1. Informazioni sulla produzione di tubi di campionamento virus
I tubi di campionamento dei virus appartengono ai prodotti per dispositivi medici. La maggior parte dei produttori nazionali sono registrati secondo i prodotti di prima classe e poche aziende sono registrate secondo i prodotti di seconda classe. Recentemente, al fine di soddisfare le esigenze di emergenza di Wuhan e altri luoghi, molte aziende hanno preso il "canale di emergenza" "fare domanda per il permesso di record di prima classe.
1. Cambiere di campionamento: il tampone di campionamento contatta direttamente il sito di campionamento e il materiale della testa di campionamento è strettamente correlato al rilevamento successivo. La testa di tampone di campionamento deve essere realizzata in fibra sintetica poliestere (PE) o rayon (fibra artificiale). Non è possibile utilizzare spugne alginato di calcio o tamponi in legno (compresi i bastoncini di bambù) e il materiale della testa di tampone non può essere prodotti di cotone. Poiché la fibra di cotone ha un forte adsorbimento delle proteine, non è facile eluire nella successiva soluzione di conservazione; E quando un bastoncino di legno o un bastoncino di bambù contenente alginato di calcio e componenti di legno viene rotto, immergersi nella soluzione di conservazione adsorbirà anche la proteina e può anche inibire la successiva reazione PCR. Si consiglia di utilizzare fibre sintetiche come fibra PE, fibra di poliestere e fibra di polipropilene per il materiale della testa di tampone. Le fibre naturali come il cotone non sono raccomandate. Anche le fibre di nylon non sono raccomandate perché le fibre di nylon (simili alle teste di spazzolino da denti) assorbono l'acqua. Scarso, con conseguente volume di campionamento insufficiente, che colpisce la velocità di rilevamento. La spugna dell'alginato di calcio è vietata per il campionamento del materiale di tampone! La maniglia del tampone ha due tipi: rotto e integrato. Il tampone rotto viene posizionato nel tubo di conservazione dopo il campionamento e il tappo del tubo viene rotto dopo essere stato rotto dalla posizione vicino alla testa di campionamento; Il tampone incorporato inserisce direttamente il tampone di campionamento nel tubo di conservazione dopo il campionamento e il coperchio del tubo del tubo di conservazione è integrato in allineare il piccolo foro con la parte superiore della maniglia e serrare il coperchio del tubo. Confrontando i due metodi, quest'ultimo è relativamente sicuro. Quando il tampone rotto viene utilizzato in combinazione con un tubo di conservazione di dimensioni più piccolo, può causare schizzi di liquido nel tubo quando rotto e la piena attenzione dovrebbe essere prestata al rischio di contaminazione causata dall'uso improprio del prodotto. Si consiglia di utilizzare tubo estruso di polistirene cavo (PS) o tubo di piegatura di iniezione di polipropilene (PP) per il materiale della maniglia di tampone. Indipendentemente dal materiale utilizzato, non è possibile aggiungere additivi alginati di calcio; bastoncini di legno o bastoncini di bambù. In breve, il tampone di campionamento dovrebbe garantire la quantità di campionamento e la quantità di rilascio e i materiali selezionati non devono avere sostanze che influiscono sui test successivi.
2. Soluzione di conservazione del virus: esistono due tipi di soluzioni di conservazione del virus ampiamente utilizzate nel mercato, una è una soluzione di mantenimento del virus modificato in base al mezzo di trasporto e l'altra è una soluzione modificata per il lisato di estrazione di acido nucleico.
Il componente principale del primo è il terreno di coltura di base (MEM) di Eagle o il sale equilibrato di Hank, che viene aggiunto con sali, aminoacidi, vitamine, glucosio e proteine necessarie per la sopravvivenza del virus. Questa soluzione di stoccaggio utilizza sale di sodio rosso fenolo come indicatore e soluzione. Quando il valore del pH è 6,6-8,0, la soluzione è rosa. Il glucosio, la L-glutammina e la proteina necessari vengono aggiunti alla soluzione di conservazione. La proteina è fornita sotto forma di siero bovino fetale o albumina sierica bovina, che può stabilizzare il guscio proteico del virus. Poiché la soluzione di conservazione è ricca di sostanze nutritive, è favorevole alla sopravvivenza del virus ma anche benefica per la crescita dei batteri. Se la soluzione di conservazione è contaminata da batteri, si moltiplicherà in grandi quantità. L'anidride carbonica nei suoi metaboliti causerà la caduta del pH della soluzione di conservazione dal rosa diventa gialla. Pertanto, la maggior parte dei produttori ha aggiunto ingredienti antibatterici alle loro formulazioni. Gli agenti antibatterici raccomandati sono penicillina, streptomicina, gentamicina e polimixina B. sodio azide e 2-metil non sono inibitori raccomandati come 4-metil-4-Isotiazolina-3-ONE (MCI) e 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-one (CMCi) a causa di un effetto-3-ono (MCI) (MCI) e MCI) e 5-cloro-2-metil-4-isotiazolin-3-one. Poiché il campione fornito da questa soluzione di conservazione è fondamentalmente un virus vivo, l'originalità del campione può essere mantenuta nella massima misura e può essere usato non solo per l'estrazione e il rilevamento di acidi nucleici del virus, ma anche per la coltivazione e l'isolamento dei virus. Tuttavia, va notato che quando utilizzato per il rilevamento, è necessario eseguire l'estrazione e la purificazione dell'acido nucleico dopo l'inattivazione.
