چندین فکر در مورد لوله نمونه گیری ویروس

1. در مورد ساخت لوله های نمونه برداری ویروس
لوله های نمونه برداری ویروس متعلق به محصولات دستگاه پزشکی است. بیشتر تولید کنندگان داخلی مطابق با محصولات درجه یک ثبت شده اند و تعداد کمی از شرکت ها طبق محصولات درجه دوم ثبت شده اند. به تازگی ، به منظور تأمین نیازهای اضطراری ووهان و سایر مناطق ، بسیاری از شرکت ها "کانال اضطراری" را گرفته اند "برای مجوز سوابق درجه یک درخواست می کنند. لوله نمونه برداری ویروس از یک سواب نمونه برداری ، محلول حفظ ویروس و بسته بندی بیرونی تشکیل شده است. از آنجا که هیچ استاندارد ملی یا استاندارد صنعت یکپارچه وجود ندارد ، محصولات تولید کنندگان مختلف بسیار متفاوت است.

1. نمونه گیری سواب: نمونه برداری سواب به طور مستقیم با محل نمونه برداری تماس می گیرد و مواد سر نمونه گیری از نزدیک با تشخیص بعدی مرتبط است. سر نمونه برداری از سواب باید از فیبر مصنوعی پلی استر (PE) یا ریون (فیبر ساخته شده توسط انسان) ساخته شود. اسفنج آلژینات کلسیم یا سواب چوب چوبی (از جمله چوب های بامبو) قابل استفاده نیست و مواد سر سواب نمی تواند محصولات پنبه ای باشد. از آنجا که فیبر پنبه جذب شدید پروتئین دارد ، کار ساده ای نیست که وارد محلول ذخیره سازی بعدی شوید. و هنگامی که یک چوب چوبی یا چوب بامبو حاوی کلسیم آلژینات و اجزای چوبی شکسته شود ، خیساندن در محلول ذخیره سازی نیز پروتئین را جذب می کند و حتی می تواند واکنش PCR بعدی را مهار کند. توصیه می شود از الیاف مصنوعی مانند فیبر PE ، فیبر پلی استر و فیبر پلی پروپیلن برای مواد سر سواب استفاده کنید. الیاف طبیعی مانند پنبه توصیه نمی شود. الیاف نایلون نیز توصیه نمی شود زیرا الیاف نایلون (شبیه به سرهای مسواک) آب را جذب می کنند. ضعیف ، و در نتیجه حجم نمونه برداری کافی ، بر میزان تشخیص تأثیر می گذارد. اسفنج آلژینات کلسیم برای نمونه برداری از مواد سواب ممنوع است! دسته سواب دارای دو نوع است: شکسته و داخلی. سواب شکسته پس از نمونه گیری در لوله ذخیره سازی قرار می گیرد و درپوش لوله پس از شکسته شدن از موقعیت در نزدیکی سر نمونه گیری شکسته می شود. سواب داخلی به طور مستقیم پس از نمونه گیری ، سواب نمونه برداری را در لوله ذخیره سازی قرار می دهد و پوشش لوله لوله ذخیره سازی در تراز کردن سوراخ کوچک با قسمت بالای دسته ساخته شده و پوشش لوله را محکم می کند. با مقایسه دو روش ، دومی نسبتاً بی خطر است. هنگامی که از سواب شکسته در رابطه با یک لوله ذخیره سازی اندازه کوچکتر استفاده می شود ، ممکن است در هنگام شکسته شدن باعث ایجاد پاشش مایع در لوله شود و باید توجه کامل به خطر آلودگی ناشی از استفاده نادرست از محصول باشد. توصیه می شود از لوله اکسترود شده پلی استایرن (PS) توخالی یا لوله تزریق پلی پروپیلن (PP) برای مواد دسته سواب استفاده کنید. مهم نیست که از چه ماده ای استفاده می شود ، افزودنی های آلژینات کلسیم نمی توانند اضافه شوند. چوب های چوبی یا چوب های بامبو. به طور خلاصه ، سواب نمونه برداری باید میزان نمونه برداری و میزان انتشار را تضمین کند و مواد منتخب نباید دارای موادی باشند که بر آزمایش های بعدی تأثیر بگذارد.

