1. A vírusmintavevő csövek gyártásáról
A vírusmintavevő csövek az orvostechnikai eszközökhöz tartoznak. A legtöbb hazai gyártó az első osztályú termékek szerint, kevés cég a másodosztályú termékek szerint van nyilvántartva. A közelmúltban Wuhan és más helyek sürgősségi szükségleteinek kielégítése érdekében sok vállalat vette igénybe a „vészhelyzeti csatornát” „Kérjen első osztályú rekordengedélyt. A vírusmintavevő cső egy mintavételi tampon, víruskonzerváló oldatból és külső csomagolásból áll. Mivel nincs egységes nemzeti szabvány vagy ipari szabvány, a különböző gyártók termékei nagyon eltérőek.
1. Mintavételi tampon: A mintavételi tampont közvetlenül érintkezik a mintavételi hellyel, és a mintavevő fej anyaga szorosan kapcsolódik a későbbi kimutatáshoz. A mintavevő tamponfejnek poliészter (PE) szintetikus szálból vagy műselyemből (műszál) kell készülnie. Kalcium-alginát szivacs vagy fa pálcika törlőkendők (bambuszrudak is) nem használhatók, a tamponfej anyaga nem lehet pamut termék. Mivel a gyapotszál erősen adszorbeálja a fehérjét, nem könnyű eluálni a későbbi tárolóoldatba; és ha egy kalcium-alginátot és fakomponenseket tartalmazó fapálcikát vagy bambuszrudat eltörik, a tárolóoldatba való áztatás a fehérjét is adszorbeálja, sőt gátolja a későbbi PCR reakciót. A tamponfej anyagához szintetikus szálak, például PE szál, poliészter szál és polipropilén szálak használata javasolt. Természetes szálak, például pamut nem ajánlott. A nejlonszálak sem ajánlottak, mert a nejlonszálak (hasonlóan a fogkefefejekhez) felszívják a vizet. Gyenge, ami elégtelen mintamennyiséget eredményez, ami befolyásolja az észlelési arányt. A kalcium-alginát szivacs használata tilos tamponanyag mintavételéhez! A tamponfogantyúnak két típusa van: törött és beépített. A megtört tampont a mintavétel után a tárolócsőbe helyezzük, a cső kupakját pedig a mintavevő fej közelében lévő helyről történő letörés után törjük le; a beépített tampont a mintavétel után közvetlenül a mintavevő csőbe helyezi, és a tárolócső fedele be van építve. Igazítsa a kis lyukat a fogantyú tetejéhez, és húzza meg a tubus fedelét. A két módszert összehasonlítva az utóbbi viszonylag biztonságos. Ha a törött tampont egy kisebb méretű tárolócsővel együtt használja, akkor folyadék fröccsenhet a tubusba, ha eltörik, és teljes figyelmet kell fordítani a termék nem megfelelő használatából eredő szennyeződés kockázatára. A tampont nyél anyagához üreges polisztirol (PS) extrudált csövet vagy polipropilén (PP) fröccsöntő gyűrőcsövet javasolt használni. Függetlenül attól, hogy milyen anyagot használnak, kalcium-alginát adalékanyagok nem adhatók hozzá; fa rudak vagy bambusz rudak. Röviden: a mintavételi tamponnak biztosítania kell a mintavétel és a kibocsátás mennyiségét, és a kiválasztott anyagokban nem lehetnek olyan anyagok, amelyek befolyásolják a későbbi vizsgálatokat.
2. Vírusmegőrző megoldás: Kétféle vírusmegőrző megoldást használnak széles körben a piacon, az egyik a szállítóközeg alapján módosított vírusfenntartó megoldás, a másik pedig a nukleinsav extrakciós lizátum módosított oldata.
Előbbi fő komponense az Eagle's basic tenyésztőközeg (MEM) vagy Hank-féle kiegyensúlyozott só, amelyhez a vírus túléléséhez szükséges sókat, aminosavakat, vitaminokat, glükózt és fehérjét adnak. Ez a tárolóoldat fenolvörös nátriumsót használ indikátorként és oldatként. Amikor a pH-érték 6,6-8,0, az oldat rózsaszínű. A szükséges glükózt, L-glutamint és fehérjét adjuk a tartósító oldathoz. A fehérjét szarvasmarha-magzatszérum vagy szarvasmarha-szérumalbumin formájában biztosítják, amely stabilizálni tudja a vírus fehérjehéját. Mivel a tartósítóoldat tápanyagokban gazdag, elősegíti a vírus túlélését, de jótékony hatással van a baktériumok szaporodására is. Ha a tartósítóoldat baktériumokkal szennyezett, nagy mennyiségben elszaporodik. A metabolitjaiban lévő szén-dioxid hatására a konzerváló oldat pH-ja rózsaszínről csökken. Sárgává válik. Ezért a legtöbb gyártó hozzáadott antibakteriális összetevőket a készítményeihez. Az ajánlott antibakteriális szerek a penicillin, a sztreptomicin, a gentamicin és a polimixin B. A nátrium-azid és a 2-metil nem javasolt. Inhibitorok, például 4-metil-4-izotiazolin-3-on (MCI) és 5-klór-2-metil-4 -izotiazolin-3-on (CMCI), mivel ezek a komponensek hatással vannak a PCR reakcióra. Mivel a konzerváló oldat által szolgáltatott minta alapvetően élő vírus, a minta eredetisége a legnagyobb mértékben megőrizhető, és nem csak a vírus nukleinsavainak kivonására és kimutatására, hanem tenyésztésére, ill. vírusok izolálása. Mindazonáltal meg kell jegyezni, hogy ha kimutatásra használjuk, a nukleinsav extrakciót és tisztítást az inaktiválás után kell elvégezni.
