1. O izdelavi epruvet za vzorčenje virusov
Epruvete za vzorčenje virusov spadajo med izdelke medicinskih pripomočkov. Večina domačih proizvajalcev je registriranih po prvorazrednih izdelkih, malo podjetij pa je registriranih po drugorazrednih izdelkih. V zadnjem času so mnoga podjetja za izpolnitev nujnih potreb Wuhana in drugih krajev izbrala »kanal za nujne primere« »Zaprosite za prvovrstno dovoljenje za zapis. Epruveta za vzorčenje virusa je sestavljena iz tampona za vzorčenje, raztopine za ohranjanje virusa in zunanje embalaže. Ker ni enotnega nacionalnega standarda ali industrijskega standarda, se izdelki različnih proizvajalcev zelo razlikujejo.
1. Bris za vzorčenje: Bris za vzorčenje se neposredno dotakne mesta vzorčenja, material glave za vzorčenje pa je tesno povezan z naknadno detekcijo. Glava palčke za vzorčenje mora biti izdelana iz sintetičnih vlaken iz poliestra (PE) ali rajona (umetna vlakna). Gobe iz kalcijevega alginata ali lesenih palčk (vključno z bambusovimi palčkami) ni mogoče uporabiti, material glave palčke pa ne sme biti bombaž. Ker imajo bombažna vlakna močno adsorpcijo beljakovin, jih ni enostavno eluirati v nadaljnjo raztopino za shranjevanje; in ko se lesena paličica ali bambusova paličica, ki vsebuje kalcijev alginat in lesene komponente, zlomi, bo namakanje v raztopini za shranjevanje prav tako adsorbiralo beljakovine in celo lahko zavira kasnejšo reakcijo PCR. Za material glave brisa je priporočljiva uporaba sintetičnih vlaken, kot so PE vlakna, poliestrska vlakna in polipropilenska vlakna. Naravna vlakna, kot je bombaž, niso priporočljiva. Najlonska vlakna tudi niso priporočljiva, ker najlonska vlakna (podobna glavam zobnih ščetk) vpijajo vodo. Slabo, kar ima za posledico nezadostno količino vzorčenja, kar vpliva na stopnjo odkrivanja. Goba iz kalcijevega alginata je prepovedana za vzorčenje materiala za bris! Ročaj za bris ima dve vrsti: zlomljen in vgrajen. Zlomljen bris se po vzorčenju vstavi v epruveto za shranjevanje, pokrov epruvete pa se zlomi, ko se zlomi z mesta blizu glave za vzorčenje; vgrajena palčka neposredno vstavi palčko za vzorčenje v cevko za shranjevanje po vzorčenju, pokrov cevi cevke za shranjevanje pa je vgrajen. Poravnajte majhno luknjo z vrhom ročaja in privijte pokrov cevke. Če primerjamo obe metodi, je slednja razmeroma varna. Če zlomljeno palčko uporabljate skupaj z manjšo cevjo za shranjevanje, lahko povzroči brizganje tekočine v cevki, ko je zlomljena, zato je treba posvetiti vso pozornost tveganju kontaminacije zaradi nepravilne uporabe izdelka. Za material ročaja tampona je priporočljivo uporabiti ekstrudirano votlo polistirensko (PS) cev ali polipropilensko (PP) injekcijsko gubalno cev. Ne glede na to, kateri material se uporablja, dodatkov kalcijevega alginata ni mogoče dodati; lesene ali bambusove palice. Skratka, bris za vzorčenje mora zagotavljati količino vzorčenja in količino sproščanja, izbrani materiali pa ne smejo vsebovati snovi, ki bi vplivale na kasnejše testiranje.
2. Rešitev za ohranjanje virusov: na trgu se pogosto uporabljata dve vrsti rešitev za ohranjanje virusov, ena je rešitev za vzdrževanje virusov, spremenjena glede na transportni medij, druga pa je spremenjena raztopina za lizat za ekstrakcijo nukleinske kisline.
Glavna sestavina prvega je Eaglovo osnovno gojišče (MEM) ali Hankova uravnotežena sol, ki so ji dodane soli, aminokisline, vitamini, glukoza in beljakovine, potrebne za preživetje virusa. Ta raztopina za shranjevanje uporablja fenol rdeče natrijevo sol kot indikator in raztopino. Ko je pH vrednost 6,6-8,0, je raztopina rožnata. Raztopini za konzerviranje se doda potrebna glukoza, L-glutamin in beljakovine. Beljakovina je na voljo v obliki fetalnega govejega seruma ali govejega serumskega albumina, ki lahko stabilizira beljakovinsko ovojnico virusa. Ker je raztopina za konzerviranje bogata s hranili, je ugodna za preživetje virusa, a tudi koristna za rast bakterij. Če je raztopina za konzerviranje kontaminirana z bakterijami, se bodo razmnožile v velikih količinah. Ogljikov dioksid v njegovih presnovkih bo povzročil padec pH raztopine za konzerviranje iz rožnate barve. Postane rumena. Zato je večina proizvajalcev svojim formulacijam dodala antibakterijske sestavine. Priporočena protibakterijska sredstva so penicilin, streptomicin, gentamicin in polimiksin B. Natrijev azid in 2-metil nista priporočljiva Zaviralci, kot sta 4-metil-4-izotiazolin-3-on (MCI) in 5-kloro-2-metil-4 -izotiazolin-3-on (CMCI), ker te komponente vplivajo na reakcijo PCR. Ker je vzorec, ki ga zagotavlja ta raztopina za konzerviranje, v bistvu živ virus, je mogoče ohraniti izvirnost vzorca v največji meri in ga je mogoče uporabiti ne samo za ekstrakcijo in detekcijo nukleinskih kislin virusa, ampak tudi za gojenje in izolacija virusov. Vendar je treba upoštevati, da je treba pri uporabi za detekcijo ekstrakcijo nukleinske kisline in čiščenje izvesti po inaktivaciji.
