1. Informazioni sulla produzione di provette per il campionamento dei virus
Le provette per il campionamento dei virus appartengono ai prodotti dei dispositivi medici. La maggior parte dei produttori nazionali sono registrati in base ai prodotti di prima classe e poche aziende sono registrate in base ai prodotti di seconda classe. Recentemente, per soddisfare le esigenze di emergenza di Wuhan e di altri luoghi, molte aziende hanno adottato il “canale di emergenza” “Richiedi il permesso di registrazione di prima classe. La provetta per il campionamento del virus è composta da un tampone di campionamento, una soluzione di conservazione del virus e un imballaggio esterno. Poiché non esiste uno standard nazionale o industriale unificato, i prodotti dei vari produttori variano notevolmente.
1. Tampone di campionamento: il tampone di campionamento entra direttamente in contatto con il sito di campionamento e il materiale della testa di campionamento è strettamente correlato al successivo rilevamento. La testa del tampone di campionamento deve essere realizzata in fibra sintetica di poliestere (PE) o rayon (fibra artificiale). Non è possibile utilizzare spugne in alginato di calcio o bastoncini di legno (compresi bastoncini di bambù) e il materiale della testa del tampone non può essere un prodotto in cotone. Poiché la fibra di cotone ha un forte assorbimento di proteine, non è facile eluirla nella successiva soluzione di conservazione; e quando un bastoncino di legno o di bambù contenente alginato di calcio e componenti di legno viene rotto, l'immersione nella soluzione di conservazione adsorbirà anche le proteine e potrebbe addirittura inibire la successiva reazione PCR. Si consiglia di utilizzare fibre sintetiche come fibra PE, fibra di poliestere e fibra di polipropilene per il materiale della testina del tampone. Le fibre naturali come il cotone non sono consigliate. Anche le fibre di nylon non sono consigliate perché le fibre di nylon (simili alle testine degli spazzolini da denti) assorbono acqua. Scarso, con conseguente volume di campionamento insufficiente, che influisce sulla velocità di rilevamento. La spugna di alginato di calcio è vietata per il campionamento del materiale del tampone! La maniglia del tampone è di due tipi: rotta e incorporata. Il tampone rotto viene posizionato nella provetta di conservazione dopo il campionamento e il tappo della provetta viene rotto dopo essere stato rotto dalla posizione vicino alla testa di campionamento; il tampone incorporato inserisce direttamente il tampone di campionamento nel tubo di conservazione dopo il campionamento e il coperchio del tubo del tubo di conservazione è integrato. Allineare il piccolo foro con la parte superiore dell'impugnatura e serrare il coperchio del tubo. Confrontando i due metodi, quest’ultimo è relativamente sicuro. Quando il tampone rotto viene utilizzato insieme a una provetta di conservazione di dimensioni più piccole, potrebbe causare schizzi di liquido nella provetta in caso di rottura; è necessario prestare la massima attenzione al rischio di contaminazione causata da un uso improprio del prodotto. Si consiglia di utilizzare un tubo cavo estruso di polistirene (PS) o un tubo cordonato per iniezione di polipropilene (PP) per il materiale dell'impugnatura del tampone. Indipendentemente dal materiale utilizzato, non è possibile aggiungere additivi di alginato di calcio; bastoncini di legno o bastoncini di bambù. In breve, il tampone di prelievo deve garantire la quantità di campionamento e la quantità di rilascio, e i materiali selezionati non devono contenere sostanze che influenzino i successivi test.
2. Soluzione di conservazione dei virus: esistono due tipi di soluzioni di conservazione dei virus ampiamente utilizzate sul mercato, una è una soluzione di conservazione dei virus modificata in base al mezzo di trasporto e l'altra è una soluzione modificata per il lisato di estrazione dell'acido nucleico.
Il componente principale del primo è il terreno di coltura base di Eagle (MEM) o sale bilanciato di Hank, a cui vengono aggiunti sali, aminoacidi, vitamine, glucosio e proteine necessari per la sopravvivenza del virus. Questa soluzione di conservazione utilizza il sale sodico rosso fenolo come indicatore e soluzione. Quando il valore del pH è 6,6-8,0, la soluzione è rosa. Alla soluzione di conservazione vengono aggiunti il glucosio, la L-glutammina e le proteine necessari. La proteina viene fornita sotto forma di siero bovino fetale o albumina sierica bovina, che può stabilizzare l'involucro proteico del virus. Poiché la soluzione di conservazione è ricca di sostanze nutritive, favorisce la sopravvivenza del virus ma è anche benefica per la crescita dei batteri. Se la soluzione di conservazione è contaminata da batteri, si moltiplicherà in grandi quantità. L'anidride carbonica nei suoi metaboliti farà sì che il pH della soluzione conservante diminuisca dal rosa al giallo. Pertanto, la maggior parte dei produttori ha aggiunto ingredienti antibatterici alle proprie formulazioni. Gli agenti antibatterici raccomandati sono penicillina, streptomicina, gentamicina e polimixina B. La sodio azide e il 2-metil non sono raccomandati. Inibitori come 4-metil-4-isotiazolin-3-one (MCI) e 5-cloro-2-metil-4 -isotiazolin-3-one (CMCI) perché questi componenti hanno un effetto sulla reazione PCR. Poiché il campione fornito da questa soluzione di conservazione è fondamentalmente un virus vivo, l'originalità del campione può essere preservata al massimo e può essere utilizzato non solo per l'estrazione e il rilevamento degli acidi nucleici del virus, ma anche per la coltura e isolamento dei virus. Tuttavia, va notato che, se utilizzato per il rilevamento, l'estrazione e la purificazione dell'acido nucleico devono essere eseguite dopo l'inattivazione.