2. راه حل حفظ ویروس: دو نوع راه حل حفظ ویروس وجود دارد که به طور گسترده در بازار مورد استفاده قرار می گیرد ، یکی یک محلول نگهداری ویروس است که بر اساس محیط حمل و نقل اصلاح شده است و دیگری یک راه حل اصلاح شده برای لیزات استخراج اسید نوکلئیک است.
مؤلفه اصلی سابق محیط اصلی کشت Eagle (MEM) یا نمک متعادل هنک است که با نمک ، اسیدهای آمینه ، ویتامین ها ، گلوکز و پروتئین لازم برای بقای ویروس اضافه می شود. این محلول ذخیره سازی از نمک سدیم قرمز فنل به عنوان شاخص و محلول استفاده می کند. وقتی مقدار pH 6.6-8.0 باشد ، محلول صورتی است. گلوکز لازم ، L- گلوتامین و پروتئین به محلول حفظ اضافه می شوند. این پروتئین به شکل سرم گاو جنین یا آلبومین سرم گاو تهیه شده است که می تواند پوسته پروتئین ویروس را تثبیت کند. از آنجا که محلول حفظ سرشار از مواد مغذی است ، برای بقای ویروس مساعد است بلکه برای رشد باکتری ها نیز مفید است. اگر محلول حفظ با باکتری ها آلوده شود ، در مقادیر زیادی چند برابر می شود. دی اکسید کربن در متابولیت های آن باعث می شود که pH محلول حفظ از چرخش صورتی زرد شود. بنابراین ، بیشتر تولید کنندگان مواد ضد باکتریایی را به فرمولاسیون خود اضافه کرده اند. عوامل ضد باکتریایی توصیه شده عبارتند از: پنی سیلین ، استرپتومایسین ، جنتامایسین و پلییمکسین B. سدیم آزید و 2-متیل از مهار کننده های مانند 4-متیل-4 ایزوتیازولین -3-یک (MCI) و 5-کلرو-2-متیل -4 توصیه نمی شوند. -isothiazolin-3-one (CMCI) زیرا این مؤلفه ها در واکنش PCR تأثیر دارند. از آنجا که نمونه ارائه شده توسط این محلول حفظ اساساً یک ویروس زنده است ، اصالت نمونه را می توان تا حدودی نگه داشت ، و می توان نه تنها برای استخراج و تشخیص اسیدهای نوکلئیک ویروس ، بلکه برای کشت و کشت و همچنین استفاده کرد جداسازی ویروس ها. با این حال ، لازم به ذکر است که هنگام استفاده برای تشخیص ، استخراج اسید نوکلئیک و تصفیه باید پس از غیرفعال سازی انجام شود.
نوع دیگری از محلول حفظ تهیه شده بر اساس لیزات استخراج اسید نوکلئیک ، اجزای اصلی نمک های متعادل ، ماده شلاطین EDTA ، نمک گانیدین (مانند گانیدین ایزوتیوسیانات ، هیدروکلراید گانیدین و غیره) ، سورفاکتانت آنیونی (مانند مانند سولفات سدیم سدیم سدیم) ، ک ( سورفاکتانت ها (مانند تترادسیلتیمیتیل آمونیوم اگزالات) ، فنل ، 8-هیدروکسیکینولین ، دیتیوتریتول (DTT) ، پروتئیناز K و سایر مؤلفه ها ، این محلول ذخیره سازی به طور مستقیم ویروس را برای آزاد کردن اسید نوکلئیک و از بین بردن RNase از بین می برد. اگر فقط برای RT-PCR استفاده شود ، مناسب تر است ، اما لیزات می تواند ویروس را غیرفعال کند. این نوع نمونه را نمی توان برای جداسازی کشت ویروس استفاده کرد.

