1. Tentang pembuatan tabung pengambilan sampel virus
Tabung pengambilan sampel virus termasuk dalam produk perangkat medis. Sebagian besar produsen domestik terdaftar sesuai dengan produk kelas satu, dan beberapa perusahaan terdaftar sesuai dengan produk kelas dua. Baru-baru ini, untuk memenuhi kebutuhan darurat Wuhan dan tempat-tempat lain, banyak perusahaan telah mengambil "saluran darurat" "berlaku untuk izin catatan kelas satu.
1. Kepala swab pengambilan sampel harus terbuat dari serat atau rayon sintetis poliester (PE) (serat buatan manusia). Spons kalsium alginat atau tongkat kayu (termasuk tongkat bambu) tidak dapat digunakan, dan bahan kepala swab tidak bisa menjadi produk kapas. Karena serat kapas memiliki adsorpsi protein yang kuat, tidak mudah untuk dielusi ke dalam solusi penyimpanan berikutnya; Dan ketika tongkat kayu atau tongkat bambu yang mengandung kalsium alginat dan komponen kayu rusak, direndam dalam larutan penyimpanan juga akan menyerap protein, dan bahkan akan dapat menghambat reaksi PCR berikutnya. Dianjurkan untuk menggunakan serat sintetis seperti serat PE, serat poliester dan serat polypropylene untuk bahan kepala swab. Serat alami seperti kapas tidak dianjurkan. Serat nilon juga tidak dianjurkan karena serat nilon (mirip dengan kepala sikat gigi) menyerap air. Buruk, menghasilkan volume pengambilan sampel yang tidak mencukupi, mempengaruhi laju deteksi. Spons kalsium alginat dilarang untuk pengambilan sampel bahan swab! Pegangan SWAB memiliki dua jenis: rusak dan bawaan. Penyapu yang rusak ditempatkan di tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan tutup tabung rusak setelah dipecah dari posisi di dekat kepala pengambilan sampel; Sapu built-in secara langsung menempatkan swab pengambilan sampel ke dalam tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan penutup tabung tabung penyimpanan dibangun secara menyelaraskan lubang kecil dengan bagian atas pegangan dan kencangkan penutup tabung. Membandingkan kedua metode, yang terakhir relatif aman. Ketika usap rusak digunakan bersama dengan tabung penyimpanan ukuran yang lebih kecil, itu dapat menyebabkan percikan cairan dalam tabung saat rusak, dan perhatian penuh harus diberikan pada risiko kontaminasi yang disebabkan oleh penggunaan produk yang tidak tepat. Disarankan untuk menggunakan tabung injeksi polystyrene (PS) berongga atau tabung injeksi polypropylene (PP) untuk bahan pegangan swab. Tidak peduli bahan apa yang digunakan, aditif kalsium alginat tidak dapat ditambahkan; tongkat kayu atau tongkat bambu. Singkatnya, swab pengambilan sampel harus memastikan jumlah pengambilan sampel dan jumlah pelepasan, dan bahan yang dipilih tidak boleh memiliki zat yang mempengaruhi pengujian selanjutnya.
2. Solusi Pelestarian Virus: Ada dua jenis solusi pelestarian virus yang banyak digunakan di pasar, satu adalah solusi pemeliharaan virus yang dimodifikasi berdasarkan media transportasi, dan yang lainnya adalah solusi yang dimodifikasi untuk ekstraksi asam nukleat lisat.
Komponen utama dari yang pertama adalah media kultur dasar Eagle (MEM) atau garam seimbang Hank, yang ditambahkan dengan garam, asam amino, vitamin, glukosa dan protein yang diperlukan untuk kelangsungan hidup virus. Larutan penyimpanan ini menggunakan garam natrium merah fenol sebagai indikator dan solusi. Ketika nilai pH 6.6-8.0, solusinya merah muda. Glukosa yang diperlukan, L-glutamin dan protein ditambahkan ke larutan pelestarian. Protein disediakan dalam bentuk serum sapi janin atau albumin serum sapi, yang dapat menstabilkan cangkang protein virus. Karena solusi pelestarian kaya akan nutrisi, itu kondusif untuk kelangsungan hidup virus tetapi juga bermanfaat bagi pertumbuhan bakteri. Jika larutan pelestarian terkontaminasi dengan bakteri, itu akan berlipat ganda dalam jumlah besar. Karbon dioksida dalam metabolitnya akan menyebabkan pH larutan pelestarian jatuh dari merah muda berubah menjadi kuning. Oleh karena itu, sebagian besar produsen telah menambahkan bahan antibakteri ke dalam formulasinya. Agen antibakteri yang direkomendasikan adalah penisilin, streptomisin, gentamisin dan polimyxin B. natrium azida dan 2-metil tidak direkomendasikan inhibitor seperti komponen 4-metil-4-isothiazolin-satu-satu (MCI) dan 5-chloro-2-metil-4-isothiazolin-satu-satu. Karena sampel yang disediakan oleh solusi pelestarian ini pada dasarnya adalah virus hidup, orisinalitas sampel dapat dijaga sejauh yang terbesar, dan dapat digunakan tidak hanya untuk ekstraksi dan deteksi asam nukleat virus, tetapi juga untuk budidaya dan isolasi virus. Namun, harus dicatat bahwa ketika digunakan untuk deteksi, ekstraksi dan pemurnian asam nukleat harus dilakukan setelah inaktivasi.
