1. О производњи епрувета за узорковање вируса
Епрувете за узорковање вируса припадају производима медицинских уређаја. Већина домаћих произвођача регистрована је према првокласним производима, а мало предузећа је регистровано према производима друге класе. Недавно, да би задовољиле хитне потребе Вухана и других места, многе компаније су узеле „канал за хитне случајеве“ „Пријавите се за првокласну дозволу за снимање. Цев за узорковање вируса се састоји од штапића за узорковање, раствора за конзервацију вируса и спољашњег паковања. Пошто не постоји јединствени национални стандард или индустријски стандард, производи различитих произвођача се веома разликују.
1. Брис за узорковање: Брис за узорковање директно долази у контакт са местом узорковања, а материјал главе за узорковање је уско повезан са накнадном детекцијом. Глава штапића за узорковање треба да буде направљена од полиестерског (ПЕ) синтетичког влакна или рајона (вештачко влакно). Калцијум алгинат сунђер или штапићи од дрвета (укључујући штапиће од бамбуса) се не могу користити, а материјал главе штапића не може бити памучни производи. Пошто памучна влакна имају јаку адсорпцију протеина, није лако елуирати у следећи раствор за складиштење; а када се дрвени штап или бамбусов штапић који садржи калцијум алгинат и дрвене компоненте сломи, потапање у раствор за складиштење ће такође адсорбовати протеин, па чак и може инхибирати накнадну ПЦР реакцију. Препоручљиво је користити синтетичка влакна као што су ПЕ влакна, полиестерска влакна и полипропиленска влакна за материјал главе штапића. Природна влакна као што је памук се не препоручују. Најлонска влакна се такође не препоручују јер најлонска влакна (слично главама четкице за зубе) упијају воду. Лоше, што доводи до недовољног обима узорковања, што утиче на стопу детекције. Калцијум алгинат сунђер је забрањен за узорковање материјала за брис! Дршка за брис има два типа: сломљена и уграђена. Сломљени брис се ставља у епрувету за складиштење након узорковања, а поклопац епрувете се ломи након што је сломљен са положаја близу главе за узорковање; уграђени брис директно ставља брис за узорковање у епрувету за складиштење након узорковања, а поклопац цеви за складиштење је уграђен. Поравнајте малу рупу са врхом ручке и затегните поклопац цеви. Упоређујући ове две методе, овај други је релативно сигуран. Када се сломљени штапић користи заједно са епруветом за складиштење мање величине, може изазвати прскање течности у епрувети када се сломи, а пуну пажњу треба обратити на ризик од контаминације узроковане неправилном употребом производа. Препоручује се употреба шупље полистиренске (ПС) екструдиране цеви или полипропиленске (ПП) ињекцијске цеви за наборе за материјал дршке штапића. Без обзира који се материјал користи, адитиви калцијум алгината се не могу додати; дрвени штапићи или бамбусови штапићи. Укратко, брис за узорковање треба да обезбеди количину узорковања и количину ослобађања, а одабрани материјали не смеју да садрже супстанце које утичу на накнадно испитивање.
2. Решење за очување вируса: Постоје две врсте решења за очување вируса које се широко користе на тржишту, једно је решење за одржавање вируса модификовано на основу транспортног медијума, а друго је модификовано решење за лизат екстракције нуклеинске киселине.
Главна компонента првог је Орлов основни медијум за културу (МЕМ) или Хенкова избалансирана со, којој се додају соли, аминокиселине, витамини, глукоза и протеини неопходни за преживљавање вируса. Овај раствор за складиштење користи фенол црвену натријумову со као индикатор и раствор. Када је пХ вредност 6,6-8,0, раствор је ружичаст. У раствор за конзервацију се додају неопходна глукоза, Л-глутамин и протеин. Протеин се обезбеђује у облику феталног говеђег серума или говеђег серумског албумина, који може да стабилизује протеински омотач вируса. Пошто је раствор за конзервирање богат хранљивим материјама, погодан је за опстанак вируса, али и за раст бактерија. Ако је раствор за конзервацију контаминиран бактеријама, он ће се умножити у великим количинама. Угљен диоксид у његовим метаболитима ће проузроковати да пХ раствора за конзервацију падне са ружичасте. Пожути. Због тога је већина произвођача додала антибактеријске састојке у своје формулације. Препоручени антибактеријски агенси су пеницилин, стрептомицин, гентамицин и полимиксин Б. Натријум азид и 2-метил се не препоручују Инхибитори као што су 4-метил-4-изотиазолин-3-он (МЦИ) и 5-хлоро-2-метил-4 -изотиазолин-3-он (ЦМЦИ) јер ове компоненте утичу на ПЦР реакцију. С обзиром да је узорак који је обезбеђен овим раствором за конзервацију у основи живи вирус, оригиналност узорка се може задржати у највећој мери и може се користити не само за екстракцију и детекцију нуклеинских киселина вируса, већ и за култивацију и изолација вируса. Међутим, треба напоменути да када се користи за детекцију, екстракција нуклеинске киселине и пречишћавање морају бити изведени након инактивације.