Un altro tipo di soluzione di conservazione preparata sulla base del lisato di estrazione dell'acido nucleico, i componenti principali sono sali bilanciati, agente chelante EDTA, sale di guanidina (come isotiocianato di guanidina, guanidina cloridrato, ecc. Phenolo, 8-idrossiquinolina, ditiotreitolo (DTT), proteinasi K e altri componenti, questa soluzione di conservazione è quella di scindere direttamente il virus per rilasciare l'acido nucleico ed eliminare la RNase. Se usato solo per RT-PCR, è più adatto, ma il lisato può inattivare il virus. Questo tipo di campione non può essere utilizzato per la separazione della coltura del virus.
Si raccomanda all'agente chelante ione metallico utilizzato nella soluzione di conservazione del virus per utilizzare i sali di EDTA (come il dipotassio etilendiaminetetraacetico acido, il disodio etilendiaminatetraacetico dell'acido, ecc.), E non si raccomanda di usare l'eparina (come il sodio eparina, il litio heparina), per quanto riguarda la PCR di non difficoltà.
3. Tubo di conservazione: il materiale del tubo di conservazione deve essere selezionato con cura. Esistono dati che suggeriscono che il polipropilene (polipropilene) è correlato all'adsorbimento dell'acido nucleico, in particolare ad alta concentrazione di ioni di tensione, il polietilene (polietilene) è più preferito del polipropilene (polipropilene) facile da afferrare il DNA/RNA. Polimero di polietilene-propilene (poliallomer) e alcuni contenitori di plastica in polipropilene (polipropilene) appositamente trasformati sono più adatti per la conservazione del DNA/RNA. Inoltre, quando si utilizza un tampone ridotta, il tubo di conservazione dovrebbe provare a selezionare un contenitore con un'altezza superiore a 8 cm per impedire che il contenuto venga schizzato e contaminato quando il tampone è rotto.
4. Acqua per la soluzione di conservazione della produzione: l'acqua ultrapura utilizzata per la soluzione di conservazione della produzione deve essere filtrata attraverso una membrana ultrafiltrazione con un peso molecolare di 13.000 per garantire la rimozione delle impurità polimeriche da fonti biologiche, come la RNase, la DNASE e l'endotossina e la purificazione ordinaria non è raccomandata. Acqua o acqua distillata.
2. Uso di tubi di campionamento del virus
Il campionamento usando il tubo di campionamento del virus è principalmente diviso in campionamento orofaringeo e campionamento rinofaringeo:
1. Campionamento orofaringeo: premere prima la lingua con il depressor della lingua, quindi estendere la testa del tampone di campionamento nella gola per asciugare le tonsille faringea bilaterali e la parete faringea posteriore e pulire la parete faringeo posteriore con forza della luce, evitare di toccare l'unità della lingua.
2. Campionamento rinofaringeo: misurare la distanza dalla punta del naso al lobo dell'orecchio con un tampone e un segno con un dito, inserire il tampone di campionamento nella cavità nasale nella direzione del naso verticale (faccia), il tampone deve estendersi almeno la metà della lunghezza dell'orecchio.
Non è difficile vedere dal metodo d'uso, che si tratti di un tampone orofaringeo o di un tampone rinofaringeo, il campionamento è un compito tecnico, che è difficile e contaminato. La qualità del campione raccolto è direttamente correlata al rilevamento successivo. Se il campione raccolto ha un carico virale basso, facile da causare falsi negativi, è difficile confermare la diagnosi.
Tempo post: giugno-21-2020
