuldioxiden i dets metabolitter vil få konserveringsopløsningens pH til at falde fra pink. Bliver gul. Derfor har de fleste producenter tilføjet antibakterielle ingredienser til deres formuleringer. De anbefalede antibakterielle midler er penicillin, streptomycin, gentamicin og polymyxin B. Natriumazid og 2-methyl anbefales ikke. Inhibitorer såsom 4-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) og 5-chlor-2-methyl-4 -isothiazolin-3-on (CMCI), fordi disse komponenter har en effekt på PCR-reaktionen. Da prøven leveret af denne konserveringsopløsning dybest set er en levende virus, kan originaliteten af prøven bevares i størst muligt omfang, og den kan bruges ikke kun til ekstraktion og påvisning af virusnukleinsyrer, men også til dyrkning og isolering af vira. Det skal dog bemærkes, at når det bruges til påvisning, skal nukleinsyreekstraktion og oprensning udføres efter inaktivering.
En anden form for konserveringsopløsning fremstillet baseret på nukleinsyreekstraktionslysat, hovedkomponenterne er balancerede salte, EDTA-chelateringsmiddel, guanidinsalt (såsom guanidinisothiocyanat, guanidinhydrochlorid osv.), anionisk overfladeaktivt stof (såsom dodecannatriumsulfat), kationisk overfladeaktive stoffer (såsom tetradecyltrimethylammoniumoxalat), phenol, 8-hydroxyquinolin, dithiothreitol (DTT), proteinase K og andre komponenter, Denne opbevaringsopløsning skal direkte spalte virussen for at frigive nukleinsyren og eliminere RNase. Hvis det kun bruges til RT-PCR, er det mere egnet, men lysatet kan inaktivere virussen. Denne type prøve kan ikke bruges til viruskulturseparation.
Metalion-chelateringsmidlet, der anvendes i viruskonserveringsopløsningen, anbefales at bruge EDTA-salte (såsom dikaliumethylendiamintetraeddikesyre, dinatriumethylendiamintetraeddikesyre osv.), og det anbefales ikke at bruge heparin (såsom natriumheparin, lithiumheparin), for ikke at påvirke PCR-detektion.
3. Konserveringsrør: Materialet i konserveringsrøret bør vælges omhyggeligt. Der er data, der tyder på, at polypropylen (polypropylen) er relateret til adsorptionen af nukleinsyre, især ved højspændingsionkoncentration er polyethylen (polyethylen) mere foretrukket end polypropylen (polypropylen) Nemt at forstå DNA/RNA. Polyethylen-propylen polymer (Polyallomer) plast og nogle specialforarbejdede polypropylen (Polypropylen) plastikbeholdere er mere egnede til DNA/RNA opbevaring. Derudover skal opbevaringsrøret, når du bruger en knækkelig vatpind, forsøge at vælge en beholder med en højde på over 8 cm for at forhindre, at indholdet sprøjtes og forurenes, når podepinden knækkes.
4. Vand til produktionskonserveringsopløsning: Det ultrarene vand, der anvendes til produktionskonserveringsopløsning, skal filtreres gennem en ultrafiltreringsmembran med en molekylvægt på 13.000 for at sikre fjernelse af polymerurenheder fra biologiske kilder, såsom RNase, DNase og endotoksin, og almindelig rensning anbefales ikke. Vand eller destilleret vand.
2. Brug af virusprøverør
Prøvetagning ved hjælp af virusprøvetagningsrøret er hovedsageligt opdelt i orofaryngeal prøvetagning og nasopharyngeal prøvetagning:
1. Orofaryngeal prøveudtagning: Tryk først på tungen med tungepressoren, stræk derefter hovedet af prøvetagningspinden ind i svælget for at aftørre de bilaterale svælgmandler og den bagerste svælgvæg, og tør den bagerste svælgvæg med let kraft, undgå at røre ved tungen enhed.
2. Nasopharyngeal prøvetagning: mål afstanden fra næsespidsen til øreflippen med en vatpind og markér med en finger, indfør prøvetagningsvaben ind i næsehulen i retning af den lodrette næse (ansigt), podepinden skal strække sig mindst halvdelen af øreflippens længde til næsetippen, lad podepinden blive i næsen i 15-30 sekunder, drej forsigtigt 3-5 gange, og træk podepinden ud.
Det er ikke svært at se ud fra brugsmetoden, om det er en orofaryngeal podning eller en nasopharyngeal podning, prøveudtagning er en teknisk opgave, som er vanskelig og forurenet. Kvaliteten af den indsamlede prøve er direkte relateret til den efterfølgende påvisning. Hvis den indsamlede prøve har en viral load Lav, let at forårsage falske negativer, vanskeligt at bekræfte diagnosen.
Indlægstid: 21-jun-2020
