Varias pensamientos sobre el tubo de muestreo de virus

1. Acerca de la fabricación de tubos de muestreo de virus
Los tubos de muestreo de virus pertenecen a productos de dispositivos médicos. La mayoría de los fabricantes nacionales están registrados de acuerdo con los productos de primera clase, y pocas compañías están registradas de acuerdo con los productos de segunda clase. Recientemente, para satisfacer las necesidades de emergencia de Wuhan y otros lugares, muchas compañías han tomado el "canal de emergencia" ", solicite el permiso de registro de primera clase.

1. SwaB de muestreo: el hisopo de muestreo contacta directamente con el sitio de muestreo, y el material del cabezal de muestreo está estrechamente relacionado con la detección posterior. El cabezal de hisopo de muestreo debe estar hecho de fibra sintética de poliéster (PE) o rayón (fibra artificial). No se pueden usar esponja de alginato de calcio o hisopos de palitos de madera (incluidos palos de bambú), y el material de la cabeza de hisopo no puede ser productos de algodón. Debido a que la fibra de algodón tiene una fuerte adsorción de proteína, no es fácil eluir en la solución de almacenamiento posterior; Y cuando un palo de madera o un palo de bambú que contiene alginato de calcio y componentes de madera se rompe, el remojo en la solución de almacenamiento también adsorbe la proteína, e incluso puede inhibir la posterior reacción de PCR. Se recomienda usar fibras sintéticas como fibra PE, fibra de poliéster y fibra de polipropileno para el material de la cabeza del hisopo. No se recomiendan fibras naturales como el algodón. Las fibras de nylon tampoco se recomiendan porque las fibras de nylon (similares a las cabezas del cepillo de dientes) absorben agua. Pobre, lo que resulta en un volumen de muestreo insuficiente, que afecta la tasa de detección. ¡Se prohíbe la esponja de alginato de calcio para muestrear material de hisopo! El mango de hisopo tiene dos tipos: roto y incorporado. El hisopo roto se coloca en el tubo de almacenamiento después del muestreo, y la tapa del tubo se rompe después de romperse desde la posición cerca del cabezal de muestreo; El hisopo incorporado coloca directamente el swaB de muestreo en el tubo de almacenamiento después de la muestreo, y la cubierta del tubo de almacenamiento está integrada alinee el pequeño orificio con la parte superior de la manija y apriete la cubierta del tubo. Comparando los dos métodos, este último es relativamente seguro. Cuando el hisopo roto se usa junto con un tubo de almacenamiento de tamaño más pequeño, puede causar salpicaduras de líquido en el tubo cuando se rompe, y se debe prestar toda la atención al riesgo de contaminación causada por el uso inadecuado del producto. Se recomienda usar tubo extruido de poliestireno hueco (PS) o tubo de inyección de polipropileno (PP) para el material del mango del hisopo. No importa qué material se use, no se pueden agregar aditivos de alginato de calcio; palitos de madera o palos de bambú. En resumen, el hisopo de muestreo debe garantizar la cantidad de muestreo y la cantidad de liberación, y los materiales seleccionados no deben tener sustancias que afecten las pruebas posteriores.

