1. Σχετικά με την κατασκευή σωλήνων δειγματοληψίας ιών
Οι σωλήνες δειγματοληψίας ιών ανήκουν σε προϊόντα ιατροτεχνολογικών προϊόντων. Οι περισσότεροι εγχώριοι κατασκευαστές είναι εγγεγραμμένοι σύμφωνα με τα προϊόντα πρώτης κατηγορίας και λίγες εταιρείες είναι εγγεγραμμένες σύμφωνα με τα προϊόντα δεύτερης κατηγορίας. Πρόσφατα, για να καλύψουν τις ανάγκες έκτακτης ανάγκης της Γουχάν και άλλων περιοχών, πολλές εταιρείες χρησιμοποίησαν το «κανάλι έκτακτης ανάγκης» «Αίτηση για άδεια εγγραφής πρώτης κατηγορίας. Ο σωλήνας δειγματοληψίας ιού αποτελείται από ένα στυλεό δειγματοληψίας, διάλυμα διατήρησης του ιού και εξωτερική συσκευασία. Δεδομένου ότι δεν υπάρχει ενιαίο εθνικό πρότυπο ή βιομηχανικό πρότυπο, τα προϊόντα διαφόρων κατασκευαστών διαφέρουν πολύ.
1. Μάκτρο δειγματοληψίας: Το στυλεό δειγματοληψίας έρχεται απευθείας σε επαφή με τη θέση δειγματοληψίας και το υλικό της κεφαλής δειγματοληψίας σχετίζεται στενά με την επακόλουθη ανίχνευση. Η κεφαλή του επιχρίσματος δειγματοληψίας θα πρέπει να είναι κατασκευασμένη από πολυεστέρα (PE) συνθετική ίνα ή ρεγιόν (τεχνητή ίνα). Δεν μπορούν να χρησιμοποιηθούν σφουγγάρια αλγινικού ασβεστίου ή ξύλινες μπατονέτες (συμπεριλαμβανομένων των ραβδιών μπαμπού) και το υλικό της κεφαλής της μπατονέτας δεν μπορεί να είναι προϊόντα από βαμβάκι. Επειδή οι ίνες βαμβακιού έχουν ισχυρή προσρόφηση πρωτεΐνης, δεν είναι εύκολο να εκλούονται στο επόμενο διάλυμα αποθήκευσης. και όταν σπάσει ένα ξύλινο ραβδί ή μπαμπού που περιέχει αλγινικό ασβέστιο και ξύλινα εξαρτήματα, η εμβάπτιση στο διάλυμα αποθήκευσης θα προσροφήσει επίσης πρωτεΐνη, και ακόμη και μπορεί να αναστείλει την επακόλουθη αντίδραση PCR. Συνιστάται η χρήση συνθετικών ινών όπως ίνες PE, ίνες πολυεστέρα και ίνες πολυπροπυλενίου για το υλικό της κεφαλής της μπατονέτας. Δεν συνιστώνται φυσικές ίνες όπως το βαμβάκι. Οι ίνες νάιλον δεν συνιστώνται επίσης επειδή οι ίνες νάιλον (παρόμοιες με τις κεφαλές της οδοντόβουρτσας) απορροφούν νερό. Κακή, με αποτέλεσμα ανεπαρκή όγκο δειγματοληψίας, επηρεάζοντας τον ρυθμό ανίχνευσης. Το σφουγγάρι αλγινικού ασβεστίου απαγορεύεται για δειγματοληψία υλικού επιχρίσματος! Η λαβή μπατονέτας έχει δύο τύπους: σπασμένη και ενσωματωμένη. Το σπασμένο στυλεό τοποθετείται στο σωλήνα αποθήκευσης μετά τη δειγματοληψία και το καπάκι του σωλήνα σπάει αφού σπάσει από τη θέση κοντά στην κεφαλή δειγματοληψίας. το ενσωματωμένο μάκτρο τοποθετεί απευθείας το στυλεό δειγματοληψίας στο σωλήνα αποθήκευσης μετά τη δειγματοληψία και το κάλυμμα του σωλήνα αποθήκευσης είναι ενσωματωμένο Ευθυγραμμίστε τη μικρή οπή με το πάνω μέρος της λαβής και σφίξτε το κάλυμμα του σωλήνα. Συγκρίνοντας τις δύο μεθόδους, η τελευταία είναι σχετικά ασφαλής. Όταν η σπασμένη μπατονέτα χρησιμοποιείται σε συνδυασμό με ένα μικρότερου μεγέθους σωλήνα αποθήκευσης, μπορεί να προκαλέσει πιτσίλισμα υγρού στο σωληνάριο όταν σπάσει και θα πρέπει να δίνεται πλήρης προσοχή στον κίνδυνο μόλυνσης που προκαλείται από ακατάλληλη χρήση του προϊόντος. Συνιστάται η χρήση κοίλου σωλήνα εξώθησης πολυστυρενίου (PS) ή σωλήνα έγχυσης τσακίσματος από πολυπροπυλένιο (PP) για το υλικό της λαβής του στυλεού. Ανεξάρτητα από το υλικό που χρησιμοποιείται, δεν μπορούν να προστεθούν πρόσθετα αλγινικού ασβεστίου. ξύλινα μπαστούνια ή μπαστούνια μπαμπού. Εν ολίγοις, το στυλεό δειγματοληψίας θα πρέπει να διασφαλίζει την ποσότητα δειγματοληψίας και την ποσότητα απελευθέρωσης και τα επιλεγμένα υλικά δεν πρέπει να έχουν ουσίες που επηρεάζουν τις επόμενες δοκιμές.
