Več misli o cevi za vzorčenje virusov

1. o proizvodnji cevi za vzorčenje virusov
Cevi za vzorčenje virusov spadajo v izdelke medicinskih pripomočkov. Večina domačih proizvajalcev je registriranih glede na prvovrstne izdelke, le malo podjetij pa je registriranih v skladu z izdelki drugega razreda. V zadnjem času so za zadovoljevanje nujnih potreb in drugih krajev številna podjetja "veljala za prvovrstno dovoljenje za vzorčenje virusov.

1. Vzorčni bris: Vzorčni bris neposredno stika na mestu vzorčenja, material glave za vzorčenje pa je tesno povezan z poznejšim odkrivanjem. Vzorčna glava brisa mora biti izdelana iz poliestrskih (PE) sintetičnih vlaken ali rajona (vlakna iz umetne osebe). Kalcijev alginat gobice ali lesenih palic (vključno z bambusovimi palicami) ni mogoče uporabiti, materiala glave brisa pa ne more biti bombažni izdelki. Ker imajo bombažno vlakno močno adsorpcijo beljakovin, ga ni enostavno elutirati v naslednjo raztopino za shranjevanje; In ko se lesena ali bambusova palica, ki vsebuje kalcijev alginat in lesene komponente, namoči v raztopini za shranjevanje tudi adsorbira beljakovine in celo bo lahko zavirala naslednjo reakcijo PCR. Priporočljivo je uporabiti sintetična vlakna, kot so PE vlakna, poliestrska vlakna in polipropilenska vlakna za material glave brisa. Naravna vlakna, kot je bombaž, niso priporočljiva. Tudi najlonska vlakna ni priporočljiva, ker najlonska vlakna (podobno kot zobne ščetke) absorbirajo vodo. Slabo, kar ima zadostno količino vzorčenja, kar vpliva na stopnjo odkrivanja. Goba kalcijevega alginata je prepovedana za vzorčenje materiala za bris! Slad ročaj ima dve vrsti: pokvarjen in vgrajen. Zlomljeni bris je po vzorčenju nameščen v cevi za shranjevanje, pokrov cevi pa se pokvari, potem ko se razbije iz položaja v bližini glave vzorčenja; Vgrajen bris po vzorčenju neposredno postavi vzorčni bris v cev za shranjevanje, pokrov za shranjevanje cevi pa je vgrajen v poravnavo majhne luknje z vrhom ročaja in privijte pokrov cevi. Če primerjamo obe metodi, je slednja razmeroma varna. Ko se zlomljeni bris uporablja v povezavi s cevjo za shranjevanje manjše velikosti, lahko povzroči brizganje tekočine v cevi, ko je pokvarjena, in v celoti je treba posvetiti v celoti pozornost na tveganje kontaminacije, ki jo povzroči nepravilna uporaba izdelka. Priporočljivo je, da za material ročaja brisa uporaba volilne polistirenske cevi (PS) iz ekstrudirane cevi ali polipropilena (PP). Ne glede na to, kateri material se uporablja, ni mogoče dodati aditivov alginata kalcija; Lesene palice ali bambusove palice. Skratka, vzorčni bris bi moral zagotoviti količino vzorčenja in količino sproščanja, izbrani materiali pa ne smejo imeti snovi, ki vplivajo na nadaljnje testiranje.

