1. O výrobe skúmaviek na odber vírusov
Skúmavky na odber vzoriek vírusov patria k produktom zdravotníckych pomôcok. Väčšina domácich výrobcov je registrovaná podľa prvotriednych produktov a len málo firiem je registrovaných podľa produktov druhej triedy. V snahe uspokojiť núdzové potreby Wu-chanu a iných miest nedávno mnohé spoločnosti využili „núdzový kanál“ „Požiadajte o povolenie na prvotriedny záznam. Skúmavka na odber vírusu sa skladá z tampónu na odber vzoriek, roztoku na ochranu vírusu a vonkajšieho obalu. Keďže neexistuje jednotná národná norma alebo priemyselná norma, produkty rôznych výrobcov sa značne líšia.
1. Vzorkovací tampón: Vzorkovací tampón sa priamo dotýka miesta odberu a materiál vzorkovacej hlavy úzko súvisí s následnou detekciou. Hlava tampónu na odber vzoriek by mala byť vyrobená z polyesterového (PE) syntetického vlákna alebo umelého vlákna (umelé vlákno). Nie je možné použiť špongiu z alginátu vápenatého alebo drevené tyčinky (vrátane bambusových tyčiniek) a materiál hlavy tampónu nemôže byť z bavlny. Pretože bavlnené vlákno má silnú adsorpciu bielkovín, nie je ľahké ho eluovať do následného skladovacieho roztoku; a keď sa zlomí drevená palica alebo bambusová palica obsahujúca alginát vápenatý a drevené zložky, namáčanie v skladovacom roztoku tiež adsorbuje proteín a dokonca môže inhibovať následnú PCR reakciu. Na materiál hlavice tampónu sa odporúča použiť syntetické vlákna ako PE vlákno, polyesterové vlákno a polypropylénové vlákno. Prírodné vlákna ako bavlna sa neodporúčajú. Neodporúčajú sa ani nylonové vlákna, pretože nylonové vlákna (podobne ako hlavy zubných kefiek) absorbujú vodu. Slabá, čo má za následok nedostatočný objem vzorky, čo ovplyvňuje rýchlosť detekcie. Kalcium alginátová špongia je zakázaná na odber vzoriek tampónu! Rukoväť tampónu má dva typy: zlomená a vstavaná. Rozbitý tampón sa po odbere vzorky vloží do skladovacej skúmavky a uzáver skúmavky sa zlomí po odlomení z polohy blízko odberovej hlavice; vstavaný tampón vloží vzorkovací tampón priamo do skladovacej skúmavky po odbere vzoriek a kryt skúmavky je zabudovaný Zarovnajte malý otvor s hornou časťou rukoväte a utiahnite kryt skúmavky. Ak porovnáme tieto dve metódy, posledná uvedená je relatívne bezpečná. Keď sa zlomený tampón používa v spojení s menšou skladovacou skúmavkou, môže pri rozbití spôsobiť rozstreknutie kvapaliny v skúmavke a je potrebné venovať plnú pozornosť riziku kontaminácie spôsobeného nesprávnym používaním produktu. Ako materiál rukoväte tampónu sa odporúča použiť dutú polystyrénovú (PS) extrudovanú rúrku alebo polypropylénovú (PP) injekčnú ryhovaciu rúrku. Bez ohľadu na použitý materiál nemožno pridávať prísady alginátu vápenatého; drevené palice alebo bambusové palice. Stručne povedané, vzorkovací tampón by mal zabezpečiť množstvo odberu a množstvo uvoľnenia a vybrané materiály nesmú mať látky, ktoré ovplyvňujú následné testovanie.
2. Roztok na konzerváciu vírusov: Na trhu sú široko používané dva druhy roztokov na ochranu vírusov, jedným je roztok na udržiavanie vírusov modifikovaný na základe transportného média a druhý je modifikovaný roztok na extrakčný lyzát nukleových kyselín.
Hlavnou zložkou prvého je Eagle's basic kultivačné médium (MEM) alebo Hankova vyvážená soľ, do ktorej sú pridané soli, aminokyseliny, vitamíny, glukóza a bielkoviny potrebné na prežitie vírusu. Tento skladovací roztok používa sodnú soľ fenolovej červenej ako indikátor a roztok. Keď je hodnota pH 6,6-8,0, roztok je ružový. Do konzervačného roztoku sa pridá potrebná glukóza, L-glutamín a proteín. Proteín je poskytovaný vo forme fetálneho hovädzieho séra alebo hovädzieho sérového albumínu, ktorý môže stabilizovať proteínový obal vírusu. Pretože konzervačný roztok je bohatý na živiny, prispieva k prežitiu vírusu, ale je tiež prospešný pre rast baktérií. Ak je konzervačný roztok kontaminovaný baktériami, rozmnoží sa vo veľkých množstvách. Oxid uhličitý v jeho metabolitoch spôsobí pokles pH konzervačného roztoku z ružového. Zožltne. Preto väčšina výrobcov pridala do svojich prípravkov antibakteriálne zložky. Odporúčané antibakteriálne látky sú penicilín, streptomycín, gentamicín a polymyxín B. Azid sodný a 2-metyl sa neodporúčajú Inhibítory ako 4-metyl-4-izotiazolín-3-ón (MCI) a 5-chlór-2-metyl-4 -izotiazolín-3-ón (CMCI), pretože tieto zložky majú vplyv na PCR reakciu. Keďže vzorka poskytnutá týmto konzervačným roztokom je v podstate živý vírus, možno zachovať originalitu vzorky v maximálnej miere a možno ju použiť nielen na extrakciu a detekciu nukleových kyselín vírusu, ale aj na kultiváciu a izolácia vírusov. Treba však poznamenať, že pri použití na detekciu sa extrakcia a purifikácia nukleovej kyseliny musí uskutočniť po inaktivácii.
