מספר מחשבות על צינור דגימת וירוסים

1. על ייצור צינורות דגימת וירוסים
צינורות דגימת וירוסים שייכים למוצרי מכשור רפואי. רוב היצרנים המקומיים רשומים לפי המוצרים מהשורה הראשונה, ומעט החברות הרשומות לפי המוצרים מהשורה השנייה. לאחרונה, על מנת לענות על צורכי החירום של ווהאן ומקומות אחרים, חברות רבות לקחו את "ערוץ החירום" "הגישו בקשה להרשאת שיא מהשורה הראשונה. צינור דגימת הנגיף מורכב מספוגית דגימה, תמיסת שימור וירוסים ואריזה חיצונית. מכיוון שאין תקן לאומי או תקן תעשייתי מאוחד, המוצרים של יצרנים שונים משתנים מאוד.

1. ספוגית דגימה: ספוגית הדגימה מתקשרת ישירות עם אתר הדגימה, והחומר של ראש הדגימה קשור קשר הדוק לגילוי הבא. ראש ספוגית הדגימה צריך להיות עשוי מסיבים סינתטיים של פוליאסטר (PE) או מ-Rion (סיבים מעשה ידי אדם). לא ניתן להשתמש בספוג סידן אלגינט או במקלוני עץ (כולל מקלות במבוק), והחומר של ראש המקלון אינו יכול להיות מוצרי כותנה. מכיוון שלסיבי כותנה יש ספיחה חזקה של חלבון, זה לא קל לחפוף לתוך תמיסת האחסון שלאחר מכן; וכאשר מקל עץ או מקל במבוק המכילים סידן אלגינט ורכיבי עץ נשבר, השרייה בתמיסת האחסון תספוג גם חלבון, ואפילו תספוח. היא יכולה לעכב את תגובת ה-PCR שלאחר מכן. מומלץ להשתמש בסיבים סינתטיים כמו סיבי PE, סיבי פוליאסטר וסיבי פוליפרופילן לחומר ראש הספוגית. סיבים טבעיים כגון כותנה אינם מומלצים. גם סיבי ניילון אינם מומלצים מכיוון שסיבי ניילון (בדומה לראשי מברשת שיניים) סופגים מים. גרוע, וכתוצאה מכך נפח דגימה לא מספיק, המשפיע על קצב הזיהוי. ספוג סידן אלגינט אסור לדגימת חומר ספוגית! לידית ספוגית שני סוגים: שבורה ומובנית. את הספוגית השבורה מניחים בצינור האחסון לאחר הדגימה, ומכסה הצינור נשבר לאחר שנשבר מהמיקום ליד ראש הדגימה; הספוגית המובנית מכניסה ישירות את ספוגית הדגימה לתוך צינור האחסון לאחר הדגימה, ומכסה צינור האחסון בנוי יישר את החור הקטן עם החלק העליון של הידית והדק את כיסוי הצינור. בהשוואה בין שתי השיטות, האחרונה בטוחה יחסית. כאשר משתמשים בספוגית השבורה יחד עם צינור אחסון בגודל קטן יותר, הוא עלול לגרום להתזת נוזלים בצינור כאשר הוא נשבר, ויש להקדיש תשומת לב מלאה לסיכון של זיהום הנגרם משימוש לא נכון במוצר. מומלץ להשתמש בצינור מפוליסטירן חלול (PS) או בצינור קמטים להזרקת פוליפרופילן (PP) עבור החומר של ידית הספוגית. לא משנה באיזה חומר משתמשים, לא ניתן להוסיף תוספי סידן אלגינט; מקלות עץ או מקלות במבוק. בקיצור, ספוגית הדגימה צריכה להבטיח את כמות הדגימה ואת כמות השחרור, ואסור שבחומרים הנבחרים יהיו חומרים המשפיעים על הבדיקות הבאות.

