1. Over de vervaardiging van virusmonsterbuisjes
Virusbemonsteringsbuisjes behoren tot producten voor medische hulpmiddelen. De meeste binnenlandse fabrikanten zijn geregistreerd op basis van eersteklas producten, en weinig bedrijven zijn geregistreerd op basis van tweederangsproducten. Om aan de noodbehoeften van Wuhan en andere plaatsen te voldoen, hebben veel bedrijven onlangs het ‘noodkanaal’ gebruikt: ‘Vraag toestemming voor eersteklas opnames aan. De virusbemonsteringsbuis bestaat uit een bemonsteringsstaafje, een virusconserveringsoplossing en een buitenverpakking. Omdat er geen uniforme nationale standaard of industriestandaard bestaat, variëren de producten van verschillende fabrikanten enorm.
1. Bemonsteringsstaafje: het bemonsteringsstaafje maakt rechtstreeks contact met de bemonsteringsplaats en het materiaal van de bemonsteringskop is nauw verwant aan de daaropvolgende detectie. De kop van het bemonsteringsstaafje moet gemaakt zijn van polyester (PE) synthetische vezels of rayon (kunstmatige vezels). Calciumalginaatsponsjes of houten wattenstaafjes (inclusief bamboestokken) kunnen niet worden gebruikt, en het materiaal van de wattenstaafjeskop mag geen katoenen producten zijn. Omdat katoenvezels een sterke eiwitadsorptie hebben, is het niet gemakkelijk om ze in de daaropvolgende bewaaroplossing te elueren; en wanneer een houten stok of bamboestok met calciumalginaat en houten componenten kapot gaat, zal het weken in de bewaaroplossing ook eiwit adsorberen, en zelfs de daaropvolgende PCR-reactie remmen. Het wordt aanbevolen om synthetische vezels zoals PE-vezels, polyestervezels en polypropyleenvezels te gebruiken voor het materiaal van de wattenstaafjeskop. Natuurlijke vezels zoals katoen worden niet aanbevolen. Nylonvezels worden ook niet aanbevolen omdat nylonvezels (vergelijkbaar met opzetborstels) water absorberen. Slecht, resulterend in onvoldoende bemonsteringsvolume, wat de detectiesnelheid beïnvloedt. Voor het bemonsteren van swabmateriaal is een calciumalginaatspons verboden! Het wattenstaafje heeft twee typen: gebroken en ingebouwd. Het gebroken wattenstaafje wordt na de bemonstering in de opslagbuis geplaatst en de buisdop wordt gebroken nadat deze is gebroken vanuit de positie nabij de bemonsteringskop; het ingebouwde wattenstaafje plaatst het bemonsteringsstaafje na de bemonstering direct in de opslagbuis en de buisafdekking van de opslagbuis is ingebouwd. Lijn het kleine gaatje uit met de bovenkant van het handvat en draai de buisafdekking vast. Als je de twee methoden vergelijkt, is de laatste relatief veilig. Wanneer het kapotte wattenstaafje wordt gebruikt in combinatie met een kleinere opslagbuis, kan er vloeistof in de buis spatten als deze kapot is. Er moet volledige aandacht worden besteed aan het risico op besmetting veroorzaakt door onjuist gebruik van het product. Het wordt aanbevolen om een holle polystyreen (PS) geëxtrudeerde buis of een polypropyleen (PP) injectie-rilbuis te gebruiken als materiaal voor het handvat van het wattenstaafje. Welk materiaal er ook wordt gebruikt, calciumalginaatadditieven kunnen niet worden toegevoegd; houten stokken of bamboestokken. Kortom, het bemonsteringsstaafje moet de hoeveelheid bemonstering en de hoeveelheid vrijgave garanderen, en de geselecteerde materialen mogen geen stoffen bevatten die de daaropvolgende tests beïnvloeden.
2. Oplossing voor virusbehoud: Er zijn twee soorten oplossingen voor virusbehoud die veel op de markt worden gebruikt: de ene is een virusonderhoudsoplossing die is aangepast op basis van het transportmedium, en de andere is een aangepaste oplossing voor nucleïnezuurextractielysaat.
Het hoofdbestanddeel van de eerste is Eagle's basiscultuurmedium (MEM) of Hank's gebalanceerde zout, waaraan de zouten, aminozuren, vitaminen, glucose en eiwitten worden toegevoegd die nodig zijn voor de overleving van het virus. Deze bewaaroplossing gebruikt fenolrood natriumzout als indicator en oplossing. Wanneer de pH-waarde 6,6-8,0 is, is de oplossing roze. Aan de conserveringsoplossing worden de benodigde glucose, L-glutamine en eiwit toegevoegd. Het eiwit wordt geleverd in de vorm van foetaal runderserum of runderserumalbumine, dat de eiwitomhulling van het virus kan stabiliseren. Omdat de conserveringsoplossing rijk is aan voedingsstoffen is het bevorderlijk voor de overleving van het virus maar ook gunstig voor de groei van bacteriën. Als de conserveringsoplossing besmet is met bacteriën, zal deze zich in grote hoeveelheden vermenigvuldigen. Het kooldioxide in de metabolieten zorgt ervoor dat de pH van de bewaaroplossing van roze naar geel daalt. Daarom hebben de meeste fabrikanten antibacteriële ingrediënten aan hun formuleringen toegevoegd. De aanbevolen antibacteriële middelen zijn penicilline, streptomycine, gentamicine en polymyxine B. Natriumazide en 2-methyl worden niet aanbevolen. Remmers zoals 4-methyl-4-isothiazolin-3-on (MCI) en 5-chloor-2-methyl-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) omdat deze componenten een effect hebben op de PCR-reactie. Omdat het monster dat door deze conserveringsoplossing wordt geleverd in principe een levend virus is, kan de originaliteit van het monster maximaal behouden blijven en kan het niet alleen worden gebruikt voor de extractie en detectie van virusnucleïnezuren, maar ook voor de kweek en isolatie van virussen. Er moet echter worden opgemerkt dat bij gebruik voor detectie de extractie en zuivering van nucleïnezuren na inactivatie moeten worden uitgevoerd.
