1. Mengenai pembuatan tiub pensampelan virus
Tiub pensampelan virus tergolong dalam produk peranti perubatan. Kebanyakan pengeluar domestik didaftarkan mengikut produk kelas pertama, dan beberapa syarikat didaftarkan mengikut produk kelas kedua. Baru-baru ini, untuk memenuhi keperluan kecemasan Wuhan dan tempat-tempat lain, banyak syarikat telah menggunakan "saluran kecemasan" "Memohon kebenaran rekod kelas pertama. Tiub pensampelan virus terdiri daripada swab pensampelan, penyelesaian pemeliharaan virus dan pembungkusan luar. Oleh kerana tiada piawaian kebangsaan atau piawaian industri yang bersatu, produk pelbagai pengeluar sangat berbeza.
1. Swab pensampelan: Swab pensampelan terus menghubungi tapak pensampelan, dan bahan kepala pensampelan berkait rapat dengan pengesanan seterusnya. Kepala swab pensampelan hendaklah diperbuat daripada gentian sintetik Poliester (PE) atau Rayon (gentian buatan manusia). Span kalsium alginat atau swab kayu (termasuk batang buluh) tidak boleh digunakan, dan bahan kepala swab tidak boleh menjadi produk kapas. Oleh kerana gentian kapas mempunyai penjerapan protein yang kuat, ia tidak mudah untuk dicairkan ke dalam larutan penyimpanan seterusnya; dan apabila batang kayu atau batang buluh yang mengandungi kalsium alginat dan komponen kayu dipecahkan, merendam dalam larutan simpanan juga akan menyerap protein, malah ia boleh menghalang tindak balas PCR yang seterusnya. Adalah disyorkan untuk menggunakan gentian sintetik seperti gentian PE, gentian poliester dan gentian polipropilena untuk bahan kepala swab. Gentian semulajadi seperti kapas tidak digalakkan. Gentian nilon juga tidak disyorkan kerana gentian nilon (serupa dengan kepala berus gigi) menyerap air. Lemah, mengakibatkan volum pensampelan tidak mencukupi, menjejaskan kadar pengesanan. Span kalsium alginat dilarang untuk bahan sapuan sampel! Pemegang swab mempunyai dua jenis: patah dan terbina dalam. Swab yang patah diletakkan di dalam tiub simpanan selepas pensampelan, dan penutup tiub dipecahkan selepas dipecahkan dari kedudukan berhampiran kepala pensampelan; swab terbina dalam terus meletakkan swab pensampelan ke dalam tiub simpanan selepas pensampelan, dan penutup tiub simpanan dibina dalam Sejajarkan lubang kecil dengan bahagian atas pemegang dan ketatkan penutup tiub. Membandingkan kedua-dua kaedah, yang kedua adalah agak selamat. Apabila swab yang patah digunakan bersama dengan tiub penyimpanan saiz yang lebih kecil, ia boleh menyebabkan percikan cecair dalam tiub apabila pecah, dan perhatian penuh harus diberikan kepada risiko pencemaran yang disebabkan oleh penggunaan produk yang tidak betul. Adalah disyorkan untuk menggunakan tiub tersemperit polistirena (PS) berongga atau tiub kedut suntikan polipropilena (PP) untuk bahan pemegang swab. Tidak kira apa bahan yang digunakan, aditif kalsium alginat tidak boleh ditambah; tongkat kayu atau tongkat Buluh. Ringkasnya, swab pensampelan harus memastikan jumlah pensampelan dan jumlah pelepasan, dan bahan yang dipilih mestilah tidak mempunyai bahan yang menjejaskan ujian berikutnya.
2. Penyelesaian pemeliharaan virus: Terdapat dua jenis penyelesaian pemeliharaan virus yang digunakan secara meluas di pasaran, satu ialah penyelesaian penyenggaraan virus yang diubah suai berdasarkan medium pengangkutan, dan satu lagi ialah penyelesaian yang diubah suai untuk lisat pengekstrakan asid nukleik.
Komponen utama yang pertama ialah medium budaya asas Eagle (MEM) atau garam seimbang Hank, yang ditambah dengan garam, asid amino, vitamin, glukosa dan protein yang diperlukan untuk kelangsungan hidup virus. Larutan penyimpanan ini menggunakan garam natrium merah fenol sebagai penunjuk dan larutan. Apabila nilai pH ialah 6.6-8.0, larutan berwarna merah jambu. Glukosa, L-glutamin dan protein yang diperlukan ditambah kepada larutan pengawetan. Protein disediakan dalam bentuk serum lembu janin atau albumin serum lembu, yang boleh menstabilkan kulit protein virus. Oleh kerana larutan pengawetan kaya dengan nutrien, ia kondusif untuk kemandirian virus tetapi juga bermanfaat kepada pertumbuhan bakteria. Jika larutan pengawetan tercemar dengan bakteria, ia akan membiak dalam kuantiti yang banyak. Karbon dioksida dalam metabolitnya akan menyebabkan pH larutan pengawetan jatuh daripada merah jambu Menjadi kuning. Oleh itu, kebanyakan pengeluar telah menambah bahan antibakteria kepada formulasi mereka. Agen antibakteria yang disyorkan ialah penisilin, streptomisin, gentamicin dan polymyxin B. Natrium azida dan 2-metil tidak disyorkan Perencat seperti 4-metil-4-isothiazolin-3-one (MCI) dan 5-chloro-2-methyl-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) kerana komponen ini mempunyai kesan ke atas tindak balas PCR. Oleh kerana sampel yang disediakan oleh penyelesaian pemeliharaan ini pada asasnya adalah virus hidup, keaslian sampel boleh disimpan pada tahap yang paling besar, dan ia boleh digunakan bukan sahaja untuk pengekstrakan dan pengesanan asid nukleik virus, tetapi juga untuk penanaman dan pengasingan virus. Walau bagaimanapun, perlu diingatkan bahawa apabila digunakan untuk pengesanan, pengekstrakan dan penulenan asid nukleik mesti dilakukan selepas penyahaktifan.
