1. Sobre a fabricação de tubos de amostragem de vírus
Os tubos de amostragem de vírus pertencem a produtos de dispositivos médicos. A maioria dos fabricantes nacionais são registrados de acordo com os produtos de primeira classe e poucas empresas são registradas de acordo com os produtos de segunda classe. Recentemente, a fim de atender às necessidades emergenciais de Wuhan e de outros lugares, muitas empresas adotaram o “canal de emergência” “Solicite permissão de registro de primeira classe. O tubo de amostragem de vírus é composto por um cotonete de amostragem, solução de preservação de vírus e embalagem externa. Como não existe um padrão nacional unificado ou um padrão industrial, os produtos dos vários fabricantes variam muito.
1. Cotonete de amostragem: O cotonete de amostragem entra em contato direto com o local de amostragem e o material do cabeçote de amostragem está intimamente relacionado à detecção subsequente. A cabeça do swab de amostragem deve ser feita de fibra sintética de poliéster (PE) ou rayon (fibra sintética). Esponja de alginato de cálcio ou cotonetes de madeira (incluindo varas de bambu) não podem ser usados, e o material da cabeça do cotonete não pode ser produtos de algodão. Como a fibra de algodão tem uma forte adsorção de proteínas, não é fácil eluí-la na solução de armazenamento subsequente; e quando uma vara de madeira ou bambu contendo alginato de cálcio e componentes de madeira é quebrada, a imersão na solução de armazenamento também adsorverá a proteína e até mesmo poderá inibir a reação de PCR subsequente. Recomenda-se a utilização de fibras sintéticas como fibra PE, fibra de poliéster e fibra de polipropileno como material da cabeça do cotonete. Fibras naturais como algodão não são recomendadas. As fibras de náilon também não são recomendadas porque as fibras de náilon (semelhantes às cabeças das escovas de dente) absorvem água. Fraco, resultando em volume de amostragem insuficiente, afetando a taxa de detecção. Esponja de alginato de cálcio é proibida para amostragem de material de esfregaço! O cabo do cotonete tem dois tipos: quebrado e embutido. O cotonete quebrado é colocado no tubo de armazenamento após a amostragem, e a tampa do tubo é quebrada após ser quebrada na posição próxima à cabeça de amostragem; o cotonete embutido coloca diretamente o cotonete de amostragem no tubo de armazenamento após a amostragem, e a tampa do tubo de armazenamento é embutida. Alinhe o pequeno orifício com a parte superior da alça e aperte a tampa do tubo. Comparando os dois métodos, o último é relativamente seguro. Quando o cotonete quebrado é usado em conjunto com um tubo de armazenamento de tamanho menor, pode causar respingos de líquido no tubo quando quebrado, e deve-se prestar atenção total ao risco de contaminação causado pelo uso inadequado do produto. Recomenda-se o uso de tubo extrudado oco de poliestireno (PS) ou tubo de vinco de injeção de polipropileno (PP) para o material do cabo do swab. Independentemente do material utilizado, não podem ser adicionados aditivos de alginato de cálcio; varas de madeira ou varas de bambu. Em suma, o swab de amostragem deve garantir a quantidade de amostragem e a quantidade de liberação, e os materiais selecionados não devem conter substâncias que afetem os testes subsequentes.
2. Solução de preservação de vírus: Existem dois tipos de soluções de preservação de vírus amplamente utilizadas no mercado, uma é uma solução de manutenção de vírus modificada com base no meio de transporte e a outra é uma solução modificada para lisado de extração de ácido nucleico.
O principal componente do primeiro é o meio de cultura básico de Eagle (MEM) ou sal balanceado de Hank, ao qual são adicionados sais, aminoácidos, vitaminas, glicose e proteínas necessárias para a sobrevivência do vírus. Esta solução de armazenamento usa sal sódico vermelho de fenol como indicador e solução. Quando o valor do pH é 6,6-8,0, a solução é rosa. A glicose, L-glutamina e proteína necessárias são adicionadas à solução de preservação. A proteína é fornecida na forma de soro fetal bovino ou albumina sérica bovina, que pode estabilizar o invólucro proteico do vírus. Como a solução de preservação é rica em nutrientes, ela favorece a sobrevivência do vírus, mas também é benéfica para o crescimento de bactérias. Se a solução de preservação estiver contaminada com bactérias, ela se multiplicará em grandes quantidades. O dióxido de carbono em seus metabólitos fará com que o pH da solução de preservação caia de rosa para amarelo. Portanto, a maioria dos fabricantes adicionou ingredientes antibacterianos às suas formulações. Os agentes antibacterianos recomendados são penicilina, estreptomicina, gentamicina e polimixina B. Azida de sódio e 2-metil não são recomendados Inibidores como 4-metil-4-isotiazolin-3-ona (MCI) e 5-cloro-2-metil-4 -isotiazolin-3-ona (CMCI) porque esses componentes afetam a reação de PCR. Como a amostra fornecida por esta solução de preservação é basicamente um vírus vivo, a originalidade da amostra pode ser mantida ao máximo, podendo ser utilizada não apenas para a extração e detecção de ácidos nucleicos de vírus, mas também para o cultivo e isolamento de vírus. No entanto, deve notar-se que, quando utilizado para detecção, a extracção e purificação de ácidos nucleicos deve ser realizada após a inactivação.
