1. Tietoja virusnäytteenottoputkien valmistamisesta
Virusnäytteenottoputket kuuluvat lääketieteellisten laitteiden tuotteisiin. Suurin osa kotimaisista valmistajista on rekisteröity ykkösluokan tuotteiden mukaan, ja harvat yritykset ovat rekisteröityneet toisen luokan tuotteiden mukaan. Viime aikoina Wuhanin ja muiden paikkojen hätätarpeiden täyttämiseksi monet yritykset ovat ottaneet "hätäkanavan" "Hae ensiluokkaista ennätyslupaa. Virusnäytteenottoputki koostuu näytteenottopuikosta, virussäilöntäliuoksesta ja ulkopakkauksesta. Koska yhtenäistä kansallista standardia tai toimialastandardia ei ole olemassa, eri valmistajien tuotteet vaihtelevat suuresti.
1. Näytteenottopuikko: Näytteenottopuikko koskettaa suoraan näytteenottopaikkaa, ja näytteenottopään materiaali liittyy läheisesti myöhempään havaitsemiseen. Näytteenottopuikkopään tulee olla valmistettu polyesteri (PE) synteettisestä kuidusta tai raionista (tekokuitu). Kalsiumalginaattisieniä tai puisia puikkopuikkoja (mukaan lukien bambutikkuja) ei saa käyttää, eikä vanupuikkopään materiaali voi olla puuvillatuotteita. Koska puuvillakuidulla on voimakas proteiinin adsorptio, sitä ei ole helppo eluoida myöhempään säilytysliuokseen; ja kun kalsiumalginaattia ja puukomponentteja sisältävä puutikku tai bambutikku rikkoutuu, säilytysliuoksessa liotus myös adsorboi proteiinia, ja jopa se voi estää myöhemmän PCR-reaktion. Vanupuikkopään materiaalina on suositeltavaa käyttää synteettisiä kuituja, kuten PE-kuitua, polyesterikuitua ja polypropeenikuitua. Luonnonkuituja, kuten puuvillaa, ei suositella. Nailonkuituja ei myöskään suositella, koska nailonkuidut (samanlaiset kuin hammasharjan päät) imevät vettä. Huono, mikä johtaa riittämättömään näytteenottomäärään, mikä vaikuttaa havaitsemisnopeuteen. Kalsiumalginaattisienen käyttö vanupuikkomateriaalin näytteenotossa on kielletty! Vanupuikkokahvaa on kahta tyyppiä: rikki ja sisäänrakennettu. Rikkoutunut vanupuikko asetetaan säilytysputkeen näytteenoton jälkeen ja putken korkki rikotaan sen jälkeen, kun se on rikottu näytteenottopään läheltä; sisäänrakennettu vanupuikko laittaa näytteenottopuikon suoraan säilytysputkeen näytteenoton jälkeen, ja säilytysputken kansi on sisäänrakennettu. Kohdista pieni reikä kahvan yläosaan ja kiristä putken kansi. Näitä kahta menetelmää verrattaessa jälkimmäinen on suhteellisen turvallinen. Kun rikkinäistä vanupuikkoa käytetään yhdessä pienemmän säilytysputken kanssa, se voi aiheuttaa nesteroiskeita putkeen rikkoutuessaan, ja tuotteen väärän käytön aiheuttamaan kontaminaatioriskiin tulee kiinnittää täysi huomio. Vanupuikkokahvan materiaalina on suositeltavaa käyttää onttoa polystyreeniä (PS) suulakepuristettua putkea tai polypropeenia (PP) ruiskutusrypistysputkea. Riippumatta siitä, mitä materiaalia käytetään, kalsiumalginaattilisäaineita ei voida lisätä; puutikkuja tai bambutikkuja. Lyhyesti sanottuna näytteenottopuikolla tulee varmistaa näytteenoton ja vapautumisen määrä, eikä valituissa materiaaleissa saa olla aineita, jotka vaikuttavat myöhempään testaukseen.
2. Virustensäilöntäratkaisu: Markkinoilla on laajalti käytössä kahdenlaisia virussäilöntäratkaisuja, joista toinen on kuljetusalustaan perustuen modifioitu viruksen ylläpitoliuos ja toinen modifioitu liuos nukleiinihappouuttolysaatille.
Ensimmäisen pääkomponentti on Eaglen perusviljelyalusta (MEM) tai Hankin tasapainotettu suola, johon on lisätty viruksen selviytymisen kannalta välttämättömiä suoloja, aminohappoja, vitamiineja, glukoosia ja proteiinia. Tässä säilytysliuoksessa käytetään fenolipunanatriumsuolaa indikaattorina ja liuoksena. Kun pH-arvo on 6,6-8,0, liuos on vaaleanpunainen. Tarvittava glukoosi, L-glutamiini ja proteiini lisätään säilöntäliuokseen. Proteiinia tarjotaan naudan sikiön seerumin tai naudan seerumin albumiinin muodossa, mikä voi stabiloida viruksen proteiinikuoren. Koska säilöntäliuos sisältää runsaasti ravinteita, se edistää viruksen selviytymistä, mutta myös bakteerien kasvua. Jos säilöntäliuos on bakteerien saastuttama, se lisääntyy suuria määriä. Metaboliiteissa oleva hiilidioksidi saa säilöntäliuoksen pH:n putoamaan vaaleanpunaisesta. Muuttuu keltaiseksi. Siksi useimmat valmistajat ovat lisänneet valmisteisiinsa antibakteerisia ainesosia. Suositeltavat antibakteeriset aineet ovat penisilliini, streptomysiini, gentamysiini ja polymyksiini B. Natriumatsidia ja 2-metyyliä ei suositella. Inhibiittorit, kuten 4-metyyli-4-isotiatsolin-3-oni (MCI) ja 5-kloori-2-metyyli-4 -isotiatsolin-3-oni (CMCI), koska nämä komponentit vaikuttavat PCR-reaktioon. Koska tämän säilöntäliuoksen tarjoama näyte on pohjimmiltaan elävä virus, näytteen omaperäisyys voidaan säilyttää suurimmassa määrin ja sitä voidaan käyttää viruksen nukleiinihappojen uuttamisen ja havaitsemisen lisäksi myös viljelyyn ja virusten eristäminen. On kuitenkin huomattava, että käytettäessä havaitsemiseen, nukleiinihappouutto ja puhdistus on suoritettava inaktivoinnin jälkeen.
