1. О производстве пробирок для взятия вирусов
Пробирки для отбора проб вируса относятся к изделиям медицинского назначения. Большинство отечественных производителей зарегистрированы по продукции первого сорта, и лишь немногие компании зарегистрированы по продукции второго сорта. В последнее время, чтобы удовлетворить чрезвычайные потребности Ухани и других мест, многие компании воспользовались «аварийным каналом»: «Подайте заявку на получение первоклассного разрешения на запись». Пробирка для взятия проб вируса состоит из тампона для взятия проб, раствора для консервации вируса и внешней упаковки. Поскольку единого национального стандарта или отраслевого стандарта не существует, продукция различных производителей сильно различается.
1. Тампон для отбора проб: тампон для отбора проб непосредственно контактирует с местом отбора проб, а материал головки для отбора проб тесно связан с последующим обнаружением. Головка тампона для отбора проб должна быть изготовлена из синтетического волокна полиэстера (ПЭ) или вискозы (искусственного волокна). Губку с альгинатом кальция или деревянные тампоны (в том числе бамбуковые) использовать нельзя, а материал головки тампона не может быть хлопчатобумажным изделием. Поскольку хлопковое волокно обладает сильной адсорбцией белка, его нелегко элюировать в последующий раствор для хранения; а когда деревянная палочка или бамбуковая палочка, содержащая альгинат кальция и деревянные компоненты, сломана, замачивание в растворе для хранения также будет адсорбировать белок и даже может ингибировать последующую реакцию ПЦР. В качестве материала головки тампона рекомендуется использовать синтетические волокна, такие как полиэтиленовое волокно, полиэфирное волокно и полипропиленовое волокно. Натуральные волокна, такие как хлопок, использовать не рекомендуется. Нейлоновые волокна также не рекомендуются, поскольку нейлоновые волокна (похожие на насадки зубных щеток) впитывают воду. Плохое, что приводит к недостаточному объему выборки, что влияет на уровень обнаружения. Кальциево-альгинатную губку запрещено использовать для отбора проб материала тампонов! Ручка тампона бывает двух видов: сломанная и встроенная. Сломанный тампон помещается в пробирку для хранения после отбора проб, а крышка пробирки ломается после того, как ее сломают в положении рядом с головкой для отбора проб; Встроенный тампон помещает тампон для отбора проб непосредственно в пробирку для хранения после отбора проб, а крышка пробирки для хранения встроена. Совместите небольшое отверстие с верхней частью ручки и затяните крышку пробирки. Сравнивая два метода, последний относительно безопасен. Когда сломанный тампон используется вместе с пробиркой для хранения меньшего размера, это может привести к разбрызгиванию жидкости в пробирке, поэтому следует обратить все внимание на риск загрязнения, вызванного неправильным использованием продукта. В качестве материала рукоятки тампона рекомендуется использовать полую экструдированную трубку из полистирола (PS) или трубку для инъекционной биговки из полипропилена (PP). Независимо от того, какой материал используется, добавки альгината кальция добавлять нельзя; деревянные палочки или бамбуковые палочки. Короче говоря, тампон для отбора проб должен обеспечивать объем отбора проб и объем выпуска, а выбранные материалы не должны содержать веществ, влияющих на последующее тестирование.
2. Раствор для консервации вирусов. На рынке широко используются два вида растворов для консервации вирусов: один представляет собой раствор для поддержания вирусов, модифицированный на основе транспортной среды, а другой представляет собой модифицированный раствор для лизата экстракции нуклеиновых кислот.
Основным компонентом первых является основная культуральная среда Игла (MEM) или сбалансированная соль Хэнка, в которую добавлены соли, аминокислоты, витамины, глюкоза и белок, необходимые для выживания вируса. В этом растворе для хранения в качестве индикатора и раствора используется натриевая соль фенолового красного. При значении pH 6,6-8,0 раствор имеет розовый цвет. В консервирующий раствор добавляют необходимую глюкозу, L-глютамин и белок. Белок предоставляется в форме фетальной бычьей сыворотки или бычьего сывороточного альбумина, который может стабилизировать белковую оболочку вируса. Поскольку раствор для консервации богат питательными веществами, он способствует выживанию вируса, а также способствует росту бактерий. Если консервационный раствор загрязнен бактериями, они будут размножаться в больших количествах. Диоксид углерода в его метаболитах приведет к падению pH консервационного раствора с розового на желтый. Поэтому большинство производителей добавляют в свои составы антибактериальные ингредиенты. Рекомендуемые антибактериальные средства: пенициллин, стрептомицин, гентамицин и полимиксин B. Азид натрия и 2-метил не рекомендуются. Ингибиторы, такие как 4-метил-4-изотиазолин-3-он (MCI) и 5-хлор-2-метил-4. -изотиазолин-3-он (CMCI), поскольку эти компоненты влияют на реакцию ПЦР. Поскольку образец, полученный с помощью этого консервационного раствора, по сути представляет собой живой вирус, оригинальность образца может быть сохранена в максимальной степени, и его можно использовать не только для экстракции и обнаружения нуклеиновых кислот вируса, но также для культивирования и выделение вирусов. Однако следует отметить, что при использовании для обнаружения экстракцию и очистку нуклеиновой кислоты необходимо проводить после инактивации.