2. Solución de preservación del virus: hay dos tipos de soluciones de preservación del virus ampliamente utilizadas en el mercado, una es una solución de mantenimiento de virus modificada según el medio de transporte, y la otra es una solución modificada para el lisado de extracción de ácido nucleico.
El componente principal del primero es el medio de cultivo básico de Eagle (MEM) o la sal equilibrada de Hank, que se agrega con las sales, aminoácidos, vitaminas, glucosa y proteínas necesarias para la supervivencia del virus. Esta solución de almacenamiento utiliza sal de sodio rojo fenol como indicador y solución. Cuando el valor de pH es 6.6-8.0, la solución es rosa. La glucosa necesaria, la L-glutamina y la proteína se agregan a la solución de preservación. La proteína se proporciona en forma de suero bovino fetal o albúmina de suero bovino, que puede estabilizar la cubierta de proteína del virus. Debido a que la solución de preservación es rica en nutrientes, es propicio para la supervivencia del virus, pero también es beneficioso para el crecimiento de las bacterias. Si la solución de preservación está contaminada con bacterias, se multiplicará en grandes cantidades. El dióxido de carbono en sus metabolitos hará que el pH de la solución de preservación caiga de giros rosa amarillos. Por lo tanto, la mayoría de los fabricantes han agregado ingredientes antibacterianos a sus formulaciones. Los agentes antibacterianos recomendados son la penicilina, la estreptomicina, la gentamicina y la polimixina B. La azida de sodio y el 2-metil no son inhibidores recomendados como 4-metil-4-isotiazolina-3-one (MCI) y 5-cloro-2-2-2-metil-isotiaciaciaciaciezolina-3-one (CMCI) porque estos componentes tienen un efecto de PCR. Dado que la muestra proporcionada por esta solución de preservación es básicamente un virus vivo, la originalidad de la muestra puede mantenerse en la mayor medida, y puede usarse no solo para la extracción y detección de ácidos nucleicos del virus, sino también para el cultivo y el aislamiento de los virus. Sin embargo, debe tenerse en cuenta que cuando se usa para la detección, la extracción de ácido nucleico y la purificación deben realizarse después de la inactivación.
Another kind of preservation solution prepared based on nucleic acid extraction lysate, the main components are balanced salts, EDTA chelating agent, guanidine salt (such as guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride, etc.), anionic surfactant (such as dodecane Sodium sulfate), cationic surfactants (such as tetradecyltrimethylammonium oxalate), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinasa K y otros componentes, esta solución de almacenamiento es escindir directamente el virus para liberar el ácido nucleico y eliminar la RNasa. Si solo se usa para RT-PCR, es más adecuado, pero el lisado puede inactivar el virus. Este tipo de muestra no puede usarse para la separación del cultivo de virus.

Se recomienda al agente quelante de iones metálicos utilizado en la solución de preservación del virus para usar sales EDTA (como el ácido de dipotasio etilendiaminetraacético, el ácido disódico etilendiaminetetraacético, etc.), y no se recomienda usar heparina (como heparina de sodio, heparina litio), como para no afectar la detección de PCR.
3. Tubo de preservación: el material del tubo de preservación debe seleccionarse con cuidado. Hay datos que sugieren que el polipropileno (polipropileno) está relacionado con la adsorción de ácido nucleico, especialmente a concentración de iones de alta tensión, el polietileno (polietileno) es más preferida que el polipropileno (polipropileno) fácil de comprender el ADN/ARN. El plástico de polímero de polietileno-propileno (poliallómero) y algunos recipientes de plástico de polipropileno especialmente procesados ​​(polipropileno) son más adecuados para el almacenamiento de ADN/ARN. Además, cuando se usa un hisopo rompible, el tubo de almacenamiento debe intentar seleccionar un contenedor con una altura superior a 8 cm para evitar que el contenido se salpique y se contamine cuando el hisopo está roto.

4. Solución de preservación de agua para la producción: el agua ultrapura utilizada para la solución de preservación de producción debe filtrarse a través de una membrana ultrafiltración con un peso molecular de 13,000 para garantizar la eliminación de las impurezas de polímeros de fuentes biológicas, como la RNasa, la DNasa y la endotoxina, y la purificación ordinaria. Agua o agua destilada.

2. Uso de tubos de muestreo de virus

El muestreo usando el tubo de muestreo de virus se divide principalmente en muestreo orofaríngeo y muestreo nasofaríngeo:

1. Muestreo orofaríngeo: primero presione la lengua con el depresor de la lengua, luego extienda la cabeza del hisopo de muestreo en la garganta para limpiar las amígdalas faríngeas bilaterales y la pared faríngea posterior, y borrar la pared faríngea posterior con fuerza de luz, evitar tocar la unidad de la lengua.

2. Muestreo nasofaríngeo: mida la distancia desde la punta de la nariz hacia el lóbulo del oído con un hisopo y una marca con un dedo, inserte el hisopo de muestreo en la cavidad nasal en la dirección de la nariz vertical (cara), el hisopo debe extender al menos la mitad de la longitud de la lóbulo de la oreja a la punta de la nariz, dejar el bisne en la nariz durante 15-30 segundos, girentemente de la oreja, y retirarse a la punta de la nariz.
No es difícil ver por el método de uso, ya sea un hisopo orofaríngeo o un hisopo nasofaríngeo, el muestreo es una tarea técnica, que es difícil y contaminada. La calidad de la muestra recolectada está directamente relacionada con la detección posterior. Si la muestra recolectada tiene una carga viral baja, fácil de causar falsos negativos, es difícil confirmar el diagnóstico.