Satu lagi jenis larutan pengawetan yang disediakan berdasarkan lisat pengekstrakan asid nukleik, komponen utama adalah garam seimbang, agen pengkelat EDTA, garam guanidine (seperti guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride, dll.), surfaktan anionik (seperti dodecane Sodium sulfate), kationik. surfaktan (seperti tetradesiltrimetilammonium oksalat), fenol, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), proteinase K dan komponen lain, Penyelesaian penyimpanan ini adalah untuk membelah virus secara langsung untuk membebaskan asid nukleik dan menghapuskan RNase. Jika hanya digunakan untuk RT-PCR, ia lebih sesuai, tetapi lysate boleh menyahaktifkan virus. Sampel jenis ini tidak boleh digunakan untuk pemisahan budaya virus.
Ejen pengkelat ion logam yang digunakan dalam larutan pemeliharaan virus disyorkan untuk menggunakan garam EDTA (seperti asid dipotassium ethylenediaminetetraacetic, asid disodium ethylenediaminetetraacetic, dll.), dan tidak disyorkan untuk menggunakan heparin (seperti natrium heparin, litium heparin), supaya tidak menjejaskan pengesanan PCR.
3. Tiub pemeliharaan: Bahan tiub pemeliharaan hendaklah dipilih dengan teliti. Terdapat data mencadangkan bahawa polipropilena (Polypropylene) berkaitan dengan penjerapan asid nukleik, terutamanya pada kepekatan ion tegangan tinggi, polietilena (Polyethylene) lebih disukai daripada polipropilena (Polypropylene) Mudah untuk memahami DNA/RNA. Plastik polietilena-propilena polimer (Polyallomer) dan beberapa bekas plastik polipropilena (Polypropylene) yang diproses khas lebih sesuai untuk penyimpanan DNA/RNA. Di samping itu, apabila menggunakan swab boleh pecah, tiub penyimpanan hendaklah cuba memilih bekas dengan ketinggian lebih daripada 8 cm untuk mengelakkan kandungan daripada terpercik dan tercemar apabila swab itu pecah.
4. Air untuk penyelesaian pemeliharaan pengeluaran: Air ultratulen yang digunakan untuk larutan pemeliharaan pengeluaran hendaklah ditapis melalui membran ultraturasan dengan berat molekul 13,000 untuk memastikan penyingkiran kekotoran polimer daripada sumber biologi, seperti RNase, DNase, dan endotoksin, dan pembersihan biasa tidak digalakkan. Air atau air suling.
2. Penggunaan tiub pensampelan virus
Pensampelan menggunakan tiub pensampelan virus terbahagi terutamanya kepada pensampelan orofarinks dan pensampelan nasofaring:
1. Persampelan oropharyngeal: Mula-mula tekan lidah dengan penekan lidah, kemudian panjangkan kepala swab pensampelan ke dalam kerongkong untuk mengelap tonsil pharyngeal dua hala dan dinding pharyngeal posterior, dan lap dinding pharyngeal posterior dengan daya ringan, elakkan daripada menyentuh lidah unit.
2. Persampelan nasofaring: ukur jarak dari hujung hidung ke cuping telinga dengan swab dan tandakan dengan jari, masukkan swab pensampelan ke dalam rongga hidung mengikut arah hidung menegak (muka), swab hendaklah memanjangkan. sekurang-kurangnya separuh panjang cuping telinga ke hujung hidung, Biarkan sapuan di hidung selama 15-30 saat, putar perlahan-lahan 3-5 kali, dan tarik balik swab.
Tidak sukar untuk melihat dari kaedah penggunaan, sama ada swab oropharyngeal atau swab nasofaring, pensampelan adalah tugas teknikal, yang sukar dan tercemar. Kualiti sampel yang dikumpul secara langsung berkaitan dengan pengesanan seterusnya. Jika sampel yang dikumpul mempunyai viral load Rendah, mudah menyebabkan negatif palsu, sukar untuk mengesahkan diagnosis.
Masa siaran: Jun-21-2020
