ความคิดหลายประการเกี่ยวกับหลอดเก็บตัวอย่างไวรัส

1. เกี่ยวกับการผลิตหลอดเก็บตัวอย่างไวรัส
หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสเป็นของผลิตภัณฑ์อุปกรณ์การแพทย์ ผู้ผลิตในประเทศส่วนใหญ่ได้รับการจดทะเบียนตามผลิตภัณฑ์ชั้นหนึ่ง และมีบริษัทเพียงไม่กี่แห่งที่จดทะเบียนตามผลิตภัณฑ์ชั้นสอง เมื่อเร็ว ๆ นี้ เพื่อตอบสนองความต้องการฉุกเฉินของหวู่ฮั่นและสถานที่อื่น ๆ หลายบริษัทได้ใช้ "ช่องทางฉุกเฉิน" "สมัครเพื่อขออนุญาตบันทึกชั้นหนึ่ง หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสประกอบด้วยไม้พันเก็บตัวอย่าง สารละลายสำหรับเก็บรักษาไวรัส และบรรจุภัณฑ์ด้านนอก เนื่องจากไม่มีมาตรฐานระดับชาติหรือมาตรฐานอุตสาหกรรมแบบครบวงจร ผลิตภัณฑ์ของผู้ผลิตหลายรายจึงมีความแตกต่างกันอย่างมาก

1. ไม้กวาดเก็บตัวอย่าง: ไม้กวาดเก็บตัวอย่างจะติดต่อกับสถานที่เก็บตัวอย่างโดยตรง และวัสดุของหัวเก็บตัวอย่างมีความสัมพันธ์อย่างใกล้ชิดกับการตรวจจับในภายหลัง หัวเก็บตัวอย่างควรทำจากเส้นใยสังเคราะห์โพลีเอสเตอร์ (PE) หรือเรยอน (เส้นใยที่มนุษย์สร้างขึ้น) ไม่สามารถใช้ฟองน้ำแคลเซียมอัลจิเนตหรือสำลีแท่งไม้ (รวมถึงแท่งไม้ไผ่) และวัสดุของหัวสำลีต้องไม่ใช่ผลิตภัณฑ์ฝ้าย เนื่องจากใยฝ้ายมีการดูดซับโปรตีนได้สูง จึงไม่ใช่เรื่องง่ายที่จะชะล้างลงในสารละลายในการจัดเก็บในภายหลัง และเมื่อแท่งไม้หรือแท่งไม้ไผ่ที่มีแคลเซียมอัลจิเนตและส่วนประกอบที่เป็นไม้หัก การแช่ในสารละลายในการจัดเก็บจะดูดซับโปรตีนด้วย และแม้กระทั่งสามารถยับยั้งปฏิกิริยา PCR ที่ตามมาได้ ขอแนะนำให้ใช้เส้นใยสังเคราะห์ เช่น เส้นใย PE เส้นใยโพลีเอสเตอร์ และเส้นใยโพลีโพรพีลีน สำหรับวัสดุของหัวไม้กวาด ไม่แนะนำให้ใช้เส้นใยธรรมชาติ เช่น ผ้าฝ้าย ไม่แนะนำให้ใช้เส้นใยไนลอนเนื่องจากเส้นใยไนลอน (คล้ายกับหัวแปรงสีฟัน) จะดูดซับน้ำ ไม่ดี ส่งผลให้ปริมาณตัวอย่างไม่เพียงพอ ส่งผลต่ออัตราการตรวจจับ ห้ามใช้ฟองน้ำแคลเซียมอัลจิเนตในการสุ่มตัวอย่างวัสดุไม้กวาด! ด้ามจับไม้กวาดมีสองประเภท: แบบหักและแบบบิวท์อิน ไม้กวาดที่หักจะถูกวางลงในหลอดเก็บหลังจากการสุ่มตัวอย่าง และฝาหลอดจะหักหลังจากแตกออกจากตำแหน่งใกล้กับหัวเก็บตัวอย่าง ไม้กวาดในตัวจะวางไม้กวาดเก็บตัวอย่างลงในหลอดจัดเก็บโดยตรงหลังจากการสุ่มตัวอย่าง และฝาครอบท่อจัดเก็บถูกสร้างขึ้นใน จัดแนวรูเล็ก ๆ ให้ตรงกับด้านบนของด้ามจับ และขันฝาครอบท่อให้แน่น เมื่อเปรียบเทียบทั้งสองวิธี วิธีหลังค่อนข้างปลอดภัย เมื่อใช้ไม้กวาดที่หักร่วมกับหลอดเก็บที่มีขนาดเล็กกว่า อาจทำให้ของเหลวกระเด็นในหลอดเมื่อหัก และควรให้ความสนใจอย่างเต็มที่ต่อความเสี่ยงของการปนเปื้อนที่เกิดจากการใช้ผลิตภัณฑ์อย่างไม่เหมาะสม ขอแนะนำให้ใช้ท่ออัดรีดโพลีสไตรีน (PS) แบบกลวงหรือท่อฉีดพับโพลีโพรพีลีน (PP) สำหรับวัสดุของด้ามจับไม้กวาด ไม่ว่าจะใช้วัสดุใดก็ตาม ไม่สามารถเติมสารเติมแต่งแคลเซียมอัลจิเนตได้ แท่งไม้หรือแท่งไม้ไผ่ กล่าวโดยสรุป ไม้กวาดเก็บตัวอย่างควรตรวจสอบปริมาณการเก็บตัวอย่างและปริมาณการปล่อย และวัสดุที่เลือกจะต้องไม่มีสารที่ส่งผลต่อการทดสอบครั้งต่อไป

