1. Tentang pembuatan tabung pengambilan sampel virus
Tabung pengambilan sampel virus milik produk alat kesehatan. Sebagian besar produsen dalam negeri terdaftar menurut produk kelas satu, dan hanya sedikit perusahaan yang terdaftar menurut produk kelas dua. Baru-baru ini, untuk memenuhi kebutuhan darurat di Wuhan dan tempat lain, banyak perusahaan telah mengambil “saluran darurat” “Ajukan permohonan izin pencatatan kelas satu. Tabung pengambilan sampel virus terdiri dari kapas pengambilan sampel, larutan pengawet virus, dan kemasan luar. Karena tidak ada standar nasional atau standar industri yang terpadu, produk dari berbagai produsen sangat bervariasi.
1. Pengambilan sampel: Pengambilan sampel langsung menghubungi lokasi pengambilan sampel, dan bahan kepala pengambilan sampel berkaitan erat dengan deteksi selanjutnya. Kepala usap pengambilan sampel harus terbuat dari serat sintetis Poliester (PE) atau Rayon (serat buatan). Spons kalsium alginat atau penyeka tongkat kayu (termasuk batang bambu) tidak dapat digunakan, dan bahan kepala penyeka tidak boleh produk kapas. Karena serat kapas memiliki adsorpsi protein yang kuat, serat ini tidak mudah terelusi ke dalam larutan penyimpanan berikutnya; dan apabila batang kayu atau batang bambu yang mengandung kalsium alginat dan komponen kayu dipatahkan, perendaman dalam larutan penyimpanan juga akan menyerap protein, bahkan dapat menghambat reaksi PCR selanjutnya. Disarankan untuk menggunakan serat sintetis seperti serat PE, serat poliester, dan serat polipropilen untuk bahan kepala penyeka. Serat alami seperti kapas tidak dianjurkan. Serat nilon juga tidak disarankan karena serat nilon (mirip dengan kepala sikat gigi) menyerap air. Buruk, sehingga volume pengambilan sampel tidak mencukupi, sehingga memengaruhi tingkat deteksi. Spons kalsium alginat dilarang untuk pengambilan sampel bahan usap! Pegangan penyeka memiliki dua jenis: rusak dan terpasang. Swab yang rusak dimasukkan ke dalam tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan tutup tabung dipatahkan setelah dipatahkan dari posisi dekat kepala pengambilan sampel; penyeka bawaan langsung memasukkan kapas pengambilan sampel ke dalam tabung penyimpanan setelah pengambilan sampel, dan penutup tabung tabung penyimpanan terpasang Sejajarkan lubang kecil dengan bagian atas pegangan dan kencangkan penutup tabung. Membandingkan kedua metode tersebut, metode terakhir relatif aman. Jika kapas yang rusak digunakan bersama dengan tabung penyimpanan berukuran lebih kecil, hal ini dapat menyebabkan percikan cairan di dalam tabung jika pecah, dan perhatian penuh harus diberikan pada risiko kontaminasi yang disebabkan oleh penggunaan produk yang tidak tepat. Disarankan untuk menggunakan tabung ekstrusi polistiren berongga (PS) atau tabung kekusutan injeksi polipropilen (PP) untuk bahan pegangan penyeka. Apapun bahan yang digunakan, aditif kalsium alginat tidak dapat ditambahkan; tongkat kayu atau tongkat bambu. Singkatnya, usap pengambilan sampel harus memastikan jumlah pengambilan sampel dan jumlah pelepasan, dan bahan yang dipilih tidak boleh mengandung zat yang mempengaruhi pengujian selanjutnya.
2. Solusi pengawetan virus: Ada dua jenis solusi pengawetan virus yang banyak digunakan di pasaran, yang satu adalah larutan pemeliharaan virus yang dimodifikasi berdasarkan media transpornya, dan yang lainnya adalah larutan modifikasi untuk ekstraksi asam nukleat lisat.