Toinen nukleiinihappouuttolysaattiin perustuva säilöntäliuos, jonka pääkomponentit ovat tasapainotetut suolat, EDTA-kelatointiaine, guanidiinisuola (kuten guanidiini-isotiosyanaatti, guanidiinihydrokloridi jne.), anioninen pinta-aktiivinen aine (kuten dodekaani Natriumsulfaatti), kationi pinta-aktiiviset aineet (kuten tetradekyylitrimetyyliammonium oksalaatti), fenoli, 8-hydroksikinoliini, ditiotreitoli (DTT), proteinaasi K ja muut komponentit. Tämän säilytysliuoksen tarkoituksena on pilkkoa virus suoraan nukleiinihapon vapauttamiseksi ja RNaasin eliminoimiseksi. Jos sitä käytetään vain RT-PCR:ään, se on sopivampi, mutta lysaatti voi inaktivoida viruksen. Tällaista näytettä ei voida käyttää virusviljelmien erottamiseen.
Virussäilöntäliuoksessa käytettävässä metalli-ionikelatointiaineessa suositellaan käytettäväksi EDTA-suoloja (kuten dikaliumetyleenidiamiinitetraetikkahappoa, dinatriumetyleenidiamiinitetraetikkahappoa jne.), eikä hepariinia (kuten natriumhepariinia, litiumhepariinia) suositella käytettäväksi. jotta se ei vaikuta PCR:n havaitsemiseen.
3. Säilytysputki: Säilytysputken materiaali tulee valita huolellisesti. On olemassa tietoja, jotka viittaavat siihen, että polypropeeni (polypropeeni) liittyy nukleiinihapon adsorptioon, erityisesti korkean jännitteen ionipitoisuudessa, polyeteeni (polyeteeni) on edullisempi kuin polypropeeni (polypropeeni). Helppo tarttua DNA/RNA:han. Polyeteeni-propeenipolymeeri (Polyallomer) -muovi ja jotkin erikoiskäsitellyt polypropeenimuovisäiliöt (polypropyleeni) sopivat paremmin DNA/RNA-varastointiin. Lisäksi käytettäessä särkyvää vanupuikkoa säilytysputkeen tulee pyrkiä valitsemaan yli 8 cm korkea säiliö, jotta sisältö ei roiskeudu ja kontaminoituisi, kun vanupuikko rikkoutuu.
4. Vesi tuotannon säilöntäliuokseen: Tuotannon säilöntäliuokseen käytetty ultrapuhdas vesi tulee suodattaa ultrasuodatuskalvon läpi, jonka molekyylipaino on 13 000, jotta varmistetaan polymeeriepäpuhtauksien poistaminen biologisista lähteistä, kuten RNaasi, DNaasi ja endotoksiini. tavallista puhdistusta ei suositella. Vesi tai tislattu vesi.
2. Virusnäytteenottoputkien käyttö
Näytteenotto virusnäytteenottoputkella jaetaan pääasiassa suunielun näytteenottoon ja nenänielun näytteenottoon:
1. Suunielun näytteenotto: Paina ensin kieltä kielen painajalla, ojenna sitten näytteenottopuikko kurkkuun pyyhkiäksesi molemminpuoliset nielun risat ja nielun takaseinä ja pyyhi nielun takaseinä kevyellä voimalla, vältä koskettamasta kieltä. yksikkö.
2. Nenänielun näytteenotto: mittaa vanupuikolla etäisyys nenän kärjestä korvalehteen ja merkitse sormella, työnnä näytteenottopuikko nenäonteloon pystysuoran nenän (kasvojen) suuntaan, vanupuikko tulee ulottua vähintään puolet korvan lohkon pituudesta nenän kärkeen asti, jätä vanupuikko nenään 15-30 sekunniksi, käännä varovasti 3-5 kertaa ja vedä vanupuikko pois.
Käyttötavasta ei ole vaikea nähdä, onko kyseessä suunielun tai nenänielun vanupuikko, näytteenotto on tekninen tehtävä, joka on vaikea ja kontaminoitunut. Kerätyn näytteen laatu liittyy suoraan myöhempään havaitsemiseen. Jos kerätyssä näytteessä on viruskuorma Alhainen, helppo aiheuttaa vääriä negatiivisia, vaikea vahvistaa diagnoosia.
Postitusaika: 21.6.2020
