1. Sobre la fabricación de tubos de muestreo de virus.
Los tubos de muestreo de virus pertenecen a productos de dispositivos médicos. La mayoría de los fabricantes nacionales están registrados según los productos de primera clase y pocas empresas están registradas según los productos de segunda clase. Recientemente, para satisfacer las necesidades de emergencia de Wuhan y otros lugares, muchas empresas han adoptado el "canal de emergencia" para solicitar el permiso de registro de primera clase. El tubo de muestreo de virus se compone de un hisopo de muestreo, una solución de conservación de virus y un embalaje exterior. Dado que no existe un estándar nacional o un estándar industrial unificado, los productos de los distintos fabricantes varían mucho.
1. Hisopo de muestreo: el hisopo de muestreo entra en contacto directamente con el sitio de muestreo y el material del cabezal de muestreo está estrechamente relacionado con la detección posterior. El cabezal del hisopo de muestreo debe estar hecho de fibra sintética de poliéster (PE) o rayón (fibra sintética). No se pueden utilizar esponjas de alginato de calcio ni hisopos de madera (incluidos los palos de bambú), y el material del cabezal del hisopo no puede ser productos de algodón. Debido a que la fibra de algodón tiene una fuerte adsorción de proteínas, no es fácil eluirla en la solución de almacenamiento posterior; y cuando se rompe una vara de madera o una vara de bambú que contiene alginato de calcio y componentes de madera, remojarla en la solución de almacenamiento también adsorberá proteínas e incluso puede inhibir la reacción de PCR posterior. Se recomienda utilizar fibras sintéticas como fibra de PE, fibra de poliéster y fibra de polipropileno para el material del cabezal del hisopo. No se recomiendan fibras naturales como el algodón. Las fibras de nailon tampoco se recomiendan porque las fibras de nailon (similares a los cabezales de los cepillos de dientes) absorben agua. Deficiente, lo que resulta en un volumen de muestreo insuficiente, lo que afecta la tasa de detección. ¡La esponja de alginato de calcio está prohibida para tomar muestras de material de hisopo! El mango del hisopo tiene dos tipos: roto y empotrado. El hisopo roto se coloca en el tubo de almacenamiento después del muestreo y la tapa del tubo se rompe después de romperla desde la posición cerca del cabezal de muestreo; el hisopo incorporado coloca directamente el hisopo de muestreo en el tubo de almacenamiento después del muestreo, y la cubierta del tubo de almacenamiento está incorporada. Alinee el pequeño orificio con la parte superior del mango y apriete la cubierta del tubo. Comparando los dos métodos, el último es relativamente seguro. Cuando el hisopo roto se usa junto con un tubo de almacenamiento de menor tamaño, puede causar salpicaduras de líquido en el tubo cuando se rompe, y se debe prestar total atención al riesgo de contaminación causada por el uso inadecuado del producto. Se recomienda utilizar un tubo hueco extruido de poliestireno (PS) o un tubo plegado por inyección de polipropileno (PP) para el material del mango del hisopo. No importa qué material se utilice, no se pueden agregar aditivos de alginato de calcio; palos de madera o palos de bambú. En resumen, el hisopo de muestreo debe garantizar la cantidad de muestreo y la cantidad de liberación, y los materiales seleccionados no deben contener sustancias que afecten las pruebas posteriores.
2. Solución de preservación de virus: Hay dos tipos de soluciones de preservación de virus ampliamente utilizadas en el mercado, una es una solución de mantenimiento de virus modificada según el medio de transporte y la otra es una solución modificada para el lisado de extracción de ácido nucleico.
El componente principal del primero es el medio de cultivo básico de Eagle (MEM) o sal equilibrada de Hank, al que se le añaden las sales, aminoácidos, vitaminas, glucosa y proteínas necesarias para la supervivencia del virus. Esta solución de almacenamiento utiliza sal sódica de rojo fenol como indicador y solución. Cuando el valor del pH es 6,6-8,0, la solución es rosa. A la solución de conservación se le añaden la glucosa, la L-glutamina y las proteínas necesarias. La proteína se proporciona en forma de suero bovino fetal o albúmina sérica bovina, que pueden estabilizar la cubierta proteica del virus. Debido a que la solución de conservación es rica en nutrientes, favorece la supervivencia del virus pero también beneficia el crecimiento de las bacterias. Si la solución conservante está contaminada con bacterias, se multiplicará en grandes cantidades. El dióxido de carbono en sus metabolitos hará que el pH de la solución de conservación baje de rosa a amarillo. Por lo tanto, la mayoría de los fabricantes han agregado ingredientes antibacterianos a sus formulaciones. Los agentes antibacterianos recomendados son penicilina, estreptomicina, gentamicina y polimixina B. No se recomiendan la azida sódica y el 2-metilo. Inhibidores como la 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) y el 5-cloro-2-metil-4. -isotiazolin-3-ona (CMCI) porque estos componentes tienen un efecto sobre la reacción de PCR. Dado que la muestra proporcionada por esta solución de conservación es básicamente un virus vivo, se puede conservar al máximo la originalidad de la muestra y se puede utilizar no sólo para la extracción y detección de ácidos nucleicos del virus, sino también para el cultivo y aislamiento de virus. Sin embargo, cabe señalar que cuando se utiliza para la detección, la extracción y purificación del ácido nucleico debe realizarse después de la inactivación.