Druga vrsta raztopine za konzerviranje, pripravljena na osnovi lizata za ekstrakcijo nukleinske kisline, glavne sestavine so uravnotežene soli, kelatno sredstvo EDTA, gvanidinska sol (kot je gvanidin izotiocianat, gvanidin hidroklorid itd.), anionsko površinsko aktivno sredstvo (kot je dodekan natrijev sulfat), kationski površinsko aktivne snovi (kot je tetradeciltrimetilamonijev oksalat), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiotreitol (DTT), proteinaza K in druge komponente. Ta raztopina za shranjevanje neposredno cepi virus, da sprosti nukleinsko kislino in odstrani RNazo. Če se uporablja samo za RT-PCR, je bolj primeren, vendar lahko lizat inaktivira virus. Tovrstnega vzorca ni mogoče uporabiti za ločevanje virusnih kultur.
Za sredstvo za kelatiranje kovinskih ionov, ki se uporablja v raztopini za ohranjanje virusa, je priporočljiva uporaba soli EDTA (kot je dikalijeva etilendiamintetraocetna kislina, dinatrijeva etilendiamintetraocetna kislina itd.) in ni priporočljiva uporaba heparina (kot je natrijev heparin, litijev heparin), da ne vpliva na odkrivanje PCR.
3. Cev za konzerviranje: Material tube za konzerviranje morate skrbno izbrati. Obstajajo podatki, ki kažejo, da je polipropilen (polipropilen) povezan z adsorpcijo nukleinske kisline, zlasti pri visoki napetostni koncentraciji ionov, polietilen (polietilen) je bolj zaželen kot polipropilen (polipropilen). DNA/RNA, ki jo je enostavno zajeti. Polietilen-propilenska polimerna (Polyallomer) plastika in nekatere posebej obdelane plastične posode iz polipropilena (Polypropylene) so bolj primerne za shranjevanje DNA/RNA. Poleg tega mora cev za shranjevanje pri uporabi zlomljivega tampona izbrati posodo z višino, večjo od 8 cm, da preprečite brizganje vsebine in kontaminacijo, ko je tampon prelomljen.
4. Voda za raztopino za konzerviranje proizvodnje: ultračisto vodo, ki se uporablja za raztopino za konzerviranje proizvodnje, je treba filtrirati skozi ultrafiltracijsko membrano z molekulsko maso 13.000, da se zagotovi odstranitev polimernih nečistoč iz bioloških virov, kot so RNaza, DNaza in endotoksin ter običajno čiščenje ni priporočljivo. Voda ali destilirana voda.
2. Uporaba epruvet za vzorčenje virusa
Vzorčenje z uporabo epruvete za vzorčenje virusa je v glavnem razdeljeno na orofaringealno vzorčenje in nazofaringealno vzorčenje:
1. Orofaringealno vzorčenje: najprej pritisnite na jezik z depresorjem za jezik, nato iztegnite glavo palčke za vzorčenje v grlo, da obrišete dvostranske faringealne tonzile in zadnjo steno žrela, ter rahlo obrišite zadnjo steno žrela, pri čemer se ne dotikajte jezika enota.
2. Nazofaringealni odvzem vzorcev: z palčko izmerimo razdaljo od konice nosu do ušesne mečice in označimo s prstom, palčko za vzorčenje vstavimo v nosno votlino v smeri navpičnega nosu (obraza), palčka naj sega vsaj polovica dolžine ušesne mečice do konice nosu. Paličico pustite v nosu 15-30 sekund, 3-5-krat nežno zavrtite in izvlecite palčko.
Iz načina uporabe ni težko razbrati, ali gre za orofaringealni bris ali nazofaringealni bris, vzorčenje je tehnično opravilo, ki je težko in kontaminirano. Kakovost zbranega vzorca je neposredno povezana s kasnejšo detekcijo. Če ima zbrani vzorec nizko virusno obremenitev, lahko povzroči lažne negativne rezultate, težko je potrditi diagnozo.
Čas objave: 21. junija 2020
