1. Viiruse proovivõtutorude valmistamisest
Viiruse proovivõtutorud kuuluvad meditsiiniseadmete toodete hulka. Enamik kodumaiseid tootjaid on registreeritud esimese klassi toodete järgi ja vähesed ettevõtted on registreeritud teise klassi toodete järgi. Hiljuti on paljud ettevõtted Wuhani ja teiste paikade hädaolukordade rahuldamiseks võtnud kasutusele „hädaabikanali“ „Taotlege esmaklassilist rekordluba. Viiruse proovivõtutoru koosneb proovivõtutampoonist, viiruse säilituslahusest ja välispakendist. Kuna ühtset riiklikku standardit või tööstusstandardit ei ole, on erinevate tootjate tooted väga erinevad.
1. Proovivõtu tampoon: proovivõtu tampoon puutub vahetult kokku proovivõtukohaga ja proovivõtupea materjal on järgneva tuvastamisega tihedalt seotud. Proovivõtu tampoonipea peab olema valmistatud polüester (PE) sünteetilisest kiust või viskoosist (keemilistest kiududest). Kaltsiumalginaadist käsna või puidust pulgatampooni (sh bambuspulkade) kasutada ei saa ning tampoonipea materjaliks ei saa olla puuvillased tooted. Kuna puuvillakiul on tugev valkude adsorptsioon, ei ole seda lihtne järgnevasse säilituslahusesse elueerida; ja kui kaltsiumalginaati ja puitkomponente sisaldav puupulk või bambuspulk puruneb, adsorbeerib säilituslahuses leotamine ka valku ja võib isegi pärssida järgnevat PCR reaktsiooni. Tampoonipea materjalina on soovitatav kasutada sünteetilisi kiude nagu PE-kiud, polüesterkiud ja polüpropüleenkiud. Looduslikud kiud, näiteks puuvill, ei ole soovitatavad. Nailonkiude ei soovitata kasutada ka seetõttu, et nailonkiud (sarnaselt hambaharjapeadele) imavad vett. Kehv, mille tulemuseks on ebapiisav proovivõtu maht, mis mõjutab tuvastamissagedust. Tampoonimaterjali proovide võtmiseks on keelatud kasutada kaltsiumalginaatkäsna! Tampooni käepidet on kahte tüüpi: purustatud ja sisseehitatud. Purustatud tampoon asetatakse pärast proovi võtmist säilitustorusse ja katseklaasi kork murtakse pärast proovivõtupea lähedal asuvast asendist murdmist; sisseehitatud tampoon asetab proovivõtutampooni pärast proovi võtmist otse hoiutorusse ja säilitustoru toru kate on sisse ehitatud. Joondage väike auk käepideme ülaosaga ja pingutage toru kate. Neid kahte meetodit võrreldes on viimane suhteliselt ohutu. Kui katkist tampooni kasutatakse koos väiksema mahuga säilitustoruga, võib see purunemisel põhjustada vedeliku pritsimist torusse ning kogu tähelepanu tuleb pöörata toote ebaõigest kasutamisest tulenevale saastumise ohule. Tampooni käepideme materjaliks on soovitatav kasutada õõnsat polüstüreenist (PS) ekstrudeeritud toru või polüpropüleenist (PP) süstimiskortsumistoru. Olenemata sellest, millist materjali kasutatakse, ei saa lisada kaltsiumalginaadi lisandeid; puidust pulgad või bambuspulgad. Lühidalt öeldes peaks proovivõtu tampoon tagama proovide võtmise ja eraldumise koguse ning valitud materjalides ei tohi olla aineid, mis mõjutavad edasist testimist.
2. Viiruse säilituslahus: turul kasutatakse laialdaselt kahte tüüpi viiruse säilitamise lahendusi, millest üks on transpordikeskkonna alusel modifitseeritud viiruse hoolduslahus ja teine on modifitseeritud lahus nukleiinhappe ekstraheerimise lüsaadi jaoks.
Esimese põhikomponendiks on Eagle'i põhikultuuri sööde (MEM) ehk Hanki tasakaalustatud sool, millele on lisatud viiruse ellujäämiseks vajalikke soolasid, aminohappeid, vitamiine, glükoosi ja valku. Selles säilituslahuses kasutatakse indikaatori ja lahusena fenoolpunast naatriumsoola. Kui pH väärtus on 6,6-8,0, on lahus roosa. Säilituslahusele lisatakse vajalik glükoos, L-glutamiin ja valk. Valk on saadaval veise loote seerumi või veise seerumi albumiini kujul, mis võib stabiliseerida viiruse valgukestat. Kuna säilituslahus on toitaineterikas, soodustab see viiruse ellujäämist, aga ka bakterite kasvu. Kui säilituslahus on saastunud bakteritega, paljuneb see suurtes kogustes. Selle metaboliitides sisalduv süsinikdioksiid põhjustab säilituslahuse pH langemise roosast. Muutub kollaseks. Seetõttu on enamik tootjaid lisanud oma koostistesse antibakteriaalseid koostisosi. Soovitatavad antibakteriaalsed ained on penitsilliin, streptomütsiin, gentamütsiin ja polümüksiin B. Naatriumasiidi ja 2-metüüli ei soovitata. Inhibiitorid nagu 4-metüül-4-isotiasoliin-3-oon (MCI) ja 5-kloro-2-metüül-4 -isotiasoliin-3-oon (CMCI), kuna need komponendid mõjutavad PCR reaktsiooni. Kuna selle säilituslahusega pakutav proov on põhimõtteliselt elusviirus, saab proovi originaalsust maksimaalselt säilitada ning seda saab kasutada mitte ainult viiruse nukleiinhapete ekstraheerimiseks ja tuvastamiseks, vaid ka kultiveerimiseks ja viiruste isoleerimine. Siiski tuleb märkida, et kui seda kasutatakse tuvastamiseks, tuleb nukleiinhappe ekstraheerimine ja puhastamine läbi viia pärast inaktiveerimist.