Komponen utama dari yang pertama adalah media kultur dasar Eagle (MEM) atau garam seimbang Hank, yang ditambahkan garam, asam amino, vitamin, glukosa dan protein yang diperlukan untuk kelangsungan hidup virus. Larutan penyimpanan ini menggunakan garam natrium fenol merah sebagai indikator dan larutan. Ketika nilai pH 6,6-8,0, larutan berwarna merah muda. Glukosa, L-glutamin, dan protein yang diperlukan ditambahkan ke dalam larutan pengawet. Protein tersebut diberikan dalam bentuk serum janin sapi atau albumin serum sapi, yang dapat menstabilkan cangkang protein virus. Karena larutan pengawet kaya akan nutrisi, hal ini kondusif bagi kelangsungan hidup virus tetapi juga bermanfaat bagi pertumbuhan bakteri. Jika larutan pengawet terkontaminasi bakteri maka bakteri akan berkembang biak dalam jumlah banyak. Karbon dioksida dalam metabolitnya akan menyebabkan pH larutan pengawet turun dari warna merah jambu menjadi kuning. Oleh karena itu, sebagian besar produsen telah menambahkan bahan antibakteri ke dalam formulasinya. Agen antibakteri yang dianjurkan adalah penisilin, streptomisin, gentamisin dan polimiksin B. Natrium azida dan 2-metil tidak dianjurkan Inhibitor seperti 4-metil-4-isothiazolin-3-one (MCI) dan 5-kloro-2-metil-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) karena komponen tersebut berpengaruh pada reaksi PCR. Karena sampel yang disediakan oleh larutan pengawet ini pada dasarnya adalah virus hidup, keaslian sampel dapat dijaga semaksimal mungkin, dan tidak hanya dapat digunakan untuk ekstraksi dan deteksi asam nukleat virus, tetapi juga untuk budidaya dan isolasi virus. Namun perlu diperhatikan bahwa bila digunakan untuk deteksi, ekstraksi dan pemurnian asam nukleat harus dilakukan setelah inaktivasi.
Jenis larutan pengawet lain yang dibuat berdasarkan lisat ekstraksi asam nukleat, komponen utamanya adalah garam seimbang, zat pengkelat EDTA, garam guanidin (seperti guanidin isothiocyanate, guanidin hidroklorida, dll.), surfaktan anionik (seperti dodekan Natrium sulfat), kationik surfaktan (seperti tetradecyltrimethylammonium oxalate), fenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K dan komponen lainnya, Solusi penyimpanan ini untuk langsung membelah virus untuk melepaskan asam nukleat dan menghilangkan RNase. Kalau hanya digunakan untuk RT-PCR lebih cocok, namun lisatnya bisa menonaktifkan virus. Sampel semacam ini tidak dapat digunakan untuk pemisahan kultur virus.
Bahan pengkelat ion logam yang digunakan dalam larutan pengawet virus dianjurkan menggunakan garam EDTA (seperti asam dipotassium ethylenediaminetetraacetic, asam disodium ethylenediaminetetraacetic, dll.), dan tidak dianjurkan menggunakan heparin (seperti natrium heparin, litium heparin), agar tidak mempengaruhi deteksi PCR.
3. Tabung pengawet: Bahan tabung pengawet harus dipilih dengan hati-hati. Ada data yang menunjukkan bahwa polipropilen (Polipropilena) berhubungan dengan adsorpsi asam nukleat, terutama pada konsentrasi ion tegangan tinggi, polietilen (Polietilen) lebih disukai daripada polipropilena (Polipropilena) DNA/RNA yang mudah ditangkap. Plastik polimer polietilen-propilena (Polyallomer) dan beberapa wadah plastik polipropilen (Polipropilena) yang diproses secara khusus lebih cocok untuk penyimpanan DNA/RNA. Selain itu, bila menggunakan kapas pecah, tabung penyimpanan sebaiknya memilih wadah dengan tinggi lebih dari 8 cm agar isinya tidak terciprat dan terkontaminasi bila kapas pecah.
4. Air untuk larutan pengawet produksi: Air ultra murni yang digunakan untuk larutan pengawet produksi harus disaring melalui membran ultrafiltrasi dengan berat molekul 13.000 untuk memastikan penghilangan pengotor polimer dari sumber biologis, seperti RNase, DNase, dan endotoksin, dan pemurnian biasa tidak dianjurkan. Air atau air suling.
2. Penggunaan tabung pengambilan sampel virus
Pengambilan sampel menggunakan tabung pengambilan sampel virus terutama dibagi menjadi pengambilan sampel orofaring dan pengambilan sampel nasofaring:
1. Pengambilan sampel orofaring: Pertama tekan lidah dengan penekan lidah, kemudian usap kepala usap pengambilan sampel ke tenggorokan untuk menyeka amandel faring bilateral dan dinding faring posterior, dan usap dinding faring posterior dengan kekuatan ringan, hindari menyentuh lidah satuan.
2. Pengambilan sampel nasofaring: ukur jarak ujung hidung ke cuping telinga dengan usap dan tandai dengan jari, masukkan usap sampling ke dalam rongga hidung searah vertikal hidung (wajah), usap harus memanjang setidaknya setengah panjang cuping telinga hingga ujung hidung, Biarkan kapas di dalam hidung selama 15-30 detik, putar perlahan 3-5 kali, dan tarik kapas.
Tidak sulit dilihat dari cara penggunaannya, baik itu usap orofaring maupun usap nasofaring, pengambilan sampel merupakan tugas teknis yang sulit dan terkontaminasi. Kualitas sampel yang dikumpulkan berhubungan langsung dengan deteksi selanjutnya. Jika sampel yang dikumpulkan memiliki viral load rendah, mudah menimbulkan negatif palsu, sulit untuk memastikan diagnosis.
Waktu posting: 21 Juni 2020
