1. Om produksjon av virusprøverør
Virusprøverør tilhører produkter for medisinsk utstyr. De fleste innenlandske produsenter er registrert i henhold til førsteklasses produkter, og få selskaper er registrert etter andreklasses produkter. Nylig, for å møte nødbehovene til Wuhan og andre steder, har mange selskaper tatt "nødkanalen" "Søk om førsteklasses rekordtillatelse. Virusprøverøret består av en prøvetakingsserviett, viruskonserveringsløsning og ytre emballasje. Siden det ikke er noen enhetlig nasjonal standard eller industristandard, varierer produktene fra ulike produsenter sterkt.
1. Prøvetakingsvattpinne: Prøvetakingsprøven kommer i direkte kontakt med prøvetakingsstedet, og materialet i prøvetakingshodet er nært knyttet til den påfølgende deteksjonen. Prøvepinnehodet bør være laget av polyester (PE) syntetisk fiber eller Rayon (kunstfiber). Kalsiumalginatsvamp eller trepinnepinner (inkludert bambuspinner) kan ikke brukes, og materialet til vattpinnehodet kan ikke være bomullsprodukter. Fordi bomullsfiber har en sterk adsorpsjon av protein, er det ikke lett å eluere inn i den påfølgende lagringsløsningen; og når en trepinne eller bambuspinne som inneholder kalsiumalginat og trekomponenter er ødelagt, vil bløtlegging i oppbevaringsløsningen også adsorbere protein, og til og med vil. Det kan hemme den påfølgende PCR-reaksjonen. Det anbefales å bruke syntetiske fibre som PE-fiber, polyesterfiber og polypropylenfiber for materialet til vattpinnehodet. Naturlige fibre som bomull anbefales ikke. Nylonfibre anbefales heller ikke fordi nylonfibre (ligner på tannbørstehoder) absorberer vann. Dårlig, noe som resulterer i utilstrekkelig prøvetakingsvolum, noe som påvirker deteksjonshastigheten. Kalsiumalginatsvamp er forbudt for prøvetaking av vattpinnemateriale! Vaskehåndtak har to typer: ødelagt og innebygd. Den ødelagte vattpinnen plasseres i oppbevaringsrøret etter prøvetaking, og rørhetten brytes etter å ha blitt brutt fra posisjonen nær prøvetakingshodet; den innebygde vattpinnen setter prøvetakingspinnen direkte inn i oppbevaringsrøret etter prøvetaking, og dekselet til oppbevaringsrøret er innebygd. Juster det lille hullet med toppen av håndtaket og stram til rørdekselet. Sammenligner man de to metodene, er sistnevnte relativt trygg. Når den ødelagte vattpinnen brukes sammen med et oppbevaringsrør av mindre størrelse, kan det forårsake væskesprut i røret når det er ødelagt, og full oppmerksomhet bør rettes mot risikoen for kontaminering forårsaket av feil bruk av produktet. Det anbefales å bruke hult ekstrudert polystyren (PS) rør eller polypropylen (PP) injeksjonsrør for materialet til vattpinnehåndtaket. Uansett hvilket materiale som brukes, kan kalsiumalginattilsetninger ikke tilsettes; trepinner eller bambuspinner. Kort oppsummert skal prøvetakingen sikre mengden prøvetaking og utslippsmengden, og de valgte materialene må ikke ha stoffer som påvirker etterfølgende testing.
2. Viruskonserveringsløsning: Det er to typer viruskonserveringsløsninger som er mye brukt på markedet, den ene er en virusvedlikeholdsløsning modifisert basert på transportmediet, og den andre er en modifisert løsning for nukleinsyreekstraksjonslysat.
Hovedkomponenten i førstnevnte er Eagles grunnleggende kulturmedium (MEM) eller Hanks balanserte salt, som er tilsatt salter, aminosyrer, vitaminer, glukose og protein som er nødvendig for virusoverlevelse. Denne lagringsløsningen bruker fenolrødt natriumsalt som en indikator og løsning. Når pH-verdien er 6,6-8,0 er løsningen rosa. Nødvendig glukose, L-glutamin og protein tilsettes konserveringsløsningen. Proteinet tilveiebringes i form av føtalt bovint serum eller bovint serumalbumin, som kan stabilisere proteinskallet til viruset. Fordi konserveringsløsningen er rik på næringsstoffer, er den gunstig for virusets overlevelse, men også gunstig for veksten av bakterier. Hvis konserveringsløsningen er forurenset med bakterier, vil den formere seg i store mengder. Karbondioksidet i metabolittene vil føre til at pH i konserveringsløsningen faller fra rosa Blir gul. Derfor har de fleste produsenter lagt til antibakterielle ingredienser til formuleringene sine. De anbefalte antibakterielle midlene er penicillin, streptomycin, gentamicin og polymyxin B. Natriumazid og 2-metyl anbefales ikke Hemmere som 4-metyl-4-isotiazolin-3-on (MCI) og 5-klor-2-metyl-4 -isotiazolin-3-on (CMCI) fordi disse komponentene har en effekt på PCR-reaksjonen. Siden prøven levert av denne konserveringsløsningen i utgangspunktet er et levende virus, kan originaliteten til prøven beholdes i størst grad, og den kan brukes ikke bare til ekstraksjon og påvisning av virusnukleinsyrer, men også til dyrking og isolering av virus. Det skal imidlertid bemerkes at når det brukes til deteksjon, må nukleinsyreekstraksjon og rensing utføres etter inaktivering.
