1. Despre fabricarea tuburilor de prelevare a virusului
Tuburile de prelevare a virusului aparțin produselor pentru dispozitive medicale. Majoritatea producatorilor autohtoni sunt inregistrati in functie de produsele de clasa intai, iar putine companii sunt inregistrate in functie de produsele de clasa a doua. Recent, pentru a răspunde nevoilor de urgență din Wuhan și din alte locuri, multe companii au luat „canalul de urgență” „Solicitați permisiunea de înregistrare de primă clasă. Tubul de prelevare a virusului este compus dintr-un tampon de prelevare, soluție de conservare a virusului și ambalaj exterior. Deoarece nu există un standard național unificat sau un standard industrial, produsele diferiților producători variază foarte mult.
1. Tampon de prelevare: tamponul de prelevare contactează direct locul de prelevare, iar materialul capului de prelevare este strâns legat de detectarea ulterioară. Capul tamponului de prelevare trebuie să fie realizat din fibră sintetică de poliester (PE) sau raion (fibră artificială). Buretele de alginat de calciu sau tampoanele de lemn (inclusiv bețișoare de bambus) nu pot fi folosite, iar materialul capului de tampon nu poate fi produse din bumbac. Deoarece fibra de bumbac are o adsorbție puternică de proteine, nu este ușor să se elueze în soluția de depozitare ulterioară; iar când un bețișor de lemn sau un băț de bambus care conține alginat de calciu și componente din lemn este spart, înmuierea în soluția de depozitare va absorbi și proteinele și chiar va inhiba reacția PCR ulterioară. Se recomandă utilizarea fibrelor sintetice precum fibra PE, fibra de poliester și fibra de polipropilenă pentru materialul capului tamponului. Fibrele naturale precum bumbacul nu sunt recomandate. Fibrele de nailon nu sunt, de asemenea, recomandate deoarece fibrele de nailon (asemănătoare capetelor de periuță de dinți) absorb apa. Slab, rezultând în volum insuficient de eșantionare, afectând rata de detectare. Buretele de alginat de calciu este interzis pentru prelevarea de probe de material tampon! Mânerul cu tampon are două tipuri: rupt și încorporat. Tamponul spart este plasat în tubul de depozitare după prelevare, iar capacul tubului este rupt după ce a fost rupt din poziția din apropierea capului de prelevare; tamponul încorporat pune direct tamponul de prelevare în tubul de stocare după prelevare, iar capacul tubului de stocare este încorporat. Aliniați orificiul mic cu partea superioară a mânerului și strângeți capacul tubului. Comparând cele două metode, aceasta din urmă este relativ sigură. Când tamponul spart este utilizat împreună cu un tub de depozitare de dimensiuni mai mici, acesta poate provoca stropire de lichid în tub atunci când este spart și trebuie acordată o atenție deosebită riscului de contaminare cauzat de utilizarea necorespunzătoare a produsului. Pentru materialul mânerului tamponului, se recomandă folosirea tubului tubular extrudat din polistiren (PS) sau tubul de sifonare cu injecție din polipropilenă (PP). Indiferent de materialul folosit, aditivii de alginat de calciu nu pot fi adăugați; bețe de lemn sau bețe de bambus. Pe scurt, tamponul de prelevare ar trebui să asigure cantitatea de eșantionare și cantitatea de eliberare, iar materialele selectate nu trebuie să aibă substanțe care afectează testarea ulterioară.
2. Soluție de conservare a virusului: Există două tipuri de soluții de conservare a virusului utilizate pe scară largă pe piață, una este o soluție de întreținere a virusului modificată pe baza mediului de transport, iar cealaltă este o soluție modificată pentru lizat de extracție a acidului nucleic.
Componenta principală a primei este mediul de cultură de bază Eagle (MEM) sau sarea echilibrată a lui Hank, care este adăugată cu sărurile, aminoacizii, vitaminele, glucoza și proteinele necesare supraviețuirii virusului. Această soluție de depozitare folosește sare de sodiu roșu fenol ca indicator și soluție. Când valoarea pH-ului este 6,6-8,0, soluția este roz. La soluția de conservare se adaugă glucoza, L-glutamina și proteinele necesare. Proteina este furnizată sub formă de ser fetal bovin sau albumină de ser bovin, care poate stabiliza învelișul proteic al virusului. Deoarece soluția de conservare este bogată în nutrienți, este favorabilă supraviețuirii virusului, dar și benefică creșterii bacteriilor. Dacă soluția de conservare este contaminată cu bacterii, se va înmulți în cantități mari. Dioxidul de carbon din metaboliții săi va face ca pH-ul soluției de conservare să scadă din roz Devine galben. Prin urmare, majoritatea producătorilor au adăugat ingrediente antibacteriene la formulările lor. Agenții antibacterieni recomandați sunt penicilina, streptomicina, gentamicina și polimixina B. Azida de sodiu și 2-metil nu sunt recomandate Inhibitori precum 4-metil-4-izotiazolin-3-ona (MCI) și 5-clor-2-metil-4 -izotiazolin-3-onă (CMCI) deoarece aceste componente au efect asupra reacției PCR. Deoarece proba furnizată de această soluție de conservare este practic un virus viu, originalitatea probei poate fi păstrată în cea mai mare măsură și poate fi folosită nu numai pentru extracția și detectarea acizilor nucleici virali, ci și pentru cultivarea și cultivarea. izolarea virusurilor. Cu toate acestea, trebuie remarcat că atunci când este utilizat pentru detectare, extracția și purificarea acidului nucleic trebuie efectuate după inactivare.