2. Raztopina za ohranjanje virusa: Na trgu se široko uporabljata dve vrsti raztopin za ohranjanje virusa, ena je raztopina za vzdrževanje virusov, ki se spreminja na podlagi transportnega medija, druga pa je spremenjena rešitev za lizat ekstrakcije nukleinske kisline.
Glavna sestavina prejšnjega je Eagleov osnovni gojišče (MEM) ali Hankova uravnotežena sol, ki jo dodamo s soli, aminokislinami, vitamini, glukozo in beljakovinami, potrebnimi za preživetje virusa. Ta raztopina za shranjevanje uporablja fenolno rdečo natrijevo sol kot indikator in raztopino. Kadar je pH vrednost 6,6-8,0, je rešitev roza. V raztopino za konzerviranje se dodajo potrebna glukoza, L-glutamin in beljakovine. Protein je na voljo v obliki fetalnega govejega seruma ali govejega serumskega albumina, ki lahko stabilizira beljakovinsko lupino virusa. Ker je raztopina za ohranjanje bogata s hranili, je pripomogla k preživetju virusa, hkrati pa koristi tudi za rast bakterij. Če je raztopina za ohranitev onesnažena z bakterijami, se bo pomnožila v velikih količinah. Ogljikov dioksid v njegovih presnovkih bo povzročil, da bo pH konzerviranja padel iz roza postane rumeno. Zato je večina proizvajalcev v svoje formulacije dodala antibakterijske sestavine. Priporočena antibakterijska sredstva so penicilin, streptomicin, gentamicin in polimiksin B. natrijev azid in 2-metil niso priporočljivi inhibitorji, kot sta 4-metil-4-izotiazolin-3 (MCI) in 5-kloro-2-metil-4-4-3-3-3-3-po) PCR reakcija. Ker je vzorec, ki ga ponuja ta ohranitvena raztopina, v bistvu živa virus, lahko izvirnost vzorca v največji meri ohranimo in ga lahko uporabimo ne le za ekstrakcijo in odkrivanje virusnih nukleinskih kislin, temveč tudi za gojenje in izolacijo virusov. Vendar je treba opozoriti, da je treba po inaktivaciji, ko se uporablja za odkrivanje, izvesti in čiščenje nukleinske kisline.
Druga vrsta ohranitvene raztopine, pripravljene na podlagi lizata ekstrakcije nukleinske kisline, so glavne sestavine uravnotežene soli, kelacijsko sredstvo EDTA, gvanidinska sol (kot so gvanidinski izotiocianat, gvanidin hidroklorid itd.), Anionske površinske aktivne snovi tetradeciltrimetilamonijev oksalat), fenol, 8-hidroksikinolin, ditiothreitol (DTT), proteinaza K in druge komponente. Če se uporablja samo za RT-PCR, je bolj primeren, vendar lizat lahko inaktivira virus. Tega vzorca ni mogoče uporabiti za ločevanje kulture virusa.

Kovinsko ionsko kelacijsko sredstvo, ki se uporablja v raztopini za ohranjanje virusa, priporočamo uporabo EDTA soli (na primer dipotassijeva etilendiaminetetraacetna kislina, disodijeva etilendiaminetetraacetna kislina itd.), In ga ni priporočljivo uporabiti heparin (na primer natrijev heparin, litij hepar), tako da ne bo treba vplivati ​​na PCR.
3. Opremarana cev: Material ohranitvene cevi je treba skrbno izbrati. Obstajajo podatki, ki kažejo, da je polipropilen (polipropilen) povezan z adsorpcijo nukleinske kisline, zlasti pri koncentraciji ionov z visoko napetostjo, je polietilen (polietilen) prednostno kot polipropilen (polipropilen), ki ga je enostavno dojeti DNA/RNA. Polietilen-propilen polimer (polialomer) in nekatere posebej predelane polipropilenske (polipropilenske) plastične posode so primernejše za shranjevanje DNK/RNA. Poleg tega mora pri uporabi lomljenega brisa cev za shranjevanje poskusiti izbrati posodo z višino, večjo od 8 cm, da se prepreči, da bi se vsebina brizgala in onesnažila, ko se bris razbije.

4. Voda za raztopino za ohranjanje proizvodnje: Ultravo vodo, ki se uporablja za raztopino za ohranitev proizvodnje, je treba filtrirati z ultrafiltracijsko membrano z molekulsko maso 13.000, da se zagotovi odstranitev nečistoč polimerov iz bioloških virov, kot so RNase, DNase in endotoksin ter urejenega čiščenja, ni priporočljivo. Voda ali destilirana voda.

2. Uporaba cevi za vzorčenje virusov

Vzorčenje z uporabo cevi za vzorčenje virusa je v glavnem razdeljeno na vzorčenje orofaringeala in vzorčenje nazofaringeja:

1. Orofaringealno vzorčenje: najprej pritisnite jezik z jezikom depresorjem, nato iztegnite glavo vzorčnega brisa v grlo, da obrišete dvostranske faringealne tonzile in posteriorno faringealno steno ter obrišite posteriorno faringealno steno s svetlobno steno, izogibajte se dotiku dotika.

2. Nasopharyngeal sampling: measure the distance from the tip of the nose to the ear lobe with a swab and mark with a finger, insert the sampling swab into the nasal cavity in the direction of the vertical nose (face), the swab should extend at least half the length of the ear lobe to the tip of the nose, Leave the swab in the nose for 15-30 seconds, gently rotate 3-5 times, and withdraw bris.
Iz metode uporabe ni težko razbrati, ne glede na to, ali gre za orofaringealni bris ali nazofaringealni bris, vzorčenje je tehnična naloga, ki je težka in onesnažena. Kakovost zbranega vzorca je neposredno povezana s poznejšim odkrivanjem. Če ima zbrani vzorec virusno obremenitev nizko, ki je enostavno povzročiti lažne negativnosti, težko potrditi diagnozo.