Ďalší druh konzervačného roztoku pripraveného na báze extrakčného lyzátu nukleových kyselín, hlavnými zložkami sú vyvážené soli, chelatačné činidlo EDTA, soľ guanidínu (ako je guanidín izotiokyanát, hydrochlorid guanidínu atď.), aniónové povrchovo aktívne činidlo (ako je dodekán síran sodný), katiónové povrchovo aktívne látky (ako je tetradecyltrimetylamónium oxalát), fenol, 8-hydroxychinolín, ditiotreitol (DTT), proteináza K a ďalšie zložky. Tento skladovací roztok má priamo štiepiť vírus, aby sa uvoľnila nukleová kyselina a odstránila sa RNáza. Ak sa používa iba na RT-PCR, je vhodnejšie, ale lyzát môže inaktivovať vírus. Tento druh vzorky nemožno použiť na separáciu vírusovej kultúry.
Chelatačné činidlo kovových iónov používané v roztoku na ochranu vírusov sa odporúča použiť soli EDTA (ako je kyselina etyléndiamíntetraoctová dvojdraselná, kyselina etyléndiamíntetraoctová disodná atď.) a neodporúča sa používať heparín (ako je heparín sodný, heparín lítny), aby to neovplyvnilo detekciu PCR.
3. Konzervačná tuba: Materiál konzervačnej tuby by mal byť vybraný opatrne. Existujú údaje, ktoré naznačujú, že polypropylén (polypropylén) súvisí s adsorpciou nukleovej kyseliny, najmä pri koncentrácii iónov vysokého napätia, polyetylén (polyetylén) je výhodnejší ako polypropylén (polypropylén) Ľahko uchopiteľná DNA/RNA. Na skladovanie DNA/RNA sú vhodnejšie plastové nádoby z polyetylén-propylénového polyméru (polyalomér) a niektoré špeciálne spracované polypropylénové (polypropylénové) plastové nádoby. Okrem toho, pri použití rozbitného tampónu by sa skladovacia skúmavka mala pokúsiť vybrať nádobu s výškou väčšou ako 8 cm, aby sa zabránilo postriekaniu a kontaminácii obsahu pri zlomení tampónu.
4. Voda na výrobu konzervačného roztoku: Ultračistá voda použitá na výrobu konzervačného roztoku by mala byť filtrovaná cez ultrafiltračnú membránu s molekulovou hmotnosťou 13 000, aby sa zabezpečilo odstránenie nečistôt z polyméru z biologických zdrojov, ako sú RNáza, DNáza a endotoxín a bežné čistenie sa neodporúča. Voda alebo destilovaná voda.
2. Použitie skúmaviek na odber vzoriek vírusov
Odber vzoriek pomocou skúmavky na odber vírusov sa delí hlavne na odber vzoriek z orofaryngu a odber vzoriek z nosohltanu:
1. Odber vzoriek z orofaryngu: Najprv stlačte jazyk jazykovým depresorom, potom vytiahnite hlavu odberového tampónu do hrdla, aby ste utreli bilaterálne hltanové mandle a zadnú hltanovú stenu, a zadnú hltanovú stenu utrite miernou silou, nedotýkajte sa jazyka jednotka.
2. Odber z nosohltanu: tampónom zmerajte vzdialenosť od špičky nosa po ušný lalôčik a označte prstom, odberový tampón vložte do nosovej dutiny v smere vertikálneho nosa (tváre), tampón by mal siahať najmenej v polovici dĺžky ušného lalôčika po špičku nosa. Tampón ponechajte v nose 15-30 sekúnd, jemne otočte 3-5 krát a vytiahnite tampón.
Zo spôsobu použitia nie je ťažké zistiť, či ide o výter z orofaryngu alebo výter z nosohltanu, odber vzoriek je technická úloha, ktorá je náročná a kontaminovaná. Kvalita odobratej vzorky priamo súvisí s následnou detekciou. Ak má odobratá vzorka vírusovú záťaž Nízku, ľahko spôsobí falošné negatívy, ťažko potvrdí diagnózu.
Čas odoslania: 21. júna 2020
