Einige Gedanken zum Virus-Probenahmeröhrchen

1. Über die Herstellung von Virus-Probenahmeröhrchen
Virenentnahmeröhrchen gehören zu den Medizinprodukten. Die meisten inländischen Hersteller sind nach Produkten der ersten Klasse registriert, und nur wenige Unternehmen sind nach Produkten der zweiten Klasse registriert. Um den Notfallbedürfnissen von Wuhan und anderen Orten gerecht zu werden, haben viele Unternehmen in letzter Zeit den „Notfallkanal“ genutzt: „Beantragen Sie die erstklassige Aufnahmegenehmigung.“ Das Virus-Probenahmeröhrchen besteht aus einem Probentupfer, einer Viruskonservierungslösung und einer Umverpackung. Da es keinen einheitlichen nationalen Standard oder Industriestandard gibt, variieren die Produkte verschiedener Hersteller stark.

1. Probenahmetupfer: Der Probenahmetupfer berührt direkt die Probenahmestelle und das Material des Probenahmekopfes steht in engem Zusammenhang mit der nachfolgenden Erkennung. Der Probentupferkopf sollte aus synthetischer Polyesterfaser (PE) oder Rayon (Kunstfaser) bestehen. Kalziumalginatschwamm oder Holzstäbchentupfer (einschließlich Bambusstäbchen) können nicht verwendet werden, und das Material des Tupferkopfes darf nicht aus Baumwollprodukten bestehen. Da Baumwollfasern eine starke Proteinadsorption aufweisen, ist es nicht einfach, sie in die anschließende Aufbewahrungslösung zu lösen. Und wenn ein Holzstab oder Bambusstab, der Calciumalginat und Holzbestandteile enthält, zerbricht, wird durch das Einweichen in die Aufbewahrungslösung auch Protein adsorbiert und sogar die nachfolgende PCR-Reaktion gehemmt. Es wird empfohlen, für das Material des Tupferkopfes synthetische Fasern wie PE-Fasern, Polyesterfasern und Polypropylenfasern zu verwenden. Naturfasern wie Baumwolle werden nicht empfohlen. Nylonfasern werden ebenfalls nicht empfohlen, da Nylonfasern (ähnlich wie Zahnbürstenköpfe) Wasser absorbieren. Schlecht, was zu einem unzureichenden Probenvolumen führt und die Erkennungsrate beeinträchtigt. Calciumalginatschwamm ist für die Probenahme von Abstrichmaterial verboten! Es gibt zwei Arten von Tupfergriffen: gebrochen und eingebaut. Der zerbrochene Tupfer wird nach der Probenahme in das Aufbewahrungsröhrchen gegeben, und der Röhrchendeckel wird zerbrochen, nachdem er von der Position in der Nähe des Probenahmekopfes aus zerbrochen wurde; Der eingebaute Tupfer steckt den Probenahmetupfer nach der Probenahme direkt in das Aufbewahrungsröhrchen, und die Röhrchenabdeckung des Aufbewahrungsröhrchens ist eingebaut. Richten Sie das kleine Loch an der Oberseite des Griffs aus und ziehen Sie die Röhrchenabdeckung fest. Im Vergleich der beiden Methoden ist letztere relativ sicher. Wenn der zerbrochene Tupfer in Verbindung mit einem Aufbewahrungsröhrchen kleinerer Größe verwendet wird, kann es beim Zerbrechen zu Flüssigkeitsspritzern im Röhrchen kommen, und es sollte dem Risiko einer Kontamination durch unsachgemäßen Gebrauch des Produkts volle Aufmerksamkeit geschenkt werden. Als Material für den Tupfergriff wird die Verwendung eines extrudierten Hohlschlauchs aus Polystyrol (PS) oder eines Injektionsfaltschlauchs aus Polypropylen (PP) empfohlen. Unabhängig vom verwendeten Material ist die Zugabe von Calciumalginat-Zusätzen nicht möglich; Holzstäbchen oder Bambusstäbchen. Kurz gesagt, der Probenahmetupfer sollte die Menge der Probenahme und die Menge der Freisetzung sicherstellen, und die ausgewählten Materialien dürfen keine Substanzen enthalten, die die nachfolgende Prüfung beeinträchtigen.

