1. O proizvodnji epruveta za uzorkovanje virusa
Epruvete za uzorkovanje virusa pripadaju medicinskim proizvodima. Većina domaćih proizvođača registrirana je prema proizvodima prve klase, a malo je tvrtki registrirano prema proizvodima druge klase. Nedavno su, kako bi zadovoljile hitne potrebe Wuhana i drugih mjesta, mnoge tvrtke preuzele "kanal za hitne slučajeve" "Prijavite se za prvoklasnu dozvolu za snimanje". Epruveta za uzorkovanje virusa sastoji se od štapića za uzorkovanje, otopine za čuvanje virusa i vanjskog pakiranja. Budući da ne postoji jedinstveni nacionalni standard ili industrijski standard, proizvodi različitih proizvođača uvelike se razlikuju.
1. Bris za uzorkovanje: štapić za uzorkovanje izravno dolazi u kontakt s mjestom uzorkovanja, a materijal glave za uzorkovanje usko je povezan s naknadnom detekcijom. Glava štapića za uzorkovanje trebala bi biti izrađena od poliesterskih (PE) sintetičkih vlakana ili rejona (umjetna vlakna). Ne mogu se koristiti spužva s kalcijevim alginatom ili drveni štapići (uključujući štapiće od bambusa), a materijal glave štapića ne može biti pamuk. Budući da pamučno vlakno ima jaku adsorpciju proteina, nije ga lako eluirati u naknadnu otopinu za skladištenje; a kada se drveni štapić ili bambusov štapić koji sadrži kalcijev alginat i drvene komponente slomi, namakanje u otopini za pohranjivanje također će adsorbirati protein, pa čak i može inhibirati naknadnu PCR reakciju. Preporuča se koristiti sintetička vlakna kao što su PE vlakna, poliesterska vlakna i polipropilenska vlakna za materijal glave štapića. Ne preporučuju se prirodna vlakna poput pamuka. Najlonska vlakna također se ne preporučuju jer najlonska vlakna (slična glavama četkica za zube) upijaju vodu. Loše, što rezultira nedovoljnim volumenom uzorkovanja, što utječe na stopu otkrivanja. Spužva od kalcijevog alginata zabranjena je za uzorkovanje materijala za bris! Drška za bris ima dvije vrste: slomljena i ugrađena. Slomljeni obrisak stavlja se u epruvetu za pohranjivanje nakon uzorkovanja, a poklopac epruvete se slomi nakon što se slomi s mjesta blizu glave za uzorkovanje; ugrađeni štapić izravno stavlja štapić za uzorkovanje u cijev za pohranu nakon uzorkovanja, a ugrađen je poklopac cijevi za pohranu. Poravnajte malu rupicu s vrhom ručke i zategnite poklopac cijevi. Uspoređujući dvije metode, potonja je relativno sigurna. Kada se slomljeni štapić koristi zajedno s manjom tubicom za pohranjivanje, može doći do prskanja tekućine u tubici kada se slomi, a punu pozornost treba obratiti na rizik od kontaminacije uzrokovan nepravilnom uporabom proizvoda. Preporuča se koristiti šuplju polistirensku (PS) ekstrudiranu cijev ili polipropilensku (PP) cijev za ubrizgavanje gužvanja kao materijal ručke štapića. Bez obzira koji se materijal koristi, aditivi kalcijevog alginata se ne mogu dodati; drveni štapići ili štapići od bambusa. Ukratko, bris za uzorkovanje treba osigurati količinu uzorkovanja i količinu ispuštanja, a odabrani materijali ne smiju sadržavati tvari koje utječu na naknadno testiranje.
2. Rješenje za očuvanje virusa: Postoje dvije vrste rješenja za očuvanje virusa koje se široko koriste na tržištu, jedno je rješenje za održavanje virusa modificirano na temelju transportnog medija, a drugo je modificirana otopina za lizat ekstrakcije nukleinske kiseline.
Glavna komponenta prvog je Eagleov temeljni medij kulture (MEM) ili Hankova uravnotežena sol, kojoj se dodaju soli, aminokiseline, vitamini, glukoza i proteini potrebni za preživljavanje virusa. Ova otopina za skladištenje koristi natrijevu sol fenol crvenog kao indikator i otopinu. Kada je pH vrijednost 6,6-8,0 otopina je ružičasta. Potrebna glukoza, L-glutamin i proteini dodaju se u otopinu za konzerviranje. Protein se daje u obliku fetalnog goveđeg seruma ili goveđeg serumskog albumina, koji može stabilizirati proteinsku ovojnicu virusa. Budući da je otopina za konzerviranje bogata hranjivim tvarima, pogodna je za preživljavanje virusa, ali i za rast bakterija. Ako je otopina za konzerviranje kontaminirana bakterijama, one će se razmnožiti u velikim količinama. Ugljični dioksid u njegovim metabolitima uzrokovat će pad pH vrijednosti otopine za konzerviranje s ružičaste postaje žuta. Stoga je većina proizvođača svojim formulacijama dodala antibakterijske sastojke. Preporučeni antibakterijski agensi su penicilin, streptomicin, gentamicin i polimiksin B. Natrijev azid i 2-metil se ne preporučuju. Inhibitori kao što su 4-metil-4-izotiazolin-3-on (MCI) i 5-kloro-2-metil-4 -izotiazolin-3-on (CMCI) jer te komponente utječu na PCR reakciju. Budući da je uzorak dobiven ovom otopinom za očuvanje u osnovi živi virus, originalnost uzorka može se zadržati u najvećoj mjeri, a može se koristiti ne samo za ekstrakciju i detekciju nukleinskih kiselina virusa, već i za uzgoj i izolacija virusa. Međutim, treba napomenuti da se, kada se koristi za detekciju, ekstrakcija nukleinske kiseline i pročišćavanje moraju provesti nakon inaktivacije.
