Plusieurs réflexions sur le tube d'échantillonnage de virus

1. À propos de la fabrication des tubes de prélèvement de virus
Les tubes d'échantillonnage de virus appartiennent aux produits de dispositifs médicaux. La plupart des fabricants nationaux sont enregistrés selon les produits de première classe, et peu d'entreprises sont enregistrées selon les produits de seconde classe. Récemment, afin de répondre aux besoins d'urgence de Wuhan et d'autres endroits, de nombreuses entreprises ont emprunté le « canal d'urgence » « Demander l'autorisation d'enregistrement de première classe. Le tube d'échantillonnage de virus est composé d'un écouvillon d'échantillonnage, d'une solution de conservation du virus et d'un emballage extérieur. Puisqu’il n’existe pas de norme nationale unifiée ni de norme industrielle, les produits des différents fabricants varient considérablement.

1. Écouvillon d'échantillonnage : L'écouvillon d'échantillonnage entre directement en contact avec le site d'échantillonnage et le matériau de la tête d'échantillonnage est étroitement lié à la détection ultérieure. La tête de l'écouvillon d'échantillonnage doit être en fibre synthétique de polyester (PE) ou en rayonne (fibre synthétique). Les éponges d'alginate de calcium ou les tampons en bois (y compris les bâtons de bambou) ne peuvent pas être utilisés, et le matériau de la tête de l'écouvillon ne peut pas être des produits en coton. Étant donné que la fibre de coton a une forte adsorption des protéines, elle n'est pas facile à éluer dans la solution de stockage ultérieure ; et lorsqu'un bâton de bois ou un bâton de bambou contenant de l'alginate de calcium et des composants en bois est cassé, le trempage dans la solution de stockage adsorbera également les protéines, et même cela pourra inhiber la réaction PCR ultérieure. Il est recommandé d'utiliser des fibres synthétiques telles que la fibre PE, la fibre polyester et la fibre polypropylène pour le matériau de la tête de l'écouvillon. Les fibres naturelles comme le coton sont déconseillées. Les fibres de nylon ne sont pas non plus recommandées car les fibres de nylon (semblables aux têtes de brosse à dents) absorbent l'eau. Mauvais, entraînant un volume d’échantillonnage insuffisant, affectant le taux de détection. L'éponge d'alginate de calcium est interdite pour l'échantillonnage du matériel d'écouvillon ! La poignée de l'écouvillon est de deux types : cassée et intégrée. L'écouvillon cassé est placé dans le tube de stockage après l'échantillonnage, et le capuchon du tube est cassé après avoir été cassé depuis la position proche de la tête d'échantillonnage ; l'écouvillon intégré place directement l'écouvillon d'échantillonnage dans le tube de stockage après l'échantillonnage, et le couvercle du tube du tube de stockage est intégré. Alignez le petit trou avec le haut de la poignée et serrez le couvercle du tube. En comparant les deux méthodes, cette dernière est relativement sûre. Lorsque l'écouvillon cassé est utilisé avec un tube de stockage de plus petite taille, il peut provoquer des éclaboussures de liquide dans le tube une fois cassé, et une attention particulière doit être accordée au risque de contamination causé par une mauvaise utilisation du produit. Il est recommandé d’utiliser un tube extrudé creux en polystyrène (PS) ou un tube rainuré par injection en polypropylène (PP) pour le matériau du manche de l’écouvillon. Quel que soit le matériau utilisé, les additifs à base d'alginate de calcium ne peuvent pas être ajoutés ; bâtons de bois ou bâtons de bambou. En bref, l'écouvillon d'échantillonnage doit garantir la quantité d'échantillonnage et la quantité de libération, et les matériaux sélectionnés ne doivent pas contenir de substances qui affectent les tests ultérieurs.

