1. Sobre a fabricación de tubos de mostraxe de virus
Os tubos de mostra de virus pertencen a produtos de dispositivos médicos. A maioría dos fabricantes nacionais están rexistrados segundo os produtos de primeira clase e poucas empresas están rexistradas segundo os produtos de segunda clase. Recentemente, para satisfacer as necesidades de emerxencia de Wuhan e doutros lugares, moitas empresas tomaron a "canle de emerxencia" "Solicitar o permiso de rexistro de primeira clase. O tubo de mostraxe de virus está composto por un hisopo de mostraxe, unha solución de preservación do virus e un embalaxe exterior. Dado que non existe un estándar nacional unificado ou un estándar industrial, os produtos de varios fabricantes varían moito.
1. Cotonete de mostraxe: o cotonete de mostraxe contacta directamente co lugar de mostraxe e o material do cabezal de mostraxe está intimamente relacionado coa detección posterior. A cabeza do hisopo de mostraxe debe estar feita de fibra sintética de poliéster (PE) ou de raio (fibra artificial). Non se poden usar esponxas de alxinato de calcio ou bastonciños de madeira (incluíndo varas de bambú) e o material da cabeza do hisopo non pode ser produtos de algodón. Debido a que a fibra de algodón ten unha forte adsorción de proteínas, non é fácil eluir na solución de almacenamento posterior; e cando se rompe unha vara de madeira ou unha vara de bambú que contén alxinato de calcio e compoñentes de madeira, o mergullo na solución de almacenamento tamén absorberá proteínas, e mesmo pode inhibir a reacción posterior de PCR. Recoméndase utilizar fibras sintéticas como fibra de PE, fibra de poliéster e fibra de polipropileno para o material da cabeza do hisopo. Non se recomendan fibras naturais como o algodón. As fibras de nailon tampouco se recomendan porque as fibras de nailon (similares aos cabezales dos cepillos de dentes) absorben auga. Deficiente, o que resulta nun volume de mostraxe insuficiente, afectando a taxa de detección. A esponxa de alxinato de calcio está prohibida para tomar mostras de material de cotonete. O mango de cotonete ten dous tipos: roto e incorporado. O hisopo roto colócase no tubo de almacenamento despois da mostraxe e a tapa do tubo rómpese despois de romperse desde a posición próxima á cabeza de mostraxe; o hisopo incorporado coloca directamente o cotonete de mostraxe no tubo de almacenamento despois da mostra, e a tapa do tubo de almacenamento está integrada. Aliña o pequeno orificio coa parte superior do asa e aperta a tapa do tubo. Comparando os dous métodos, este último é relativamente seguro. Cando o hisopo roto se usa xunto cun tubo de almacenamento de menor tamaño, pode provocar salpicaduras de líquido no tubo cando se rompe, e débese prestar toda a atención ao risco de contaminación causado por un uso inadecuado do produto. Recoméndase utilizar tubos extruídos de poliestireno oco (PS) ou tubos de plegado de inxección de polipropileno (PP) para o material do mango do hisopo. Non importa o material que se use, non se poden engadir aditivos de alxinato de calcio; varas de madeira ou varas de bambú. En resumo, o cotonete de mostraxe debe garantir a cantidade de mostraxe e a cantidade de liberación, e os materiais seleccionados non deben ter substancias que afecten as probas posteriores.
2. Solución de preservación de virus: hai dous tipos de solucións de preservación de virus moi utilizadas no mercado, unha é unha solución de mantemento de virus modificada en función do medio de transporte e a outra é unha solución modificada para o lisado de extracción de ácidos nucleicos.