Otro tipo de solución de conservación preparada a base de lisado de extracción de ácido nucleico, los componentes principales son sales equilibradas, agente quelante EDTA, sal de guanidina (como isotiocianato de guanidina, clorhidrato de guanidina, etc.), tensioactivo aniónico (como dodecano sulfato de sodio), catiónico tensioactivos (como oxalato de tetradeciltrimetilamonio), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinasa K y otros componentes. Esta solución de almacenamiento sirve para escindir directamente el virus para liberar el ácido nucleico y eliminar la ARNasa. Si sólo se utiliza para RT-PCR, es más adecuado, pero el lisado puede inactivar el virus. Este tipo de muestra no se puede utilizar para la separación de cultivos de virus.
Se recomienda que el agente quelante de iones metálicos utilizado en la solución de conservación de virus utilice sales de EDTA (como ácido etilendiaminotetraacético dipotásico, ácido etilendiaminotetraacético disódico, etc.), y no se recomienda utilizar heparina (como heparina sódica, heparina de litio). para no afectar la detección por PCR.
3. Tubo de conservación: El material del tubo de conservación debe seleccionarse con cuidado. Hay datos que sugieren que el polipropileno (Polipropileno) está relacionado con la adsorción de ácido nucleico, especialmente a concentraciones de iones de alta tensión, el polietileno (Polietileno) es más preferido que el polipropileno (Polipropileno). ADN/ARN fácil de captar. El plástico de polímero de polietileno-propileno (polialómero) y algunos recipientes de plástico de polipropileno (polipropileno) especialmente procesados son más adecuados para el almacenamiento de ADN/ARN. Además, cuando se utiliza un hisopo rompible, el tubo de almacenamiento debe intentar seleccionar un recipiente con una altura superior a 8 cm para evitar que el contenido salpique y se contamine al romper el hisopo.
4. Agua para la solución de conservación de la producción: el agua ultrapura utilizada para la solución de conservación de la producción debe filtrarse a través de una membrana de ultrafiltración con un peso molecular de 13.000 para garantizar la eliminación de impurezas poliméricas de fuentes biológicas, como RNasa, DNasa y endotoxina, y No se recomienda la purificación ordinaria. Agua o agua destilada.
2. Uso de tubos de muestreo de virus.
El muestreo utilizando el tubo de muestreo de virus se divide principalmente en muestreo orofaríngeo y muestreo nasofaríngeo:
1. Muestreo orofaríngeo: primero presione la lengua con el depresor de lengua, luego extienda la cabeza del hisopo de muestreo hacia la garganta para limpiar las amígdalas faríngeas bilaterales y la pared faríngea posterior, y limpie la pared faríngea posterior con una ligera fuerza, evite tocar la lengua. unidad.
2. Muestreo nasofaríngeo: mida la distancia desde la punta de la nariz hasta el lóbulo de la oreja con un hisopo y márquelo con un dedo, inserte el hisopo de muestra en la cavidad nasal en la dirección de la nariz vertical (cara), el hisopo debe extenderse al menos la mitad del largo del lóbulo de la oreja hasta la punta de la nariz. Deje el hisopo en la nariz durante 15 a 30 segundos, gírelo suavemente de 3 a 5 veces y retire el hisopo.
No es difícil ver por el método de uso, ya sea un hisopo orofaríngeo o nasofaríngeo, el muestreo es una tarea técnica, difícil y contaminada. La calidad de la muestra recogida está directamente relacionada con la detección posterior. Si la muestra recogida tiene una carga viral baja, es fácil provocar falsos negativos, difícilmente confirmar el diagnóstico.
Hora de publicación: 21-jun-2020