Jenis lain dari larutan pelestarian yang disiapkan berdasarkan ekstraksi asam nukleat lisat, komponen utamanya adalah garam seimbang, agen chelating EDTA, garam guanidin (seperti guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride, dll. Fenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K dan komponen lainnya, solusi penyimpanan ini adalah untuk secara langsung membelah virus untuk melepaskan asam nukleat dan menghilangkan RNase. Jika hanya digunakan untuk RT-PCR, itu lebih cocok, tetapi lisat dapat menonaktifkan virus. Sampel semacam ini tidak dapat digunakan untuk pemisahan kultur virus.
The metal ion chelating agent used in the virus preservation solution is recommended to use EDTA salts (such as dipotassium ethylenediaminetetraacetic acid, disodium ethylenediaminetetraacetic acid, etc.), and it is not recommended to use heparin (such as sodium heparin, lithium heparin), so as not to affect PCR detection.
3. Tabung Pelestarian: Bahan tabung pelestarian harus dipilih dengan cermat. Ada data yang menunjukkan bahwa polypropylene (polypropylene) terkait dengan adsorpsi asam nukleat, terutama pada konsentrasi ion tegangan tinggi, polietilen (polietilen) lebih disukai daripada polypropylene (polypropylene) yang mudah untuk memahami DNA/RNA. Polyethylene-propylene polymer (polyallomer) plastik dan beberapa wadah plastik polypropylene (polypropylene) yang diproses khusus lebih cocok untuk penyimpanan DNA/RNA. Selain itu, saat menggunakan swab yang dapat dipecat, tabung penyimpanan harus mencoba memilih wadah dengan ketinggian lebih dari 8 cm untuk mencegah konten agar tidak terciprat dan terkontaminasi ketika swab rusak.
4. Air untuk Solusi Pelestarian Produksi: Air ultrapure yang digunakan untuk larutan pelestarian produksi harus disaring melalui membran ultrafiltrasi dengan berat molekul 13.000 untuk memastikan penghapusan kotoran polimer dari sumber biologis, seperti RNase, DNase, dan endotoksin, dan pemurnian biasa tidak dianjurkan. Air atau air suling.
2. Penggunaan tabung pengambilan sampel virus
Pengambilan sampel menggunakan tabung pengambilan sampel virus terutama dibagi menjadi pengambilan sampel orofaring dan pengambilan sampel nasofaring:
1. Pengambilan sampel orofaring: Pertama -tama tekan lidah dengan depresor lidah, lalu rentangkan kepala swab pengambilan sampel ke tenggorokan untuk menyeka amandel faring bilateral dan dinding faring posterior, dan bersihkan dinding faring posterior dengan gaya cahaya, hindari menyentuh unit lidah.
2. Pengambilan sampel nasofaring: Ukur jarak dari ujung hidung ke lobus telinga dengan swab dan tandai dengan jari, masukkan swab pengambilan sampel ke dalam rongga hidung ke arah hidung vertikal (wajah), swab harus memanjang setidaknya setengah panjang lobus telinga ke ujung hidung, meninggalkan swab di atas hidung untuk 15-30.
Tidak sulit untuk melihat dari metode penggunaan, apakah itu swab orofaring atau swab nasofaring, pengambilan sampel adalah tugas teknis, yang sulit dan terkontaminasi. Kualitas sampel yang dikumpulkan secara langsung terkait dengan deteksi selanjutnya. Jika sampel yang dikumpulkan memiliki viral load rendah, mudah menyebabkan negatif palsu, sulit untuk mengkonfirmasi diagnosis.
Waktu posting: Jun-21-2020