Другой вид консервационного раствора, приготовленный на основе лизата экстракции нуклеиновых кислот, основными компонентами которого являются сбалансированные соли, хелатирующий агент ЭДТА, соль гуанидина (например, изотиоцианат гуанидина, гидрохлорид гуанидина и т. д.), анионное поверхностно-активное вещество (например, додекан сульфат натрия), катионный поверхностно-активные вещества (такие как оксалат тетрадецилтриметиламмония), фенол, 8-гидроксихинолин, дитиотреитол (DTT), протеиназа K и другие компоненты. Этот раствор для хранения предназначен для непосредственного расщепления вируса с высвобождением нуклеиновой кислоты и удалением РНКазы. Если его использовать только для RT-PCR, он более пригоден, но лизат может инактивировать вирус. Этот тип образца нельзя использовать для разделения вирусных культур.
В качестве хелатирующего иона металла агента, используемого в растворе для консервации вируса, рекомендуется использовать соли ЭДТА (такие как дикалиевая этилендиаминтетрауксусная кислота, динатриевая этилендиаминтетрауксусная кислота и т. д.), и не рекомендуется использовать гепарин (например, гепарин натрия, гепарин лития), чтобы не влиять на обнаружение ПЦР.
3. Консервационная трубка. Материал консервационной трубки следует выбирать тщательно. Есть данные, свидетельствующие о том, что полипропилен (полипропилен) связан с адсорбцией нуклеиновой кислоты, особенно при концентрации ионов с высоким напряжением, полиэтилен (полиэтилен) более предпочтителен, чем полипропилен (полипропилен). Легко усваивается ДНК/РНК. Полиэтилен-пропиленовый полимер (полиалломер) и некоторые специально обработанные полипропиленовые (полипропиленовые) пластиковые контейнеры больше подходят для хранения ДНК/РНК. Кроме того, при использовании ломающегося тампона пробирку для хранения следует выбирать из контейнера высотой более 8 см, чтобы предотвратить разбрызгивание и загрязнение содержимого при поломке тампона.
4. Вода для производственного консервационного раствора: сверхчистая вода, используемая для производственного консервационного раствора, должна быть профильтрована через ультрафильтрационную мембрану с молекулярной массой 13 000, чтобы обеспечить удаление полимерных примесей из биологических источников, таких как РНКаза, ДНКаза и эндотоксин, и обычная очистка не рекомендуется. Вода или дистиллированная вода.
2. Использование пробирок для взятия вирусов.
Отбор проб с использованием пробирки для отбора проб вируса в основном делится на отбор проб из ротоглотки и отбор проб из носоглотки:
1. Отбор проб из ротоглотки: сначала нажмите на язык депрессором языка, затем продвиньте головку тампона для взятия проб в горло, чтобы протереть двусторонние глоточные миндалины и заднюю стенку глотки, и протрите заднюю стенку глотки с легкой силой, избегая прикосновения к языку. единица.
2. Отбор проб из носоглотки: измерить тампоном расстояние от кончика носа до мочки уха и отметить пальцем, ввести тампон с забором в полость носа в направлении вертикального носа (лица), тампон должен выдвигаться. не менее половины длины мочки уха до кончика носа. Оставьте тампон в носу на 15–30 секунд, осторожно поверните 3–5 раз и вытащите тампон.
По способу использования нетрудно увидеть, идет ли речь о мазке из ротоглотки или мазке из носоглотки, отбор проб представляет собой техническую задачу, сложную и загрязненную. Качество собранной пробы напрямую связано с последующим обнаружением. Если собранный образец имеет низкую вирусную нагрузку, легко получить ложноотрицательный результат, трудно подтвердить диагноз.
Время публикации: 21 июня 2020 г.
