1. Despre fabricarea tuburilor de prelevare a virusurilor
Tuburile de prelevare a virusurilor aparțin categoriei de produse medicale. Majoritatea producătorilor autohtoni sunt înregistrați pentru produsele de primă clasă, iar puține companii sunt înregistrate pentru produsele de clasa a doua. Recent, pentru a satisface nevoile de urgență ale orașului Wuhan și ale altor locuri, multe companii au adoptat „canalul de urgență”: „Solicitați permisiunea de înregistrare de primă clasă”. Tubul de prelevare a virusurilor este compus dintr-un tampon de prelevare, o soluție de conservare a virusurilor și un ambalaj exterior. Deoarece nu există un standard național unificat sau un standard industrial, produsele diferiților producători variază foarte mult.
1. Bețișorul de prelevare: Bețișorul de prelevare intră în contact direct cu locul de prelevare, iar materialul capului de prelevare este strâns legat de detectarea ulterioară. Capul bețișorului de prelevare trebuie să fie fabricat din fibră sintetică de poliester (PE) sau raion (fibră artificială). Nu se pot utiliza burete de alginat de calciu sau bețișoare de lemn (inclusiv bețișoare de bambus), iar materialul capului bețișorului nu poate fi din bumbac. Deoarece fibra de bumbac are o adsorbție puternică a proteinelor, nu este ușor să elueze în soluția de depozitare ulterioară; iar atunci când un bețișor de lemn sau de bambus care conține alginat de calciu și componente din lemn este rupt, înmuierea în soluția de depozitare va adsorbi și proteinele și chiar poate inhiba reacția PCR ulterioară. Se recomandă utilizarea fibrelor sintetice, cum ar fi fibra PE, fibra de poliester și fibra de polipropilenă, pentru materialul capului bețișorului. Fibrele naturale, cum ar fi bumbacul, nu sunt recomandate. De asemenea, fibrele de nailon nu sunt recomandate deoarece fibrele de nailon (similare cu capetele periuțelor de dinți) absorb apa. Un material slab, rezultând un volum de prelevare insuficient, afectând rata de detectare. Buretele de alginat de calciu este interzis pentru materialul bețișorului de prelevare! Mânerul bețișorului are două tipuri: rupt și încorporat. Bețișorul rupt se introduce în tubul de depozitare după prelevare, iar capacul tubului se rupe după ce se rupe din poziția de lângă capul de prelevare; bețișorul încorporat introduce direct bețișorul de prelevare în tubul de depozitare după prelevare, iar capacul tubului de depozitare este încorporat. Aliniați orificiul mic cu partea superioară a mânerului și strângeți capacul tubului. Comparând cele două metode, cea din urmă este relativ sigură. Atunci când bețișorul rupt este utilizat împreună cu un tub de depozitare de dimensiuni mai mici, acesta poate provoca stropirea cu lichid în tub atunci când se rupe și trebuie acordată o atenție sporită riscului de contaminare cauzat de utilizarea necorespunzătoare a produsului. Se recomandă utilizarea unui tub extrudat gol din polistiren (PS) sau a unui tub de injectare cu pliuri din polipropilenă (PP) pentru materialul mânerului bețișorului. Indiferent de materialul utilizat, nu se pot adăuga aditivi de alginat de calciu; bețișoare de lemn sau bețișoare de bambus. Pe scurt, bețișorul de prelevare trebuie să asigure cantitatea de prelevare și cantitatea de eliberare, iar materialele selectate nu trebuie să conțină substanțe care să afecteze testele ulterioare.
2. Soluție de conservare a virusurilor: Există două tipuri de soluții de conservare a virusurilor utilizate pe scară largă pe piață, una este o soluție de întreținere a virusurilor modificată în funcție de mediul de transport, iar cealaltă este o soluție modificată pentru lizat de extracție a acidului nucleic.
Componenta principală a primei soluții este mediul de cultură bazic Eagle (MEM) sau sarea echilibrată Hank, la care se adaugă sărurile, aminoacizii, vitaminele, glucoza și proteinele necesare pentru supraviețuirea virusului. Această soluție de depozitare utilizează sarea de sodiu roșu fenol ca indicator și soluție. Când valoarea pH-ului este 6,6-8,0, soluția este roz. Glucoza, L-glutamina și proteinele necesare sunt adăugate în soluția de conservare. Proteina este furnizată sub formă de ser fetal bovin sau albumină serică bovină, care poate stabiliza învelișul proteic al virusului. Deoarece soluția de conservare este bogată în nutrienți, este favorabilă supraviețuirii virusului, dar este benefică și pentru creșterea bacteriilor. Dacă soluția de conservare este contaminată cu bacterii, aceasta se va multiplica în cantități mari. Dioxidul de carbon din metaboliții săi va determina scăderea pH-ului soluției de conservare de la roz la galben. Prin urmare, majoritatea producătorilor au adăugat ingrediente antibacteriene în formulele lor. Agenții antibacterieni recomandați sunt penicilina, streptomicina, gentamicina și polimixina B. Nu se recomandă azida de sodiu și 2-metil-1-ona. Inhibitori precum 4-metil-4-izotiazolin-3-ona (MCI) și 5-cloro-2-metil-4-izotiazolin-3-ona (CMCI) deoarece aceste componente au un efect asupra reacției PCR. Deoarece proba furnizată de această soluție de conservare este practic un virus viu, originalitatea probei poate fi păstrată în cea mai mare măsură și poate fi utilizată nu numai pentru extracția și detectarea acizilor nucleici virali, ci și pentru cultivarea și izolarea virusurilor. Cu toate acestea, trebuie menționat că, atunci când este utilizată pentru detectare, extracția și purificarea acidului nucleic trebuie efectuate după inactivare.