2. Viruskonservierungslösung: Es gibt zwei Arten von Viruskonservierungslösungen, die auf dem Markt weit verbreitet sind: eine ist eine Viruserhaltungslösung, die auf der Grundlage des Transportmediums modifiziert ist, und die andere ist eine modifizierte Lösung für Nukleinsäureextraktionslysat.
Der Hauptbestandteil des ersteren ist Eagle's Basic Culture Medium (MEM) oder Hank's Balanced Salt, dem die für das Überleben des Virus notwendigen Salze, Aminosäuren, Vitamine, Glukose und Proteine ​​zugesetzt werden. Diese Aufbewahrungslösung verwendet Phenolrot-Natriumsalz als Indikator und Lösung. Bei einem pH-Wert von 6,6-8,0 ist die Lösung rosa. Der Konservierungslösung werden die notwendigen Glukose, L-Glutamin und Protein zugesetzt. Das Protein wird in Form von fötalem Rinderserum oder Rinderserumalbumin bereitgestellt, das die Proteinhülle des Virus stabilisieren kann. Da die Konservierungslösung reich an Nährstoffen ist, fördert sie das Überleben des Virus, fördert aber auch das Wachstum von Bakterien. Wenn die Konservierungslösung mit Bakterien verunreinigt ist, vermehren sich diese in großen Mengen. Das Kohlendioxid in seinen Metaboliten führt dazu, dass der pH-Wert der Konservierungslösung von rosa auf gelb fällt. Daher haben die meisten Hersteller ihren Rezepturen antibakterielle Inhaltsstoffe hinzugefügt. Die empfohlenen antibakteriellen Wirkstoffe sind Penicillin, Streptomycin, Gentamicin und Polymyxin B. Natriumazid und 2-Methyl werden nicht empfohlen. Inhibitoren wie 4-Methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) und 5-Chlor-2-methyl-4 -Isothiazolin-3-on (CMCI), da diese Komponenten einen Einfluss auf die PCR-Reaktion haben. Da es sich bei der durch diese Konservierungslösung bereitgestellten Probe im Wesentlichen um ein lebendes Virus handelt, kann die Originalität der Probe weitestgehend erhalten bleiben und sie kann nicht nur für die Extraktion und den Nachweis von Virusnukleinsäuren, sondern auch für die Kultivierung und Verwendung verwendet werden Isolierung von Viren. Es ist jedoch zu beachten, dass bei Verwendung zum Nachweis die Nukleinsäureextraktion und -reinigung nach der Inaktivierung durchgeführt werden muss.
Eine andere Art von Konservierungslösung, die auf der Basis von Nukleinsäureextraktionslysat hergestellt wird. Die Hauptbestandteile sind ausgewogene Salze, EDTA-Chelatbildner, Guanidinsalz (wie Guanidinisothiocyanat, Guanidinhydrochlorid usw.), anionisches Tensid (wie Dodecan-Natriumsulfat) und kationisches Tensid Tenside (wie Tetradecyltrimethylammoniumoxalat), Phenol, 8-Hydroxychinolin, Dithiothreitol (DTT), Proteinase K und andere Komponenten. Diese Aufbewahrungslösung dient dazu, das Virus direkt zu spalten, um die Nukleinsäure freizusetzen und die RNase zu eliminieren. Wenn es nur für RT-PCR verwendet wird, ist es besser geeignet, aber das Lysat kann das Virus inaktivieren. Diese Art von Probe kann nicht zur Trennung von Viruskulturen verwendet werden.

Als Metallionen-Chelatbildner, der in der Viruskonservierungslösung verwendet wird, wird die Verwendung von EDTA-Salzen (z. B. Dikaliumethylendiamintetraessigsäure, Dinatriumethylendiamintetraessigsäure usw.) empfohlen. Die Verwendung von Heparin (z. B. Natriumheparin, Lithiumheparin) wird nicht empfohlen. um den PCR-Nachweis nicht zu beeinträchtigen.
3. Konservierungsröhrchen: Das Material des Konservierungsröhrchens sollte sorgfältig ausgewählt werden. Es gibt Daten, die darauf hinweisen, dass Polypropylen (Polypropylen) mit der Adsorption von Nukleinsäure zusammenhängt, insbesondere bei hoher Ionenkonzentration. Polyethylen (Polyethylen) ist gegenüber Polypropylen (Polypropylen) bevorzugt. DNA/RNA ist leicht zu erfassen. Kunststoffbehälter aus Polyethylen-Propylen-Polymer (Polyallomer) und einige speziell verarbeitete Kunststoffbehälter aus Polypropylen (Polypropylen) eignen sich besser für die Aufbewahrung von DNA/RNA. Darüber hinaus sollte bei Verwendung eines zerbrechlichen Tupfers für das Aufbewahrungsröhrchen versucht werden, einen Behälter mit einer Höhe von mehr als 8 cm auszuwählen, um zu verhindern, dass der Inhalt verspritzt und kontaminiert wird, wenn der Tupfer zerbrochen ist.

4. Wasser für die Produktionskonservierungslösung: Das für die Produktionskonservierungslösung verwendete Reinstwasser sollte durch eine Ultrafiltrationsmembran mit einem Molekulargewicht von 13.000 gefiltert werden, um die Entfernung von Polymerverunreinigungen aus biologischen Quellen wie RNase, DNase und Endotoxin sicherzustellen Eine normale Reinigung wird nicht empfohlen. Wasser oder destilliertes Wasser.

2. Verwendung von Virenprobenahmeröhrchen

Die Probenahme mit dem Virus-Probenahmeröhrchen wird hauptsächlich in oropharyngeale und nasopharyngeale Probenahme unterteilt:

1. Oropharyngeale Probenahme: Drücken Sie zuerst mit dem Zungenspatel auf die Zunge, strecken Sie dann den Kopf des Probenahmetupfers in den Rachen, um die bilateralen Rachenmandeln und die hintere Rachenwand abzuwischen, und wischen Sie die hintere Rachenwand mit leichter Kraft ab. Vermeiden Sie es, die Zunge zu berühren Einheit.

2. Nasopharyngeale Probenahme: Messen Sie den Abstand von der Nasenspitze bis zum Ohrläppchen mit einem Tupfer und markieren Sie ihn mit einem Finger. Führen Sie den Probenahmetupfer in Richtung der vertikalen Nase (Gesicht) in die Nasenhöhle ein. Der Tupfer sollte herausragen Mindestens die halbe Länge des Ohrläppchens bis zur Nasenspitze. Lassen Sie den Tupfer 15 bis 30 Sekunden lang in der Nase, drehen Sie ihn vorsichtig drei bis fünf Mal und ziehen Sie den Tupfer heraus.
Anhand der Verwendungsmethode ist nicht schwer zu erkennen, ob es sich um einen oropharyngealen Abstrich oder einen nasopharyngealen Abstrich handelt. Die Probenahme ist eine technische Aufgabe, die schwierig und kontaminierend ist. Die Qualität der gesammelten Probe steht in direktem Zusammenhang mit der anschließenden Detektion. Wenn die entnommene Probe eine niedrige Viruslast aufweist, kann es leicht zu falsch negativen Ergebnissen kommen und es ist schwierig, die Diagnose zu bestätigen.