O compoñente principal do primeiro é o medio de cultivo básico de Eagle (MEM) ou sal equilibrada de Hank, que se engade coas sales, aminoácidos, vitaminas, glicosa e proteínas necesarias para a supervivencia do virus. Esta solución de almacenamento usa sal de sodio vermello fenol como indicador e solución. Cando o valor de pH é 6,6-8,0, a solución é rosa. Á solución de conservación engádense a glicosa, L-glutamina e proteína necesarias. A proteína ofrécese en forma de soro fetal bovino ou albúmina de soro bovino, que pode estabilizar a capa proteica do virus. Debido a que a solución de conservación é rica en nutrientes, é propicia para a supervivencia do virus pero tamén é beneficiosa para o crecemento das bacterias. Se a solución de conservación está contaminada con bacterias, multiplicarase en grandes cantidades. O dióxido de carbono nos seus metabolitos fará que o pH da solución de conservación caia do rosado. Polo tanto, a maioría dos fabricantes engadiron ingredientes antibacterianos ás súas formulacións. Os axentes antibacterianos recomendados son a penicilina, a estreptomicina, a gentamicina e a polimixina B. Non se recomenda a azida sódica e o 2-metilo Inhibidores como a 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) e o 5-cloro-2-metil-4. -isotiazolin-3-ona (CMCI) porque estes compoñentes teñen un efecto na reacción de PCR. Dado que a mostra proporcionada por esta solución de conservación é basicamente un virus vivo, a orixinalidade da mostra pódese manter na maior medida e pódese utilizar non só para a extracción e detección de ácidos nucleicos do virus, senón tamén para o cultivo e illamento de virus. Non obstante, hai que ter en conta que cando se usa para a detección, a extracción e purificación de ácidos nucleicos debe realizarse despois da inactivación.
Outro tipo de solución de conservación preparada a base de lisado de extracción de ácidos nucleicos, os principais compoñentes son sales equilibradas, axente quelante EDTA, sal de guanidina (como isotiocianato de guanidina, clorhidrato de guanidina, etc.), surfactante aniónico (como dodecano sulfato de sodio), catiónico. surfactantes (como oxalato de tetradeciltrimetilamonio), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinase K e outros compoñentes. Esta solución de almacenamento é para cortar directamente o virus para liberar o ácido nucleico e eliminar a RNase. Se só se usa para RT-PCR, é máis adecuado, pero o lisado pode inactivar o virus. Este tipo de mostra non se pode utilizar para a separación de cultivos de virus.
O axente quelante de ións metálicos usado na solución de preservación do virus recoméndase usar sales EDTA (como ácido etilendiaminotetraacético dipotásico, ácido etilendiaminotetraacético disódico, etc.), e non se recomenda usar heparina (como heparina sódica, heparina de litio). para non afectar a detección por PCR.
3. Tubo de conservación: o material do tubo de conservación debe seleccionarse coidadosamente. Hai datos que suxiren que o polipropileno (polipropileno) está relacionado coa adsorción de ácidos nucleicos, especialmente a alta concentración de ións de tensión, o polietileno (polietileno) é máis preferido que o polipropileno (polipropileno) ADN/ARN fácil de entender. O plástico de polímero de polietileno-propileno (polialómero) e algúns recipientes de plástico de polipropileno (polipropileno) especialmente procesados son máis axeitados para o almacenamento de ADN/ARN. Ademais, cando se utiliza un hisopo quebradizo, o tubo de almacenamento debe tentar seleccionar un recipiente cunha altura superior a 8 cm para evitar que o contido se salpique e se contamine ao romper o hisopo.
4. Auga para a solución de conservación da produción: a auga ultrapura utilizada para a solución de preservación da produción debe filtrarse a través dunha membrana de ultrafiltración cun peso molecular de 13.000 para garantir a eliminación de impurezas de polímero de fontes biolóxicas, como RNase, DNase e endotoxinas, e non se recomenda a purificación ordinaria. Auga ou auga destilada.
2. Utilización de tubos de mostraxe de virus
A mostraxe mediante o tubo de mostraxe de virus divídese principalmente en mostraxe orofarínxea e mostraxe nasofarínxea:
1. Mostra orofarínxea: primeiro preme a lingua co depresor de lingua, despois estende a cabeza do hisopo de mostraxe na gorxa para limpar as amígdalas farínxeas bilaterais e a parede farínxea posterior e limpe a parede farínxea posterior con forza lixeira, evitando tocar a lingua. unidade.
2. Mostra nasofarínxea: mida a distancia desde a punta do nariz ata o lóbulo da orella cun cotonete e marque cun dedo, introduza o cotonete de mostra na cavidade nasal na dirección do nariz vertical (cara), o cotonete debe estenderse. polo menos a metade da lonxitude do lóbulo da orella ata a punta do nariz, deixa o cotonete no nariz durante 15-30 segundos, xira suavemente 3-5 veces, e retire o hisopo.
Non é difícil ver polo método de uso, se se trata dun hisopo orofarínxeo ou nasofaríngeo, a toma de mostras é unha tarefa técnica, difícil e contaminada. A calidade da mostra recollida está directamente relacionada coa detección posterior. Se a mostra recollida ten unha carga viral Baixa, fácil de causar falsos negativos, difícil de confirmar o diagnóstico.
Hora de publicación: 21-Xun-2020