Друга врста раствора за конзервацију припремљена на бази лизата за екстракцију нуклеинске киселине, главне компоненте су уравнотежене соли, ЕДТА хелататор, гванидин со (као што је гванидин изотиоцијанат, гванидин хидрохлорид, итд.), ањонски сурфактант (као што је додекан натријум сулфат), катјонски сурфактанти (као што је тетрадецилтриметиламонијум оксалат), фенол, 8-хидроксихинолин, дитиотреитол (ДТТ), протеиназа К и друге компоненте, Ово решење за складиштење је за директно цепање вируса да би се ослободила нуклеинска киселина и елиминисала РНКаза. Ако се користи само за РТ-ПЦР, он је погоднији, али лизат може инактивирати вирус. Ова врста узорка се не може користити за одвајање вирусних култура.
Средство за хелатирање јона метала који се користи у раствору за очување вируса препоручује се коришћење ЕДТА соли (као што су дикалијум етилендиаминтетрасирћетна киселина, динатријум етилендиаминтетрасирћетна киселина, итд.), а не препоручује се употреба хепарина (као што је натријум хепарин, литијум хепарин), како не би утицали на ПЦР детекцију.
3. Цев за конзервацију: Материјал цеви за конзервацију треба пажљиво одабрати. Постоје подаци који упућују на то да је полипропилен (полипропилен) повезан са адсорпцијом нуклеинске киселине, посебно при концентрацији јона високе напетости, полиетилен (полиетилен) је пожељнији од полипропилена (полипропилена). Лако схватити ДНК/РНА. Полиетилен-пропилен полимер (полиаломер) пластика и неки специјално обрађени полипропилен (полипропилен) пластични контејнери су погоднији за складиштење ДНК/РНА. Поред тога, када се користи ломљиви брис, епрувета за складиштење треба да покуша да изабере контејнер са висином већом од 8 цм како би се спречило прскање и контаминација садржаја када се брис сломи.
4. Вода за производни раствор за конзервирање: Ултра чиста вода која се користи за производни раствор за конзервацију треба да се филтрира кроз ултрафилтрациону мембрану са молекулском тежином од 13.000 да би се обезбедило уклањање полимерних нечистоћа из биолошких извора, као што су РНаза, ДНаза и ендотоксин, и обично пречишћавање се не препоручује. Вода или дестилована вода.
2. Употреба епрувета за узорковање вируса
Узимање узорака помоћу епрувете за узорковање вируса углавном се дели на узорковање орофаринкса и узорковање назофаринкса:
1. Узимање орофарингеалног узорка: Прво притисните језик депресором језика, затим продужите главу штапића за узорковање у грло да обришете обостране фарингеалне крајнике и задњи зид ждрела и лаганом силом обришите задњи зид ждрела, избегавајте додиривање језика јединица.
2. Узимање назофарингеалног узорка: тампоном измерити растојање од врха носа до ушне шкољке и означити прстом, убацити брис за узорковање у носну шупљину у правцу вертикалног носа (лице), брис треба да се протеже. најмање пола дужине ушне шкољке до врха носа, оставите брис у носу 15-30 секунди, нежно окрените 3-5 пута и повуците брис.
Из начина употребе није тешко видети, да ли је брис орофаринкса или назофарингеални брис, узорковање је технички задатак, који је тежак и контаминиран. Квалитет сакупљеног узорка је директно повезан са накнадном детекцијом. Ако прикупљени узорак има вирусно оптерећење ниско, лако је изазвати лажне негативне резултате, тешко је потврдити дијагнозу.
Време поста: 21.06.2020