Outro tipo de solução de preservação preparada com base no lisado de extração de ácido nucleico, os principais componentes são sais balanceados, agente quelante EDTA, sal de guanidina (como isotiocianato de guanidina, cloridrato de guanidina, etc.), surfactante aniônico (como dodecano sulfato de sódio), catiônico surfactantes (como oxalato de tetradeciltrimetilamônio), fenol, 8-hidroxiquinolina, ditiotreitol (DTT), proteinase K e outros componentes. Esta solução de armazenamento serve para clivar diretamente o vírus para liberar o ácido nucleico e eliminar a RNase. Se for utilizado apenas para RT-PCR, é mais adequado, mas o lisado pode inativar o vírus. Este tipo de amostra não pode ser utilizado para separação de culturas de vírus.
O agente quelante de íons metálicos usado na solução de preservação de vírus é recomendado para usar sais de EDTA (como ácido etilenodiaminotetracético dipotássico, ácido etilenodiaminotetracético dissódico, etc.), e não é recomendado o uso de heparina (como heparina sódica, heparina de lítio), de modo a não afetar a detecção de PCR.
3. Tubo de preservação: O material do tubo de preservação deve ser selecionado com cuidado. Existem dados que sugerem que o polipropileno (polipropileno) está relacionado à adsorção de ácido nucléico, especialmente em concentrações de íons de alta tensão, o polietileno (polietileno) é mais preferido do que o polipropileno (polipropileno) DNA/RNA fácil de entender. O plástico de polímero de polietileno-propileno (polialômero) e alguns recipientes de plástico de polipropileno (polipropileno) especialmente processados são mais adequados para armazenamento de DNA/RNA. Além disso, ao usar um cotonete quebrável, o tubo de armazenamento deve tentar selecionar um recipiente com altura superior a 8 cm para evitar que o conteúdo seja respingado e contaminado quando o cotonete for quebrado.
4. Água para solução de preservação de produção: A água ultrapura usada para solução de preservação de produção deve ser filtrada através de uma membrana de ultrafiltração com peso molecular de 13.000 para garantir a remoção de impurezas poliméricas de fontes biológicas, como RNase, DNase e endotoxina, e a purificação comum não é recomendada. Água ou água destilada.
2. Uso de tubos de amostragem de vírus
A amostragem usando o tubo de amostragem de vírus é dividida principalmente em amostragem orofaríngea e amostragem nasofaríngea:
1. Amostragem orofaríngea: primeiro pressione a língua com o abaixador de língua, depois estenda a cabeça do cotonete de amostragem na garganta para limpar as tonsilas faríngeas bilaterais e a parede posterior da faringe, e limpe a parede posterior da faringe com força leve, evite tocar a língua unidade.
2. Amostragem nasofaríngea: meça a distância da ponta do nariz ao lóbulo da orelha com um cotonete e marque com um dedo, insira o cotonete de amostragem na cavidade nasal na direção do nariz vertical (face), o cotonete deve se estender pelo menos metade do comprimento do lóbulo da orelha até a ponta do nariz. Deixe o cotonete no nariz por 15 a 30 segundos, gire suavemente 3 a 5 vezes e retire o cotonete.
Não é difícil perceber pelo método de utilização, seja um swab orofaríngeo ou um swab nasofaríngeo, a amostragem é uma tarefa técnica, difícil e contaminada. A qualidade da amostra coletada está diretamente relacionada à detecção posterior. Se a amostra coletada tiver carga viral baixa, fácil de causar falsos negativos, difícil de confirmar o diagnóstico.
Horário da postagem: 21 de junho de 2020
