1. despre fabricarea tuburilor de eșantionare a virusului
Tuburile de eșantionare a virusului aparțin produselor de dispozitiv medical. Majoritatea producătorilor autohtoni sunt înregistrați în funcție de produsele de primă clasă, iar puține companii sunt înregistrate în funcție de produsele din clasa a doua. Recent, pentru a satisface nevoile de urgență ale Wuhan și ale altor locuri, multe companii au luat „canalul de urgență” „aplicația pentru permisiunea de înregistrare de primă clasă.
1. Swab de eșantionare: tamponul de eșantionare contactează direct locul de eșantionare, iar materialul capului de eșantionare este strâns legat de detectarea ulterioară. Capul de tampon de eșantionare trebuie să fie realizat din fibre sintetice din poliester (PE) sau raion (fibră creată de om). Nu pot fi utilizate burete de alginat de calciu sau tampoane cu baston de lemn (inclusiv bastoane de bambus), iar materialul capului de tampon nu poate fi produse din bumbac. Deoarece fibra de bumbac are o adsorbție puternică a proteinei, nu este ușor de eluat în soluția ulterioară de depozitare; Și atunci când un băț de lemn sau un băț de bambus care conține alginat de calciu și componente din lemn este ruptă, înmuierea în soluția de depozitare va adsorb proteine și chiar va putea inhiba reacția PCR ulterioară. Se recomandă utilizarea fibrelor sintetice, cum ar fi fibra PE, fibra de poliester și fibra de polipropilenă pentru materialul capului de tampon. Fibrele naturale, cum ar fi bumbacul, nu sunt recomandate. De asemenea, fibrele din nylon nu sunt recomandate, deoarece fibrele de nylon (similare cu capetele de dinți) absoarbe apa. Slab, rezultând un volum de eșantionare insuficient, care afectează rata de detectare. Buretele de alginat de calciu este interzis pentru eșantionarea materialului de tampon! Mânerul tamponului are două tipuri: rupt și încorporat. Tamponul rupt este plasat în tubul de depozitare după prelevare, iar capacul tubului este rupt după ce a fost rupt din poziția din apropierea capului de eșantionare; Tamponul încorporat pune direct tamponul de eșantionare în tubul de depozitare după eșantionare, iar capacul tubului de depozitare este încorporat în aliniați gaura mică cu partea superioară a mânerului și strângeți capacul tubului. Comparând cele două metode, acestea din urmă este relativ sigură. Atunci când tamponul spart este utilizat împreună cu un tub de depozitare cu dimensiuni mai mici, acesta poate provoca stropirea lichidului în tub atunci când este ruptă, iar atenția completă trebuie acordată riscului de contaminare cauzată de utilizarea necorespunzătoare a produsului. Se recomandă utilizarea tubului extrudat de polistiren gol (PS) sau polipropilenă (PP) tubul de creștere pentru materialul mânerului tamponului. Indiferent de materialul utilizat, nu pot fi adăugate aditivi de alginat de calciu; bastoane de lemn sau bastoane de bambus. Pe scurt, tamponul de eșantionare ar trebui să asigure cantitatea de eșantionare și cantitatea de eliberare, iar materialele selectate nu trebuie să aibă substanțe care afectează testarea ulterioară.
2. Soluție de conservare a virusului: Există două tipuri de soluții de conservare a virusului utilizate pe scară largă pe piață, una este o soluție de întreținere a virusului modificată pe baza mediului de transport, iar cealaltă este o soluție modificată pentru lizatul de extracție a acidului nucleic.
Componenta principală a primului este mediul de cultură de bază al Eagle (MEM) sau sarea echilibrată a lui Hank, care este adăugată cu sărurile, aminoacizii, vitaminele, glucoza și proteina necesară pentru supraviețuirea virusului. Această soluție de depozitare folosește sare de sodiu fenol roșu ca indicator și soluție. Când valoarea pH-ului este de 6,6-8,0, soluția este roz. La soluția de conservare se adaugă glucoza, l-glutamina și proteina necesară. Proteina este furnizată sub formă de ser bovin fetal sau albumină serică bovină, care poate stabiliza coaja proteică a virusului. Deoarece soluția de conservare este bogată în nutrienți, este favorabilă supraviețuirii virusului, dar și benefică pentru creșterea bacteriilor. Dacă soluția de conservare este contaminată cu bacterii, aceasta se va înmulți în cantități mari. Dioxidul de carbon din metaboliții săi va face ca pH -ul soluției de conservare să cadă din roz devine galben. Prin urmare, majoritatea producătorilor au adăugat ingrediente antibacteriene la formulările lor. Agenții antibacterieni recomandați sunt penicilina, streptomicina, gentamicina și polimixina B. Azida de sodiu și 2-metilul nu sunt inhibitori recomandați, cum ar fi 4-metil-4-izotiazolin-3-one (MCI) și 5-clor-2-metil-4-izotiazolin-3-one (CMCI), deoarece acești componenți au un efect pe psc. Deoarece eșantionul furnizat de această soluție de conservare este practic un virus viu, originalitatea eșantionului poate fi păstrată în cea mai mare măsură și poate fi utilizat nu numai pentru extracția și detectarea acizilor nucleici ai virusului, ci și pentru cultivarea și izolarea virușilor. Cu toate acestea, trebuie menționat că atunci când este utilizat pentru detectare, extracția și purificarea acidului nucleic trebuie efectuate după inactivare.