2. Solution de préservation des virus : Il existe deux types de solutions de préservation des virus largement utilisées sur le marché, l'une est une solution de maintenance des virus modifiée en fonction du milieu de transport et l'autre est une solution modifiée pour le lysat d'extraction d'acide nucléique.
Le composant principal du premier est le milieu de culture basique d'Eagle (MEM) ou le sel équilibré de Hank, auquel sont ajoutés les sels, les acides aminés, les vitamines, le glucose et les protéines nécessaires à la survie du virus. Cette solution de stockage utilise du sel de sodium rouge de phénol comme indicateur et solution. Lorsque la valeur du pH est comprise entre 6,6 et 8,0, la solution est rose. Le glucose, la L-glutamine et les protéines nécessaires sont ajoutés à la solution de conservation. La protéine est fournie sous forme de sérum bovin fœtal ou d'albumine sérique bovine, qui peut stabiliser l'enveloppe protéique du virus. Parce que la solution de conservation est riche en nutriments, elle est propice à la survie du virus mais également bénéfique à la croissance des bactéries. Si la solution de conservation est contaminée par des bactéries, celles-ci se multiplieront en grande quantité. Le dioxyde de carbone présent dans ses métabolites fera chuter le pH de la solution de conservation du rose au jaune. C’est pourquoi la plupart des fabricants ont ajouté des ingrédients antibactériens à leurs formulations. Les agents antibactériens recommandés sont la pénicilline, la streptomycine, la gentamicine et la polymyxine B. L'azoture de sodium et le 2-méthyle ne sont pas recommandés. Les inhibiteurs tels que la 4-méthyl-4-isothiazolin-3-one (MCI) et la 5-chloro-2-méthyl-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) car ces composants ont un effet sur la réaction PCR. Étant donné que l'échantillon fourni par cette solution de conservation est essentiellement un virus vivant, l'originalité de l'échantillon peut être conservée au maximum et il peut être utilisé non seulement pour l'extraction et la détection d'acides nucléiques viraux, mais également pour la culture et isolement des virus. Cependant, il convient de noter que lorsqu’ils sont utilisés à des fins de détection, l’extraction et la purification des acides nucléiques doivent être effectuées après inactivation.
Un autre type de solution de conservation préparée à base de lysat d'extraction d'acide nucléique, les principaux composants sont des sels équilibrés, un agent chélateur EDTA, un sel de guanidine (tel que l'isothiocyanate de guanidine, le chlorhydrate de guanidine, etc.), un tensioactif anionique (tel que le dodécane sulfate de sodium), un cationique. tensioactifs (tels que l'oxalate de tétradécyltriméthylammonium), phénol, 8-hydroxyquinoléine, dithiothréitol (DTT), protéinase K et autres composants, Cette solution de stockage consiste à cliver directement le virus pour libérer l'acide nucléique et éliminer la RNase. S’il est utilisé uniquement pour la RT-PCR, il est plus adapté, mais le lysat peut inactiver le virus. Ce type d’échantillon ne peut pas être utilisé pour la séparation de cultures virales.

Il est recommandé d'utiliser l'agent chélateur des ions métalliques utilisé dans la solution de conservation du virus avec des sels d'EDTA (tels que l'acide éthylènediaminetétraacétique dipotassique, l'acide éthylènediaminetétraacétique disodique, etc.), et il n'est pas recommandé d'utiliser de l'héparine (telle que l'héparine de sodium, l'héparine de lithium), afin de ne pas affecter la détection PCR.
3. Tube de conservation : Le matériau du tube de conservation doit être sélectionné avec soin. Il existe des données suggérant que le polypropylène (polypropylène) est lié à l'adsorption de l'acide nucléique, en particulier à une concentration d'ions à haute tension, le polyéthylène (polyéthylène) est plus préféré que le polypropylène (polypropylène) ADN/ARN facile à saisir. Le plastique polymère polyéthylène-propylène (polyallomère) et certains récipients en plastique polypropylène (polypropylène) spécialement traités sont plus adaptés au stockage de l'ADN/ARN. De plus, lors de l'utilisation d'un écouvillon cassable, le tube de stockage doit essayer de sélectionner un récipient d'une hauteur supérieure à 8 cm pour éviter que le contenu ne soit éclaboussé et contaminé lorsque l'écouvillon est cassé.

4. Eau pour solution de préservation de la production : L'eau ultrapure utilisée pour la solution de préservation de la production doit être filtrée à travers une membrane d'ultrafiltration d'un poids moléculaire de 13 000 pour garantir l'élimination des impuretés polymères des sources biologiques, telles que la RNase, la DNase et l'endotoxine, et une purification ordinaire n’est pas recommandée. Eau ou eau distillée.

2. Utilisation de tubes de prélèvement de virus

Le prélèvement à l'aide du tube de prélèvement de virus est principalement divisé en prélèvement oropharyngé et prélèvement nasopharyngé :

1. Échantillonnage oropharyngé : appuyez d'abord sur la langue avec l'abaisse-langue, puis étendez la tête de l'écouvillon d'échantillonnage dans la gorge pour essuyer les amygdales pharyngées bilatérales et la paroi pharyngée postérieure, et essuyez la paroi pharyngée postérieure avec une force légère, en évitant de toucher la langue. unité.

2. Prélèvement nasopharyngé : mesurez la distance entre le bout du nez et le lobe de l'oreille avec un écouvillon et marquez avec un doigt, insérez l'écouvillon de prélèvement dans la cavité nasale en direction du nez vertical (visage), l'écouvillon doit s'étendre au moins la moitié de la longueur du lobe de l'oreille jusqu'au bout du nez. Laissez l'écouvillon dans le nez pendant 15 à 30 secondes, tournez-le doucement 3 à 5 fois et retirez l'écouvillon.
Il n'est pas difficile de voir d'après la méthode d'utilisation, qu'il s'agisse d'un prélèvement oropharyngé ou nasopharyngé, que le prélèvement est une tâche technique, difficile et contaminée. La qualité de l'échantillon collecté est directement liée à la détection ultérieure. Si l'échantillon collecté a une charge virale faible, il est facile de provoquer des faux négatifs, il est difficile de confirmer le diagnostic.