Druga vrsta otopine za konzerviranje pripremljena na temelju lizata ekstrakcije nukleinske kiseline, glavne komponente su uravnotežene soli, EDTA kelatno sredstvo, gvanidinska sol (kao što je gvanidin izotiocijanat, gvanidin hidroklorid itd.), anionski surfaktant (kao što je dodekan natrijev sulfat), kationski surfaktanti (kao što je tetradeciltrimetilamonijev oksalat), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiotreitol (DTT), proteinaza K i druge komponente. Ova otopina za skladištenje služi za izravno cijepanje virusa kako bi se oslobodila nukleinska kiselina i eliminirala RNaza. Ako se koristi samo za RT-PCR, to je prikladnije, ali lizat može inaktivirati virus. Ova vrsta uzorka ne može se koristiti za odvajanje kulture virusa.
Za sredstvo za keliranje metalnih iona koje se koristi u otopini za očuvanje virusa preporučuje se korištenje EDTA soli (kao što je dikalij etilendiamintetraoctena kiselina, dinatrij etilendiamintetraoctena kiselina, itd.), a ne preporučuje se korištenje heparina (kao što je natrij heparin, litij heparin), kako ne bi utjecali na PCR detekciju.
3. Cijev za konzerviranje: Materijal tube za konzerviranje treba pažljivo odabrati. Postoje podaci koji upućuju na to da je polipropilen (polipropilen) povezan s adsorpcijom nukleinske kiseline, posebno pri visokoj koncentraciji iona napetosti, polietilen (polietilen) je poželjniji od polipropilena (polipropilen). DNA/RNA koja se lako shvaća. Polietilen-propilenska polimerna (Polyallomer) plastika i neki posebno obrađeni polipropilenski (Polypropylene) plastični spremnici prikladniji su za pohranu DNA/RNA. Osim toga, kada koristite štapić koji se može lomiti, epruveta za pohranjivanje trebala bi pokušati odabrati spremnik visine veće od 8 cm kako bi se spriječilo prskanje sadržaja i kontaminacija kada se štapić slomi.
4. Voda za otopinu za očuvanje proizvodnje: Ultračistu vodu koja se koristi za otopinu za očuvanje proizvodnje treba filtrirati kroz ultrafiltracijsku membranu s molekularnom težinom od 13 000 kako bi se osiguralo uklanjanje polimernih nečistoća iz bioloških izvora, kao što su RNaza, DNaza i endotoksin, i obično pročišćavanje se ne preporučuje. Voda ili destilirana voda.
2. Korištenje epruveta za uzorkovanje virusa
Uzorkovanje pomoću epruvete za uzorkovanje virusa uglavnom se dijeli na orofaringealno uzorkovanje i nazofaringealno uzorkovanje:
1. Orofaringealno uzimanje uzoraka: prvo pritisnite jezik depresorom za jezik, zatim produžite glavu štapića za uzimanje uzorka u grlo kako biste obrisali obostrane faringealne tonzile i stražnju stijenku ždrijela, a zatim lagano obrišite stražnju stijenku ždrijela, izbjegavajte dodirivanje jezika jedinica.
2. Uzimanje uzorka iz nazofarinksa: štapićem izmjerite udaljenost od vrha nosa do ušne školjke i označite prstom, štapić za uzorkovanje umetnite u nosnu šupljinu u smjeru okomitog nosa (lica), bris treba produžiti najmanje polovica dužine ušne školjke do vrha nosa, ostavite štapić u nosu 15-30 sekundi, lagano zarotirajte 3-5 puta i izvucite štapić.
Iz načina korištenja nije teško vidjeti, radi li se o orofaringealnom ili nazofaringealnom brisu, uzorkovanje je tehnički zadatak, težak i kontaminiran. Kvaliteta prikupljenog uzorka izravno je povezana s naknadnom detekcijom. Ako prikupljeni uzorak ima virusno opterećenje Nisko, lako je izazvati lažno negativne rezultate, teško je potvrditi dijagnozu.
Vrijeme objave: 21. lipnja 2020