Un alt tip de soluție de conservare preparată pe baza lizatului de extracție a acidului nucleic este a cărui componentă principală este sărurile echilibrate, agentul de chelare EDTA, sarea de guanidină (cum ar fi izotiocianat de guanidină, clorhidrat de guanidină etc.), surfactant anionic (cum ar fi dodecan sulfat de sodiu), surfactanți cationici (cum ar fi oxalatul de tetradeciltrimetilamoniu), fenol, 8-hidroxichinolină, ditiotreitol (DTT), proteinaza K și alte componente. Această soluție de conservare are rolul de a scinda direct virusul pentru a elibera acidul nucleic și a elimina RNaza. Dacă este utilizată doar pentru RT-PCR, este mai potrivită, dar lizatul poate inactiva virusul. Acest tip de probă nu poate fi utilizat pentru separarea culturilor virale.
Agentul de chelare a ionilor metalici utilizat în soluția de conservare a virusului este recomandat să utilizeze săruri EDTA (cum ar fi acidul etilendiaminotetraacetic dipotasic, acidul etilendiaminotetraacetic disodic etc.) și nu se recomandă utilizarea heparinei (cum ar fi heparina sodică, heparina de litiu), pentru a nu afecta detectarea PCR.
3. Tub de conservare: Materialul tubului de conservare trebuie ales cu atenție. Există date care sugerează că polipropilena (polipropilena) este legată de adsorbția acidului nucleic, în special la concentrații mari de ioni de tensiune. Polietilena (polietilena) este mai preferată decât polipropilena (polipropilena). ADN/ARN ușor de apucat. Plasticul polimeric de polietilenă-propilenă (polialomer) și unele recipiente din plastic de polipropilenă (polipropilenă) special procesate sunt mai potrivite pentru depozitarea ADN/ARN. În plus, atunci când se utilizează un bețișor fragil, tubul de depozitare trebuie selectat cu o înălțime mai mare de 8 cm pentru a preveni stropirea și contaminarea conținutului atunci când bețișorul se rupe.
4. Apă pentru soluția de conservare a producției: Apa ultrapură utilizată pentru soluția de conservare a producției trebuie filtrată printr-o membrană de ultrafiltrare cu o greutate moleculară de 13.000 pentru a asigura îndepărtarea impurităților polimerice din surse biologice, cum ar fi RNaza, DNaza și endotoxina, și nu se recomandă purificarea obișnuită. Apă sau apă distilată.
2. Utilizarea tuburilor de prelevare a virusului
Prelevarea de probe folosind tubul de prelevare a virusului este împărțită în principal în prelevare orofaringiană și prelevare nazofaringiană:
1. Prelevare orofaringiană: Apăsați mai întâi limba cu depresorul lingual, apoi introduceți capul bețișorului de prelevare în gât pentru a șterge amigdalele faringiene bilaterale și peretele faringian posterior și ștergeți peretele faringian posterior cu o forță ușoară, evitând atingerea unității linguale.
2. Prelevare nazofaringiană: măsurați distanța de la vârful nasului până la lobul urechii cu un tampon și marcați cu degetul, introduceți tamponul de prelevare în cavitatea nazală în direcția nasului vertical (feței), tamponul trebuie să se extindă cel puțin pe jumătate din lungimea lobului urechii până la vârful nasului. Lăsați tamponul în nas timp de 15-30 de secunde, rotiți ușor de 3-5 ori și scoateți tamponul.
Nu este dificil de observat din metoda de utilizare, fie că este vorba de un tampon orofaringian sau nazofaringian, prelevarea de probe este o sarcină tehnică, dificilă și contaminată. Calitatea probei colectate este direct legată de detectarea ulterioară. Dacă proba colectată are o încărcătură virală scăzută, este ușor să provoace rezultate fals negative, iar diagnosticul este dificil de confirmat.
Data publicării: 21 iunie 2020