2. Διάλυμα συντήρησης ιών: Υπάρχουν δύο είδη διαλυμάτων συντήρησης ιών που χρησιμοποιούνται ευρέως στην αγορά, το ένα είναι ένα διάλυμα συντήρησης ιών τροποποιημένο με βάση το μέσο μεταφοράς και το άλλο είναι ένα τροποποιημένο διάλυμα για το λύμα εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος.
Το κύριο συστατικό του πρώτου είναι το βασικό μέσο καλλιέργειας του Eagle (MEM) ή το ισορροπημένο άλας του Hank, το οποίο προστίθεται με τα άλατα, τα αμινοξέα, τις βιταμίνες, τη γλυκόζη και τις πρωτεΐνες που είναι απαραίτητα για την επιβίωση του ιού. Αυτό το διάλυμα αποθήκευσης χρησιμοποιεί άλας νατρίου ερυθρού φαινόλης ως δείκτη και διάλυμα. Όταν η τιμή του pH είναι 6,6-8,0, το διάλυμα είναι ροζ. Στο διάλυμα συντήρησης προστίθενται η απαραίτητη γλυκόζη, L-γλουταμίνη και πρωτεΐνη. Η πρωτεΐνη παρέχεται με τη μορφή εμβρυϊκού βόειου ορού ή αλβουμίνης βόειου ορού, η οποία μπορεί να σταθεροποιήσει το πρωτεϊνικό κέλυφος του ιού. Επειδή το διάλυμα συντήρησης είναι πλούσιο σε θρεπτικά συστατικά, ευνοεί την επιβίωση του ιού αλλά και ευεργετικό για την ανάπτυξη βακτηρίων. Εάν το διάλυμα συντήρησης είναι μολυσμένο με βακτήρια, θα πολλαπλασιαστεί σε μεγάλες ποσότητες. Το διοξείδιο του άνθρακα στους μεταβολίτες του θα προκαλέσει πτώση του pH του διαλύματος συντήρησης από το ροζ Γίνεται κίτρινο. Ως εκ τούτου, οι περισσότεροι κατασκευαστές έχουν προσθέσει αντιβακτηριακά συστατικά στις συνθέσεις τους. Οι συνιστώμενοι αντιβακτηριδακοί παράγοντες είναι η πενικιλίνη, η στρεπτομυκίνη, η γενταμυκίνη και η πολυμυξίνη Β. Το αζίδιο του νατρίου και το 2-μεθύλιο δεν συνιστώνται Αναστολείς όπως η 4-μεθυλ-4-ισοθειαζολιν-3-όνη (MCI) και η 5-χλωρο-2-μεθυλ-4 -ισοθειαζολιν-3-όνη (CMCI) επειδή αυτά τα συστατικά έχουν επίδραση στην αντίδραση PCR. Δεδομένου ότι το δείγμα που παρέχεται από αυτό το διάλυμα συντήρησης είναι βασικά ένας ζωντανός ιός, η πρωτοτυπία του δείγματος μπορεί να διατηρηθεί στο μέγιστο βαθμό και μπορεί να χρησιμοποιηθεί όχι μόνο για την εξαγωγή και ανίχνευση νουκλεϊκών οξέων του ιού, αλλά και για την καλλιέργεια και την καλλιέργεια και απομόνωση ιών. Ωστόσο, πρέπει να σημειωθεί ότι όταν χρησιμοποιείται για ανίχνευση, η εκχύλιση και ο καθαρισμός νουκλεϊκού οξέος πρέπει να πραγματοποιούνται μετά την αδρανοποίηση.
Ένα άλλο είδος διαλύματος συντήρησης που παρασκευάζεται με βάση το προϊόν λύσης εκχύλισης νουκλεϊκού οξέος, τα κύρια συστατικά είναι ισορροπημένα άλατα, χηλικός παράγοντας EDTA, άλας γουανιδίνης (όπως ισοθειοκυανική γουανιδίνη, υδροχλωρική γουανιδίνη κ.λπ.), ανιονικό επιφανειοδραστικό (όπως θειικό νάτριο δωδεκάνιο), κατιόν επιφανειοδραστικές ουσίες (όπως οξαλικό τετραδεκυλοτριμεθυλαμμώνιο), φαινόλη, 8-υδροξυκινολίνη, διθειοθρεϊτόλη (DTT), πρωτεϊνάση Κ και άλλα συστατικά. Εάν χρησιμοποιείται μόνο για RT-PCR, είναι πιο κατάλληλο, αλλά το προϊόν λύσης μπορεί να απενεργοποιήσει τον ιό. Αυτό το είδος δείγματος δεν μπορεί να χρησιμοποιηθεί για διαχωρισμό καλλιέργειας ιού.
