Plusieurs réflexions sur le tube d'échantillonnage du virus

1. À propos de la fabrication de tubes d'échantillonnage de virus
Les tubes d'échantillonnage du virus appartiennent à des produits de dispositifs médicaux. La plupart des fabricants nationaux sont enregistrés selon les produits de première classe, et peu d'entreprises sont enregistrées selon les produits de deuxième classe. Récemment, afin de répondre aux besoins d'urgence de Wuhan et d'autres endroits, de nombreuses entreprises ont pris le «canal d'urgence» «postuler pour l'autorisation record de première classe. Le tube d'échantillonnage du virus est composé d'un écouvillonnage d'échantillonnage, d'une solution de conservation du virus et d'un emballage extérieur. Puisqu'il n'y a pas de norme nationale ou d'industrie unifiée, les produits de divers fabricants varient considérablement.

1. Écouvrant d'échantillonnage: l'écouvillon d'échantillonnage entre directement en contact avec le site d'échantillonnage, et le matériau de la tête d'échantillonnage est étroitement lié à la détection ultérieure. La tête d'écouvillon d'échantillonnage doit être en fibre synthétique en polyester (PE) ou en rayonne (fibre artificielle). L'éponge d'alginate de calcium ou les écouvillons en bois (y compris les bâtons de bambou) ne peuvent pas être utilisés et le matériau de la tête de tampon ne peut pas être des produits en coton. Étant donné que la fibre de coton a une forte adsorption de protéines, il n'est pas facile de s'éteindre dans la solution de stockage ultérieure; Et lorsqu'un bâton en bois ou un bâton de bambou contenant des composants d'alginate de calcium et de bois est cassé, le trempage dans la solution de stockage adsorbera également la protéine, et même il peut inhiber la réaction de PCR suivante. Il est recommandé d'utiliser des fibres synthétiques telles que la fibre PE, les fibres de polyester et la fibre de polypropylène pour le matériau de la tête d'écouvillon. Les fibres naturelles telles que le coton ne sont pas recommandées. Les fibres en nylon ne sont pas non plus recommandées car les fibres de nylon (similaires aux têtes de brosse à dents) absorbent l'eau. Mauvais, résultant en un volume d'échantillonnage insuffisant, affectant le taux de détection. L'éponge d'alginate de calcium est interdite pour l'échantillonnage du matériel d'écouvillon! La poignée d'écouvillon a deux types: cassé et intégré. L'évaluateur cassé est placé dans le tube de rangement après l'échantillonnage, et le capuchon du tube est cassé après avoir été brisé à partir de la position près de la tête d'échantillonnage; L'ouv tavablis intégré met directement l'écoute d'échantillonnage dans le tube de stockage après l'échantillonnage, et le couvercle du tube de rangement est construit pour aligner le petit trou avec le haut de la poignée et serrer le couvercle du tube. En comparant les deux méthodes, ce dernier est relativement sûr. Lorsque l'écouvillon cassé est utilisé en conjonction avec un tube de stockage de plus petite taille, il peut provoquer des éclaboussures de liquide dans le tube lorsqu'ils sont rompus, et une attention totale doit être accordée au risque de contamination causée par une mauvaise utilisation du produit. Il est recommandé d'utiliser un tube extrudé en polystyrène (PS) creux ou un tube d'injection de polypropylène (PP) pour le matériau de la poignée d'écouvillon. Peu importe le matériau utilisé, les additifs d'alginate de calcium ne peuvent pas être ajoutés; bâtons en bois ou bâtons de bambou. En bref, l'écouvillon d'échantillonnage doit garantir la quantité d'échantillonnage et la quantité de libération, et les matériaux sélectionnés ne doivent pas avoir de substances qui affectent les tests ultérieurs.