Un altro tipo di soluzione di conservazione preparata a base di lisato di estrazione dell'acido nucleico, i componenti principali sono sali bilanciati, agente chelante EDTA, sale di guanidina (come isotiocianato di guanidina, cloridrato di guanidina, ecc.), tensioattivo anionico (come solfato di sodio dodecano), tensioattivo cationico tensioattivi (come tetradeciltrimetilammonio ossalato), fenolo, 8-idrossichinolina, ditiotreitolo (DTT), proteinasi K e altri componenti. Questa soluzione di conservazione serve a scindere direttamente il virus per rilasciare l'acido nucleico ed eliminare la RNasi. Se utilizzato solo per RT-PCR, è più adatto, ma il lisato può inattivare il virus. Questo tipo di campione non può essere utilizzato per la separazione delle colture virali.
Si consiglia di utilizzare sali EDTA per l'agente chelante degli ioni metallici utilizzato nella soluzione di conservazione del virus (come acido etilendiamminotetraacetico dipotassico, acido etilendiamminotetraacetico disodico, ecc.) e non è consigliabile utilizzare eparina (come eparina di sodio, eparina di litio), in modo da non influenzare il rilevamento della PCR.
3. Tubo di conservazione: il materiale del tubo di conservazione deve essere selezionato con attenzione. Esistono dati che suggeriscono che il polipropilene (polipropilene) è correlato all'adsorbimento dell'acido nucleico, soprattutto a concentrazioni di ioni ad alta tensione, il polietilene (polietilene) è più preferito del polipropilene (polipropilene) DNA/RNA facile da afferrare. La plastica polimerica di polietilene-propilene (poliallomero) e alcuni contenitori di plastica di polipropilene (polipropilene) appositamente lavorati sono più adatti per la conservazione di DNA/RNA. Inoltre, quando si utilizza un tampone frangibile, la provetta di conservazione deve cercare di selezionare un contenitore con un'altezza superiore a 8 cm per evitare che il contenuto venga schizzato e contaminato quando il tampone viene rotto.
4. Acqua per la soluzione di conservazione della produzione: l'acqua ultrapura utilizzata per la soluzione di conservazione della produzione deve essere filtrata attraverso una membrana di ultrafiltrazione con un peso molecolare di 13.000 per garantire la rimozione delle impurità polimeriche da fonti biologiche, come RNasi, DNasi ed endotossina, e la purificazione ordinaria non è raccomandata. Acqua o acqua distillata.
2. Utilizzo di provette per il campionamento dei virus
Il campionamento utilizzando la provetta per il prelievo di virus si divide principalmente in campionamento orofaringeo e campionamento rinofaringeo:
1. Campionamento orofaringeo: premere prima la lingua con l'abbassalingua, quindi estendere la testa del tampone di campionamento nella gola per pulire le tonsille faringee bilaterali e la parete faringea posteriore e pulire la parete faringea posteriore con una leggera forza, evitando di toccare la lingua unità.
2. Prelievo nasofaringeo: misurare la distanza dalla punta del naso al lobo dell'orecchio con un tampone e segnare con un dito, inserire il tampone di campionamento nella cavità nasale in direzione del naso verticale (viso), il tampone dovrebbe estendersi almeno metà della lunghezza del lobo dell'orecchio fino alla punta del naso. Lasciare il tampone nel naso per 15-30 secondi, ruotare delicatamente 3-5 volte e ritirare il tampone.
Non è difficile capire dalla modalità di utilizzo se si tratta di un tampone orofaringeo o di un tampone nasofaringeo, il prelievo è un compito tecnico, difficile e contaminato. La qualità del campione raccolto è direttamente correlata alla successiva rilevazione. Se il campione raccolto ha una carica virale bassa, è facile causare falsi negativi, difficile confermare la diagnosi.
Orario di pubblicazione: 21 giugno 2020