2. תמיסת שימור וירוסים: ישנם שני סוגים של פתרונות שימור וירוסים בשימוש נרחב בשוק, האחד הוא תמיסת תחזוקה של וירוסים שונה על בסיס מדיום ההובלה, והשני הוא תמיסה שונה עבור lysate מיצוי חומצות גרעין.
המרכיב העיקרי של הראשון הוא מצע התרבות הבסיסי של איגל (MEM) או המלח המאוזן של האנק, שמוסיפים לו המלחים, חומצות האמינו, הוויטמינים, הגלוקוז והחלבון הדרושים להישרדות הנגיף. פתרון אחסון זה משתמש במלח נתרן אדום פנול כאינדיקטור ותמיסה. כאשר ערך ה-pH הוא 6.6-8.0, התמיסה ורודה. לתמיסת השימור מוסיפים את הגלוקוז, L-גלוטמין והחלבון הדרושים. החלבון מסופק בצורה של סרום בקר עוברי או אלבומין בסרום בקר, שיכול לייצב את מעטפת החלבון של הנגיף. מכיוון שתמיסת השימור עשירה בחומרי הזנה, היא תורמת להישרדות הנגיף אך גם מועילה לצמיחת חיידקים. אם תמיסת השימור מזוהמת בחיידקים, היא תתרבה בכמויות גדולות. הפחמן הדו-חמצני במטבוליטים שלו יגרום ל-pH של תמיסת השימור לרדת מורוד הופך לצהוב. לכן, רוב היצרנים הוסיפו מרכיבים אנטיבקטריאליים לניסוחים שלהם. החומרים האנטיבקטריאליים המומלצים הם פניצילין, סטרפטומיצין, גנטמיצין ופולימיקסין B. נתרן אזיד ו-2-מתיל אינם מומלצים מעכבים כגון 4-מתיל-4-איזותיאזולין-3-און (MCI) ו-5-כלורו-2-מתיל-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) מכיוון שלרכיבים אלו יש השפעה על תגובת PCR. מכיוון שהדגימה שמספקת תמיסת שימור זו היא בעצם וירוס חי, ניתן לשמור על מקוריות הדגימה במידה הרבה ביותר, וניתן להשתמש בה לא רק למיצוי וזיהוי של חומצות גרעין של וירוסים, אלא גם לטיפוח וגידול. בידוד של וירוסים. עם זאת, יש לציין שכאשר משתמשים בהם לגילוי, יש לבצע מיצוי וטיהור של חומצת גרעין לאחר אינאקטיבציה.
סוג אחר של תמיסת שימור שהוכנה על בסיס ליזאט מיצוי חומצת גרעין, המרכיבים העיקריים הם מלחים מאוזנים, חומר קלתי EDTA, מלח גואנידין (כגון גואנידין איזותיוציאנט, גואנידין הידרוכלוריד וכו'), פעיל שטח אניוני (כגון דודקן סודיום סולפט), קטיוני חומרים פעילי שטח (כגון טטראדציל-טרימתיל-אמוניום אוקסלט), פנול, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K ורכיבים אחרים, תמיסת אחסון זו נועדה לבקע ישירות את הנגיף כדי לשחרר את חומצת הגרעין ולחסל את RNase. אם משתמשים בו רק עבור RT-PCR, זה מתאים יותר, אבל הליסט יכול להשבית את הנגיף. לא ניתן להשתמש בדגימה מסוג זה להפרדת תרבות וירוסים.

מומלץ להשתמש בחומר הקלתי של יוני המתכת המשמש בתמיסת שימור הנגיף להשתמש במלחי EDTA (כגון חומצה דיפוטסיום אתילן-דיאמין-טטרה-אצטית, חומצה דיסודיום אתילן-דיאמין-טטרה-אצטית וכו'), ולא מומלץ להשתמש בהפרין (כגון נתרן הפרין, ליתיום הפרין), כדי לא להשפיע על זיהוי PCR.
3. צינור שימור: יש לבחור בקפידה את החומר של צינור השימור. ישנם נתונים המצביעים על כך שפוליפרופילן (פוליפרופילן) קשור לספיחת חומצת גרעין, במיוחד בריכוז יונים במתח גבוה, פוליאתילן (פוליאתילן) עדיף יותר מפוליפרופילן (פוליפרופילן) קל לתפיסה של DNA/RNA. פלסטיק פוליאתילן-פרופילן פולימר (פוליאלומר) וכמה מכלי פלסטיק מפוליפרופילן (פוליפרופילן) מעובדים במיוחד מתאימים יותר לאחסון DNA/RNA. בנוסף, בעת שימוש בספוגית שבירה, על צינור האחסון לנסות לבחור מיכל בגובה העולה על 8 ס"מ כדי למנוע התיזה וזיהום של התכולה בעת שבירת הספוגית.

4. תמיסת שימור מים לייצור: יש לסנן את המים האולטרה-טהורים המשמשים לתמיסת שימור הייצור דרך ממברנת סינון אולטרה במשקל מולקולרי של 13,000 כדי להבטיח הסרת זיהומים פולימריים ממקורות ביולוגיים, כגון RNase, DNase ואנדוטוקסין, וכן טיהור רגיל אינו מומלץ. מים או מים מזוקקים.

2. שימוש בצינורות דגימת וירוסים

הדגימה באמצעות צינור דגימת הנגיף מחולקת בעיקר לדגימת פה-לוע ודגימת אף-לוע:

1. דגימת אורו-לוע: תחילה לחץ על הלשון עם מדכא הלשון, לאחר מכן הרחיב את ראש ספוגית הדגימה לתוך הגרון כדי לנגב את שקדי הלוע הדו-צדדיים ואת דופן הלוע האחורי, ולנגב את דופן הלוע האחורי בכוח קל, הימנעות מנגיעה בלשון. יְחִידָה.

2. דגימת אף לוע: למדוד את המרחק מקצה האף לאנת האוזן בעזרת ספוגית ולסמן באצבע, להחדיר את ספוגית הדגימה לחלל האף לכיוון האף האנכי (הפנים), הספוגית צריכה להימשך לפחות חצי מאורך תנוך האוזן עד קצה האף, השאר את הספוגית באף למשך 15-30 שניות, סובב בעדינות 3-5 פעמים, ומשוך את הספוגית.
לא קשה לראות משיטת השימוש, בין אם מדובר בספוגית פה-לוע או בספוגית אף, הדגימה היא משימה טכנית, שהיא קשה ומזוהמת. איכות הדגימה שנאספה קשורה ישירות לגילוי הבא. אם לדגימה שנאספה יש עומס ויראלי נמוך, קל לגרום לשלילי שווא, קשה לאשר את האבחנה.