En annen type konserveringsløsning fremstilt basert på nukleinsyreekstraksjonslysat, hovedkomponentene er balanserte salter, EDTA-chelateringsmiddel, guanidinsalt (som guanidinisotiocyanat, guanidinhydroklorid, etc.), anionisk overflateaktivt middel (som dodekannatriumsulfat), kationisk overflateaktive stoffer (som tetradecyltrimetylammoniumoksalat), fenol, 8-hydroksykinolin, ditiotreitol (DTT), proteinase K og andre komponenter. Denne lagringsløsningen skal direkte spalte viruset for å frigjøre nukleinsyren og eliminere RNase. Hvis det bare brukes til RT-PCR, er det mer egnet, men lysatet kan inaktivere viruset. Denne typen prøve kan ikke brukes til viruskulturseparasjon.
Metallion-chelateringsmidlet som brukes i viruskonserveringsløsningen anbefales å bruke EDTA-salter (som dikaliumetylendiamintetraeddiksyre, dinatriumetylendiamintetraeddiksyre, etc.), og det anbefales ikke å bruke heparin (som natriumheparin, litiumheparin), for ikke å påvirke PCR-deteksjon.
3. Konserveringsrør: Materialet til konserveringsrøret bør velges nøye. Det er data som tyder på at polypropylen (polypropylen) er relatert til adsorpsjon av nukleinsyre, spesielt ved høyspenning ionekonsentrasjon, polyetylen (polyetylen) er mer foretrukket enn polypropylen (polypropylen) Lett å forstå DNA/RNA. Polyetylen-propylen polymer (polyallomer) plast og noen spesialbehandlet polypropylen (polypropylen) plastbeholdere er mer egnet for DNA/RNA-lagring. I tillegg, når du bruker en knusbar vattpinne, bør oppbevaringsrøret prøve å velge en beholder med en høyde på over 8 cm for å forhindre at innholdet spruter og forurenses når vattpinnen brytes.
4. Vann for produksjonskonserveringsløsning: Det ultrarene vannet som brukes til produksjonskonserveringsløsningen bør filtreres gjennom en ultrafiltreringsmembran med en molekylvekt på 13 000 for å sikre fjerning av polymerurenheter fra biologiske kilder, som RNase, DNase og endotoksin, og vanlig rensing anbefales ikke. Vann eller destillert vann.
2. Bruk av virusprøverør
Prøvetaking ved bruk av virusprøverør er hovedsakelig delt inn i orofaryngeal prøvetaking og nasofaryngeal prøvetaking:
1. Orofaryngeal prøvetaking: Trykk først tungen med tungedepressoren, forleng deretter hodet på prøvetakingspinne inn i halsen for å tørke av de bilaterale svelgmandlene og bakre svelgvegg, og tørk av den bakre svelgveggen med lett kraft, unngå å berøre tungen enhet.
2. Nasofaryngeal prøvetaking: mål avstanden fra nesetippen til øreflippen med en vattpinne og merk med en finger, før prøvetakingen inn i nesehulen i retning av den vertikale nesen (ansiktet), vattpinnen skal strekke seg ut minst halvparten av lengden av øreflippen til nesetippen, la vattpinnen ligge i nesen i 15-30 sekunder, roter forsiktig 3-5 ganger, og trekk ut vattpinnen.
Det er ikke vanskelig å se ut fra bruksmetoden, om det er en orofaryngeal vattpinne eller en nasopharyngeal vattpinne, prøvetaking er en teknisk oppgave, som er vanskelig og forurenset. Kvaliteten på den innsamlede prøven er direkte relatert til den påfølgende påvisningen. Hvis den innsamlede prøven har en viral belastning Lav, lett å forårsake falske negativer, vanskelig å bekrefte diagnosen.
Innleggstid: 21. juni 2020