ماده فلزی یونی که در محلول حفظ ویروس مورد استفاده قرار می گیرد ، توصیه می شود از نمک های EDTA استفاده کنید (مانند اسید دیپوتاسیم اتیلن دی آمینتراستیک اسید ، دیودودیوم اتیلن دی آمینتراستیک اسید و غیره) ، و توصیه نمی شود که از هپارین (مانند سدیم هاپارین ، لیتیوم هپارین) استفاده کنید. تا بر تشخیص PCR تأثیر نگذارد.
3. لوله حفظ: مواد لوله حفظ باید با دقت انتخاب شود. داده هایی وجود دارد که نشان می دهد پلی پروپیلن (پلی پروپیلن) مربوط به جذب اسید نوکلئیک است ، به خصوص در غلظت یون تنش بالا ، پلی اتیلن (پلی اتیلن) ​​از پلی پروپیلن (پلی پروپیلن) آسان تر به راحتی می شود. پلاستیک پلیمر پلی اتیلن-پروپیلن (پلی آلیومر) و برخی از ظروف پلاستیکی پلی پروپیلن (پلی پروپیلن) مخصوص پردازش شده برای ذخیره DNA/RNA مناسب تر هستند. علاوه بر این ، هنگام استفاده از یک سواب قابل شکستن ، لوله ذخیره سازی باید سعی کند یک ظرف با ارتفاع بیشتر از 8 سانتی متر را انتخاب کند تا در هنگام شکسته شدن سواب از پراکنده و آلوده شدن محتویات جلوگیری شود.

4. آب برای حفظ تولید محلول: آب فوق العاده مورد استفاده برای محلول حفظ تولید باید از طریق یک غشای اولترافیلتراسیون با وزن مولکولی 13000 فیلتر شود تا از برداشتن ناخالصی های پلیمری از منابع بیولوژیکی مانند RNase ، DNase و اندوتوکسین و اندوتوکسین و اطمینان حاصل شود. تصفیه معمولی توصیه نمی شود. آب یا آب مقطر.

2. استفاده از لوله های نمونه برداری ویروس

نمونه برداری با استفاده از لوله نمونه برداری ویروس عمدتاً به نمونه گیری oropharyngeal و نمونه گیری نازوفارنکس تقسیم می شود:

1. نمونه برداری از دهان و دندان: ابتدا زبان را با افسردگی زبان فشار دهید ، سپس سر سوب نمونه برداری را درون گلو بکشید تا لوزه های دو طرفه pharyngeal و دیواره حلقون خلفی را پاک کنید و دیواره حلقوی خلفی را با نیروی سبک پاک کنید و از لمس زبان خودداری کنید. واحد.

2. نمونه برداری نازوفارنژال: فاصله از نوک بینی تا لوب گوش را با یک سواب اندازه بگیرید و با انگشت علامت گذاری کنید ، نمونه برداری سواب را در حفره بینی در جهت بینی عمودی (صورت) قرار دهید ، سواب باید گسترش یابد حداقل نیمی از طول لوب گوش به نوک بینی ، سواب را به مدت 15-30 ثانیه در بینی بگذارید ، به آرامی 3-5 بار بچرخید و سواب را عقب بکشید.
دیدن از روش استفاده دشوار نیست ، خواه یک سواب oropharyngeal باشد یا یک سواب نازوفارنژ ، نمونه گیری یک کار فنی است که دشوار و آلوده است. کیفیت نمونه جمع آوری شده به طور مستقیم با تشخیص بعدی مرتبط است. اگر نمونه جمع آوری شده دارای بار ویروسی کم باشد ، به راحتی قابل منفی است ، تأیید تشخیص دشوار است.