Een ander soort conserveringsoplossing bereid op basis van nucleïnezuurextractielysaat, de belangrijkste componenten zijn uitgebalanceerde zouten, EDTA-chelaatvormer, guanidinezout (zoals guanidine-isothiocyanaat, guanidinehydrochloride, enz.), Anionische oppervlakteactieve stof (zoals dodecaannatriumsulfaat), kationische oppervlakteactieve stoffen (zoals tetradecyltrimethylammoniumoxalaat), fenol, 8-hydroxychinoline, dithiothreitol (DTT), proteïnase K en andere componenten. Deze opslagoplossing is bedoeld om het virus direct te splitsen om het nucleïnezuur vrij te geven en de RNase te elimineren. Als het alleen voor RT-PCR wordt gebruikt, is het geschikter, maar het lysaat kan het virus inactiveren. Dit soort monster kan niet worden gebruikt voor het scheiden van virusculturen.
Het wordt aanbevolen om EDTA-zouten te gebruiken (zoals dikaliumethyleendiaminetetra-azijnzuur, dinatriumethyleendiaminetetra-azijnzuur), en het wordt niet aanbevolen om heparine te gebruiken (zoals natriumheparine, lithiumheparine). om de PCR-detectie niet te beïnvloeden.
3. Conserveringsbuis: Het materiaal van de conserveringsbuis moet zorgvuldig worden gekozen. Er zijn gegevens die suggereren dat polypropyleen (polypropyleen) verband houdt met de adsorptie van nucleïnezuur, vooral bij hoge ionenconcentraties heeft polyethyleen (polyethyleen) meer de voorkeur dan polypropyleen (polypropyleen). Gemakkelijk te begrijpen DNA/RNA. Plastic van polyethyleen-propyleenpolymeer (polyallomeer) en sommige speciaal vervaardigde plastic containers van polypropyleen (polypropyleen) zijn geschikter voor DNA/RNA-opslag. Bovendien moet de opslagbuis bij gebruik van een breekbaar wattenstaafje proberen een container te selecteren met een hoogte van meer dan 8 cm om te voorkomen dat de inhoud spat en besmet raakt wanneer het wattenstaafje wordt gebroken.
4. Water voor productieconserveringsoplossing: Het ultrazuivere water dat wordt gebruikt voor productieconserveringsoplossing moet worden gefilterd door een ultrafiltratiemembraan met een molecuulgewicht van 13.000 om de verwijdering van polymeeronzuiverheden uit biologische bronnen, zoals RNase, DNase en endotoxine, te garanderen, en gewone zuivering wordt niet aanbevolen. Water of gedestilleerd water.
2. Gebruik van virusmonsterbuisjes
Bemonstering met behulp van de virusbemonsteringsbuis is hoofdzakelijk onderverdeeld in orofaryngeale bemonstering en nasofaryngeale bemonstering:
1. Orofaryngeale bemonstering: druk eerst op de tong met de tongspatel en strek vervolgens de kop van het bemonsteringsstaafje in de keel om de bilaterale keelamandelen en de achterste keelholtewand af te vegen, en veeg de achterste keelholtewand met lichte kracht af, vermijd aanraking van de tong eenheid.
2. Nasofaryngeale monstername: meet de afstand van het puntje van de neus tot de oorlel met een wattenstaafje en markeer met een vinger, steek het monsternemingsstaafje in de neusholte in de richting van de verticale neus (gezicht), het wattenstaafje moet uitsteken ten minste de helft van de lengte van de oorlel tot aan het puntje van de neus. Laat het wattenstaafje 15-30 seconden in de neus zitten, draai het voorzichtig 3-5 keer rond en trek het wattenstaafje terug.
Aan de gebruikswijze is niet moeilijk te zien of het een orofaryngeaal uitstrijkje of een nasofaryngeaal uitstrijkje betreft; monstername is een technische taak, die moeilijk en vervuild is. De kwaliteit van het verzamelde monster houdt rechtstreeks verband met de daaropvolgende detectie. Als het verzamelde monster een lage virale lading heeft, is het gemakkelijk om vals-negatieven te veroorzaken en is het moeilijk om de diagnose te bevestigen.
Posttijd: 21 juni 2020