Ο χηλικός παράγοντας μεταλλικών ιόντων που χρησιμοποιείται στο διάλυμα συντήρησης του ιού συνιστάται για τη χρήση αλάτων EDTA (όπως δικάλιο αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ, δινάτριο αιθυλενοδιαμινοτετραοξικό οξύ, κ.λπ.) και δεν συνιστάται η χρήση ηπαρίνης (όπως ηπαρίνη νατρίου, ηπαρίνη λιθίου). ώστε να μην επηρεάζεται η ανίχνευση PCR.
3. Σωλήνας συντήρησης: Το υλικό του σωλήνα συντήρησης πρέπει να επιλέγεται προσεκτικά. Υπάρχουν δεδομένα που υποδηλώνουν ότι το πολυπροπυλένιο (Πολυπροπυλένιο) σχετίζεται με την προσρόφηση νουκλεϊκού οξέος, ειδικά σε συγκέντρωση ιόντων υψηλής τάσης, το πολυαιθυλένιο (Πολυαιθυλένιο) προτιμάται περισσότερο από το πολυπροπυλένιο (Πολυπροπυλένιο) Εύκολο στην κατανόηση DNA/RNA. Το πλαστικό πολυμερές πολυαιθυλενίου-προπυλενίου (Polyallomer) και ορισμένα ειδικά επεξεργασμένα πλαστικά δοχεία από πολυπροπυλένιο (πολυπροπυλένιο) είναι πιο κατάλληλα για αποθήκευση DNA/RNA. Επιπλέον, όταν χρησιμοποιείτε ένα εύθραυστο μάκτρο, ο σωλήνας αποθήκευσης θα πρέπει να προσπαθήσει να επιλέξει ένα δοχείο με ύψος μεγαλύτερο από 8 cm για να αποτρέψει το πιτσίλισμα και τη μόλυνση του περιεχομένου όταν σπάσει η μπατονέτα.
4. Διάλυμα συντήρησης νερού για παραγωγή: Το υπερκαθαρό νερό που χρησιμοποιείται για το διάλυμα συντήρησης της παραγωγής πρέπει να διηθείται μέσω μεμβράνης υπερδιήθησης με μοριακό βάρος 13.000 για να διασφαλιστεί η απομάκρυνση των ακαθαρσιών πολυμερών από βιολογικές πηγές, όπως RNase, DNase και ενδοτοξίνη, και συνηθισμένος καθαρισμός δεν συνιστάται. Νερό ή απεσταγμένο νερό.
2. Χρήση σωλήνων δειγματοληψίας ιών
Η δειγματοληψία με χρήση του σωλήνα δειγματοληψίας ιού χωρίζεται κυρίως σε στοματοφαρυγγική δειγματοληψία και σε ρινοφαρυγγική δειγματοληψία:
1. Στοματοφαρυγγική δειγματοληψία: Πρώτα πιέστε τη γλώσσα με το γλωσσοπίεστρο, μετά επεκτείνετε την κεφαλή του επιχρίσματος δειγματοληψίας στον λαιμό για να σκουπίσετε τις αμφίπλευρες αμυγδαλές του φάρυγγα και το οπίσθιο φαρυγγικό τοίχωμα και σκουπίστε το οπίσθιο φαρυγγικό τοίχωμα με ελαφριά δύναμη, αποφύγετε να αγγίξετε τη γλώσσα μονάδα.
2. Ρινοφαρυγγική δειγματοληψία: μετρήστε την απόσταση από την άκρη της μύτης έως τον λοβό του αυτιού με ένα στυλεό και σημειώστε με ένα δάχτυλο, εισάγετε το στυλεό δειγματοληψίας στη ρινική κοιλότητα προς την κατεύθυνση της κάθετης μύτης (πρόσωπο), το στυλεό πρέπει να εκτείνεται τουλάχιστον το ήμισυ του μήκους του λοβού του αυτιού μέχρι την άκρη της μύτης, Αφήστε το στυλεό στη μύτη για 15-30 δευτερόλεπτα, περιστρέψτε απαλά 3-5 φορές και αφαιρέστε το στυλεό.
Δεν είναι δύσκολο να δούμε από τη μέθοδο χρήσης, είτε πρόκειται για στοματοφαρυγγικό στυλεό είτε για ρινοφαρυγγικό επίχρισμα, η δειγματοληψία είναι μια τεχνική εργασία, η οποία είναι δύσκολη και μολυσμένη. Η ποιότητα του δείγματος που συλλέγεται σχετίζεται άμεσα με την επακόλουθη ανίχνευση. Εάν το συλλεγμένο δείγμα έχει ιικό φορτίο Χαμηλό, εύκολο να προκληθούν ψευδώς αρνητικά, δύσκολο να επιβεβαιωθεί η διάγνωση.
Ώρα δημοσίευσης: Ιουν-21-2020