Another kind of preservation solution prepared based on nucleic acid extraction lysate, the main components are balanced salts, EDTA chelating agent, guanidine salt (such as guanidine isothiocyanate, guanidine hydrochloride, etc.), anionic surfactant (such as dodecane Sodium sulfate), cationic surfactants (such as tetradecyltrimethylammonium oxalate), fenol, 8-hidroxiquinolină, ditiotreitol (DTT), proteinaze K și alte componente, această soluție de stocare este de a cliva direct virusul pentru a elibera acidul nucleic și a elimina ARNase. Dacă este utilizat doar pentru RT-PCR, este mai potrivit, dar lizatul poate inactiva virusul. Acest tip de eșantion nu poate fi utilizat pentru separarea culturii virusului.
Agentul de chelare a ionilor metalici utilizați în soluția de conservare a virusului este recomandat să utilizeze săruri EDTA (cum ar fi acidul etilendiaminetetraacetic de dipotasiu, acid disodium etilenediaminetetraacetic etc.) și nu este recomandat să se utilizeze heparină (cum ar fi heparină de sodiu, heparină de litiu), astfel încât să nu afecteze detectarea PCR.
3. Tub de conservare: Materialul tubului de conservare trebuie selectat cu atenție. Există date care sugerează că polipropilena (polipropilen) este legată de adsorbția acidului nucleic, în special la concentrația de ioni de tensiune ridicată, polietilenul (polietilen) este mai preferat decât polipropilen (polipropilen) ușor de strâns ADN -ul/ARN -ul. Polymer polimei de polietilen-propilen (Polylomer) și unele containere de plastic din polipropilenă (polipropilenă) special prelucrate sunt mai potrivite pentru depozitarea ADN-ului/ARN. În plus, atunci când se utilizează un tampon care poate fi rupt, tubul de depozitare ar trebui să încerce să selecteze un recipient cu o înălțime mai mare de 8 cm pentru a preveni stropirea și contaminarea conținutului atunci când tamponul este rupt.
4. Apa pentru Soluția de conservare a producției: Apa ultrapură folosită pentru soluția de conservare a producției trebuie filtrată printr -o membrană de ultrafiltrare cu o greutate moleculară de 13.000 pentru a asigura eliminarea impurităților polimerice din surse biologice, cum ar fi RNază, DNază și endotoxină, iar purificarea obișnuită nu este recomandată. Apă sau apă distilată.
2. Utilizarea tuburilor de eșantionare a virusului
Eșantionarea folosind tubul de eșantionare a virusului este împărțită în principal în eșantionare orofaringiană și eșantionare nazofaringiană:
1. Eșantionarea orofaringiană: mai întâi apăsați limba cu depresorul limbii, apoi extindeți capul tamponului de eșantionare în gât pentru a șterge amigdalele faringiene bilaterale și peretele faringian posterior și ștergeți peretele faringian posterior, evitați să atingeți unitatea limbii.
2. Eșantionarea nazofaringiană: Măsurați distanța de la vârful nasului la lobul urechii cu un tampon și marcaj cu un deget, introduceți tamponul de eșantionare în cavitatea nazală în direcția nasului vertical (față), tamponul ar trebui să extindă cel puțin jumătate din lungimea lobei urechii la vârful nasului, lăsând swab în nasul timp de 15-30 de secunde, în vârful rotatului 3-5 ori, și să se retragă în nas.
Nu este dificil de observat din metoda de utilizare, indiferent dacă este un tampon orofaringian sau un tampon nazofaringian, eșantionarea este o sarcină tehnică, care este dificilă și contaminată. Calitatea eșantionului colectat este direct legată de detectarea ulterioară. Dacă eșantionul colectat are o sarcină virală scăzută, ușor de provocat false negative, dificil de confirmat diagnosticul.
Timpul post: 21-2020 iunie