2.
Le composant principal de l'ancien est le milieu de culture de base d'Eagle (MEM) ou le sel équilibré de Hank, qui est ajouté avec les sels, les acides aminés, les vitamines, le glucose et les protéines nécessaires à la survie des virus. Cette solution de stockage utilise du sel de sodium rouge phénol comme indicateur et solution. Lorsque la valeur de pH est de 6,6-8,0, la solution est rose. Le glucose, la L nécessaire et la protéine sont ajoutés à la solution de préservation. La protéine est fournie sous forme de sérum bovin fœtal ou d'albumine sérique bovine, qui peut stabiliser la coquille protéique du virus. Parce que la solution de préservation est riche en nutriments, elle est propice à la survie du virus mais aussi bénéfique pour la croissance des bactéries. Si la solution de préservation est contaminée par des bactéries, elle se multipliera en grande quantité. Le dioxyde de carbone dans ses métabolites fera tomber la solution de préservation du pH des tours roses jaunes. Par conséquent, la plupart des fabricants ont ajouté des ingrédients antibactériens à leurs formulations. Les agents antibactériens recommandés sont la pénicilline, la streptomycine, la gentamicine et la polymyxine B. l'azide de sodium et le 2-méthyle ne sont pas des inhibiteurs recommandés tels que le 4-méthyl-4-isothiazoline-3-one (MCI) et le 5-chloro-2-méthyl-4 -Isothiazolin-3-one (CMCI) car ces composants ont un effet sur la réaction de PCR. Étant donné que l'échantillon fourni par cette solution de préservation est essentiellement un virus vivant, l'originalité de l'échantillon peut être maintenue dans la plus grande mesure, et elle peut être utilisée non seulement pour l'extraction et la détection des acides nucléiques virus, mais aussi pour la culture et Isolement des virus. Cependant, il convient de noter que lorsqu'il est utilisé pour la détection, l'extraction et la purification de l'acide nucléique doivent être effectuées après inactivation.
Un autre type de solution de conservation préparée à base de lysat d'extraction d'acide nucléique, les principaux composants sont des sels équilibrés, un agent chélatant EDTA, du sel de guanidine (comme l'isothiocyanate de guanidine, le chlorhydat de guanidine, etc.), le surfactant anionique (comme le sulfate de sodium du dodécane), la cationique cationique Les tensioactifs (tels que le tétradécyltriméthylammonium oxalate), le phénol, la 8-hydroxyquinoline, le dithiothréitol (DTT), la protéinase K et d'autres composants, cette solution de stockage consiste à cliver directement le virus pour libérer l'acide nucléique et éliminer la RNase. Si ce n'est utilisé que pour RT-PCR, il convient plus, mais le lysat peut inactiver le virus. Ce type d'échantillon ne peut pas être utilisé pour la séparation de la culture virale.

L'agent chélatant à ions métalliques utilisé dans la solution de préservation du virus est recommandé d'utiliser des sels EDTA (tels que l'acide dipotassium éthylènediaminetraacétique, l'acide éthylènediaminetétacétique, etc.), et il n'est pas recommandé d'utiliser l'héparine (comme l'héparine de sodium, la lithium héparine), afin de ne pas affecter la détection de PCR.
3. Tube de conservation: Le matériau du tube de conservation doit être sélectionné avec soin. Il existe des données suggérant que le polypropylène (polypropylène) est lié à l'adsorption de l'acide nucléique, en particulier à la concentration en ions à haute tension, le polyéthylène (polyéthylène) est plus préféré que le polypropylène (polypropylène) facile à saisir l'ADN / ARN. Le polymère polyéthylène-propylène (polyallomère) en plastique et certains contenants en plastique en polypropylène (polypropylène) spécialement traités conviennent plus à l'ADN / ARN. De plus, lorsque vous utilisez un écouvillonnage cassant, le tube de stockage doit essayer de sélectionner un conteneur avec une hauteur supérieure à 8 cm pour empêcher le contenu d'être éclaboussé et contaminé lorsque l'écouvillon est cassé.

4. Solution de préservation de l'eau pour la production: L'eau ultrapure utilisée pour la solution de conservation de la production doit être filtrée à travers une membrane ultrafiltration avec un poids moléculaire de 13 000 pour assurer l'élimination des impuretés polymères provenant de sources biologiques, telles que la RNase, la DNase et l'endotoxine et La purification ordinaire n'est pas recommandée. Eau ou eau distillée.

2. Utilisation de tubes d'échantillonnage du virus

L'échantillonnage à l'aide du tube d'échantillonnage du virus est principalement divisé en échantillonnage oropharyngé et échantillonnage nasopharyngé:

1. Échantillonnage oropharyngé: Appuyez d'abord sur la langue avec le dépresseur de la langue, puis étendez la tête de l'échantillonnage dans la gorge pour essuyer les amygdales pharyngées bilatérales et la paroi pharyngée postérieure, et essuyez la paroi pharyngée postérieure avec une force légère, évitez de toucher la langue unité.

2. Échantillonnage nasopharyngé: Mesurez la distance entre la pointe du nez et le lobe d'oreille avec un écouvillon et la marque avec un doigt, insérez l'écouvillon d'échantillonnage dans la cavité nasale dans le sens du nez vertical (face), l'écouvillonnage devrait s'étendre Au moins la moitié de la longueur du lobe d'oreille au bout du nez, laissez l'écouvillon dans le nez pendant 15 à 30 secondes, tournez doucement 3 à 5 fois et retirez l'écouvillon.
Il n'est pas difficile de voir dans la méthode d'utilisation, qu'il s'agisse d'un écouvillonnage oropharyngé ou d'un écouvillonnage nasopharyngé, l'échantillonnage est une tâche technique, qui est difficile et contaminée. La qualité de l'échantillon collecté est directement liée à la détection ultérieure. Si l'échantillon collecté a une charge virale faible, facile à provoquer de faux négatifs, difficile à confirmer le diagnostic.