A nukleinsav extrakciós lizátum alapú konzerváló oldat egy másik fajtája, melynek fő összetevői a kiegyensúlyozott sók, EDTA kelátképző szer, guanidinsó (például guanidin-izotiocianát, guanidin-hidroklorid stb.), anionos felületaktív anyag (például dodekán nátrium-szulfát), kation felületaktív anyagok (például tetradecil-trimetil-ammónium). oxalát), fenol, 8-hidroxi-kinolin, ditiotreitol (DTT), proteináz K és más komponensek. Ennek a tárolóoldatnak a célja a vírus közvetlen hasítása a nukleinsav felszabadítása és az RNáz eltávolítása érdekében. Ha csak RT-PCR-re használjuk, az alkalmasabb, de a lizátum inaktiválhatja a vírust. Ez a fajta minta nem használható vírustenyészet elkülönítésére.
A vírustartósító oldatban használt fémion kelátképző szer EDTA-sók (például dikálium-etilén-diamin-tetraecetsav, dinátrium-etilén-diamin-tetraecetsav stb.), heparin (például nátrium-heparin, lítium-heparin) használata nem javasolt, hogy ne befolyásolja a PCR kimutatását.
3. Tartósító cső: A tartósító cső anyagát gondosan meg kell választani. Vannak adatok, amelyek arra utalnak, hogy a polipropilén (Polypropylene) a nukleinsav adszorpciójával kapcsolatos, különösen nagy feszültségű ionkoncentráció esetén, a polietilén (polietilén) előnyösebb, mint a polipropilén (polipropilén). Könnyen megfogható DNS/RNS. A polietilén-propilén polimer (poliallomer) műanyag és néhány speciálisan feldolgozott polipropilén (polipropilén) műanyag tartály alkalmasabb DNS/RNS tárolására. Ezenkívül törhető tampon használatakor a tárolócsőnek meg kell próbálnia egy 8 cm-nél magasabb tartályt kiválasztani, hogy megakadályozza a tartalom kifröccsenését és szennyeződését, amikor a tampont törött.
4. Víz gyártási tartósító oldathoz: A gyártási tartósító oldathoz használt ultratiszta vizet 13 000 molekulatömegű ultraszűrő membránon kell átszűrni, hogy biztosítsák a polimer szennyeződések biológiai forrásokból, például RNáz, DNáz és endotoxinok eltávolítását. a szokásos tisztítás nem javasolt. Víz vagy desztillált víz.
2. Vírusmintavevő csövek használata
A vírusmintavételi cső segítségével történő mintavétel főként oropharyngealis és nasopharyngealis mintavételre oszlik:
1. Oropharyngealis mintavétel: Először nyomja meg a nyelvet a nyelvlenyomóval, majd húzza ki a mintavevő pálcika fejét a torkába, hogy letörölje a kétoldali garatmandulákat és a hátsó garatfalat, majd enyhe erővel törölje le a hátsó garatfalat, kerülje a nyelv érintését. egység.
2. Nasopharyngealis mintavétel: pálcikával mérje meg az orrhegy és a füllebeny távolságát, és ujjal jelölje meg, helyezze a mintavételi tampont az orrüregbe a függőleges orr (arc) irányába, a tampont nyúljon ki. legalább a fülkagyló hosszának fele az orrhegyig, Hagyja a tampont az orrban 15-30 másodpercig, óvatosan forgassa 3-5-ször, és húzza ki a tampont.
A felhasználási módból nem nehéz átlátni, hogy szájgarat- vagy orrgarat-tamponról van szó, a mintavétel technikai feladat, ami nehézkes és szennyezett. A begyűjtött minta minősége közvetlenül összefügg a későbbi kimutatással. Ha a begyűjtött minta vírusterhelése Alacsony, könnyen okoz téves negatív eredményt, nehéz megerősíteni a diagnózist.
Feladás időpontja: 2020. június 21