Teist tüüpi säilituslahus, mis on valmistatud nukleiinhapete ekstraheerimise lüsaadil, mille põhikomponendid on tasakaalustatud soolad, EDTA kelaativ aine, guanidiini sool (nagu guanidiini isotiotsüanaat, guanidiinvesinikkloriid jne), anioonne pindaktiivne aine (nagu dodekaan naatriumsulfaat), katioon. pindaktiivsed ained (nagu tetradetsüültrimetüülammooniumoksalaat), fenool, 8-hüdroksükinoliin, ditiotreitool (DTT), proteinaas K ja muud komponendid. See säilituslahus on mõeldud viiruse otseseks lõhustamiseks, et vabastada nukleiinhape ja elimineerida RNaasi. Kui seda kasutatakse ainult RT-PCR jaoks, on see sobivam, kuid lüsaat võib viiruse inaktiveerida. Sellist proovi ei saa kasutada viiruskultuuride eraldamiseks.
Viiruse säilituslahuses kasutatavas metalliioone kelaativas aines on soovitatav kasutada EDTA sooli (nagu dikaaliumetüleendiamiintetraäädikhape, dinaatriumetüleendiamiintetraäädikhape jne) ning ei ole soovitatav kasutada hepariini (nagu naatriumhepariin, liitiumhepariin), et mitte mõjutada PCR-i tuvastamist.
3. Säilitustoru: Säilitustoru materjal tuleb hoolikalt valida. On andmeid, mis viitavad sellele, et polüpropüleen (polüpropüleen) on seotud nukleiinhappe adsorptsiooniga, eriti kõrge pingega ioonide kontsentratsiooni korral, polüetüleen (polüetüleen) on eelistatum kui polüpropüleen (polüpropüleen). Lihtne haarata DNA/RNA. DNA/RNA säilitamiseks sobivad paremini polüetüleen-propüleenpolümeerist (Polyallomer) plastikust ja mõned spetsiaalselt töödeldud polüpropüleenist (polüpropüleenist) plastmahutid. Peale selle, kui kasutate purustatavat tampooni, peaks säilitustoru püüdma valida mahuti, mille kõrgus on suurem kui 8 cm, et vältida selle sisu pritsimist ja saastumist tampooni purunemisel.
4. Vesi tootmiseks konserveerimislahuse jaoks: tootmise säilitamiseks kasutatav ülipuhas vesi tuleks filtreerida läbi ultrafiltreerimismembraani molekulmassiga 13 000, et tagada polümeeri lisandite eemaldamine bioloogilistest allikatest, nagu RNaas, DNaas ja endotoksiin, ja tavalist puhastamist ei soovitata. Vesi või destilleeritud vesi.
2. Viiruse proovivõtutorude kasutamine
Proovide võtmine viiruse proovivõtturi abil jaguneb peamiselt orofarüngeaalseks proovivõtuks ja ninaneelu proovivõtuks:
1. Orofarüngeaalne proovide võtmine: esmalt vajutage keelele keelepressoriga, seejärel sirutage proovivõtu tampooni pea kurku, et pühkida kahepoolsed neelumandlid ja neelu tagumine sein, ning pühkige neelu tagumist seina kerge jõuga, vältige keele puudutamist. üksus.
2. Nasofarüngeaalne proovide võtmine: mõõtke tampooniga kaugus ninaotsast kõrvanibuni ja märkige sõrmega, sisestage proovivõtu tampoon ninaõõnde vertikaalse nina (näo) suunas, tampoon peaks ulatuma vähemalt pool kõrvanibu pikkusest kuni ninaotsani. Jätke tampooniga ninna 15–30 sekundiks, pöörake õrnalt 3–5 korda ja tõmmake tampoon välja.
Kasutusmeetodist ei ole raske aru saada, kas tegemist on orofarüngeaalse või ninaneelu tampooniga, proovide võtmine on tehniline ülesanne, mis on keeruline ja saastunud. Kogutud proovi kvaliteet on otseselt seotud hilisema tuvastamisega. Kui kogutud proovis on viiruskoormus Madal, on lihtne tekitada valenegatiivseid tulemusi, raske diagnoosi kinnitada.
Postitusaeg: 21. juuni 2020