Un alt tip de soluție de conservare preparată pe bază de lizat de extracție a acidului nucleic, componentele principale sunt săruri echilibrate, agent de chelare EDTA, sare de guanidină (cum ar fi izotiocianat de guanidină, clorhidrat de guanidină etc.), surfactant anionic (cum ar fi sulfat de sodiu dodecan), cationic surfactanți (cum ar fi oxalat de tetradeciltrimetilamoniu), fenol, 8-hidroxichinolină, ditiotreitol (DTT), proteinaza K și alte componente. Această soluție de depozitare este de a scinda direct virusul pentru a elibera acidul nucleic și a elimina RNaza. Dacă este folosit doar pentru RT-PCR, este mai potrivit, dar lizatul poate inactiva virusul. Acest tip de eșantion nu poate fi utilizat pentru separarea culturii de virus.
Agentul de chelare cu ioni metalici utilizat în soluția de conservare a virusului este recomandat să utilizeze săruri EDTA (cum ar fi acidul etilendiaminotetraacetic dipotasic, acidul etilendiaminotetraacetic disodic etc.) și nu se recomandă utilizarea heparinei (cum ar fi heparina de sodiu, heparina de litiu), pentru a nu afecta detectarea PCR.
3. Tub de conservare: Materialul tubului de conservare trebuie selectat cu atenție. Există date care sugerează că polipropilena (polipropilena) este legată de adsorbția acidului nucleic, în special la concentrație de ioni de înaltă tensiune, polietilena (polietilena) este mai preferată decât polipropilena (polipropilenă) ADN/ARN ușor de înțeles. Plasticul din polietilenă-propilenă polimer (polialomer) și unele recipiente din plastic din polipropilenă (polipropilenă) prelucrate special sunt mai potrivite pentru depozitarea ADN/ARN. În plus, atunci când utilizați un tampon care se poate sparge, tubul de depozitare ar trebui să încerce să aleagă un recipient cu o înălțime mai mare de 8 cm pentru a preveni stropirea și contaminarea conținutului atunci când tamponul este spart.
4. Apa pentru soluția de conservare a producției: Apa ultrapură utilizată pentru soluția de conservare a producției trebuie filtrată printr-o membrană de ultrafiltrare cu o greutate moleculară de 13.000 pentru a asigura îndepărtarea impurităților polimerice din sursele biologice, cum ar fi RNază, DNază și endotoxina și purificarea obișnuită nu este recomandată. Apă sau apă distilată.
2. Utilizarea tuburilor de prelevare a virusului
Prelevarea de probe cu ajutorul tubului de prelevare a virusului este împărțită în principal în prelevare orofaringiană și prelevare nazofaringiană:
1. Prelevarea orofaringiană: Apăsați mai întâi limba cu depresorul de limbă, apoi extindeți capul tamponului de prelevare în gât pentru a șterge amigdalele faringiene bilaterale și peretele faringian posterior și ștergeți peretele posterior faringian cu forță ușoară, evitați atingerea limbii unitate.
2. Prelevarea de probe nazofaringiene: măsurați distanța de la vârful nasului până la lobul urechii cu un tampon și marcați cu un deget, introduceți tamponul de prelevare în cavitatea nazală în direcția nasului vertical (față), tamponul trebuie să se extindă cel puțin jumătate din lungimea lobului urechii până la vârful nasului, lăsați tamponul în nas timp de 15-30 de secunde, rotiți ușor de 3-5 ori și retrageți tamponul.
Nu este greu de văzut din metoda de utilizare, indiferent dacă este vorba de un tampon orofaringian sau un tampon nazofaringian, prelevarea de probe este o sarcină tehnică, care este dificilă și contaminată. Calitatea probei colectate este direct legată de detectarea ulterioară. Dacă proba colectată are o încărcătură virală scăzută, ușor de provocat fals negative, dificil de confirmat diagnosticul.
Ora postării: 21-jun-2020