2. โซลูชันการเก็บรักษาไวรัส: โซลูชันการเก็บรักษาไวรัสมีอยู่สองประเภทที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในตลาด หนึ่งคือโซลูชันการบำรุงรักษาไวรัสที่ดัดแปลงตามสื่อการขนส่ง และอีกประเภทหนึ่งเป็นโซลูชันที่ได้รับการดัดแปลงสำหรับไลเซตสกัดกรดนิวคลีอิก
ส่วนประกอบหลักคืออาหารเลี้ยงเชื้อพื้นฐานของ Eagle (MEM) หรือเกลือสมดุลของแฮงค์ ซึ่งเติมเกลือ กรดอะมิโน วิตามิน กลูโคส และโปรตีนที่จำเป็นต่อการอยู่รอดของไวรัส สารละลายจัดเก็บนี้ใช้เกลือโซเดียมฟีนอลเรดเป็นตัวบ่งชี้และสารละลาย เมื่อค่า pH อยู่ที่ 6.6-8.0 สารละลายจะเป็นสีชมพู เพิ่มกลูโคส, แอล-กลูตามีนและโปรตีนที่จำเป็นลงในสารละลายถนอมอาหาร โปรตีนดังกล่าวมีให้ในรูปของซีรั่มของวัวในครรภ์หรือซีรั่มอัลบูมินของวัว ซึ่งสามารถทำให้เปลือกโปรตีนของไวรัสคงตัวได้ เนื่องจากน้ำยาถนอมอาหารอุดมไปด้วยสารอาหาร จึงเอื้อต่อการอยู่รอดของไวรัส แต่ยังมีประโยชน์ต่อการเจริญเติบโตของแบคทีเรียอีกด้วย หากน้ำยาถนอมอาหารปนเปื้อนแบคทีเรีย ก็จะเกิดการแพร่พันธุ์ในปริมาณมาก คาร์บอนไดออกไซด์ในสารของมันจะทำให้ pH ของสารละลายเก็บรักษาลดลงจากสีชมพูเปลี่ยนเป็นสีเหลือง ดังนั้นผู้ผลิตส่วนใหญ่จึงเพิ่มส่วนผสมต้านเชื้อแบคทีเรียลงในสูตรของตน สารต้านแบคทีเรียที่แนะนำ ได้แก่ เพนิซิลลิน สเตรปโตมัยซิน เจนตามิซิน และโพลีไมซิน บี ไม่แนะนำให้ใช้โซเดียมเอไซด์และ 2-เมทิล สารยับยั้ง เช่น 4-เมทิล-4-ไอโซไทอาโซลิน-3-โอน (MCI) และ 5-คลอโร-2-เมทิล-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) เนื่องจากส่วนประกอบเหล่านี้มีผลต่อปฏิกิริยา PCR เนื่องจากตัวอย่างที่ได้จากสารละลายถนอมอาหารนี้โดยพื้นฐานแล้วเป็นไวรัสที่มีชีวิต ดังนั้นความแปลกใหม่ของตัวอย่างจึงสามารถรักษาไว้ได้ในระดับสูงสุด และสามารถใช้ได้ไม่เพียงแต่ในการสกัดและตรวจหากรดนิวคลีอิกของไวรัสเท่านั้น แต่ยังใช้สำหรับการเพาะปลูกและ การแยกไวรัส อย่างไรก็ตาม ควรสังเกตว่าเมื่อใช้เพื่อการตรวจจับ จะต้องดำเนินการสกัดกรดนิวคลีอิกและการทำให้บริสุทธิ์หลังจากการปิดใช้งาน
สารละลายถนอมอาหารอีกชนิดหนึ่งที่เตรียมโดยใช้ไลเซตสกัดกรดนิวคลีอิก ส่วนประกอบหลักคือเกลือที่สมดุล สารคีเลต EDTA เกลือกัวนิดีน (เช่น ไอโซไทโอไซยาเนตกัวนิดีน กัวนิดีนไฮโดรคลอไรด์ ฯลฯ) สารลดแรงตึงผิวประจุลบ (เช่นโดเดเคน โซเดียมซัลเฟต) ประจุบวก สารลดแรงตึงผิว (เช่น tetradecyltrimethylammonium oxalate), ฟีนอล, 8-hydroxyquinoline, dithiothreitol (DTT), protease K และส่วนประกอบอื่นๆ โซลูชันการจัดเก็บนี้มีไว้เพื่อแยกไวรัสโดยตรงเพื่อปล่อยกรดนิวคลีอิกและกำจัด RNase หากใช้สำหรับ RT-PCR เท่านั้นจะเหมาะสมกว่า แต่ไลซีนสามารถยับยั้งไวรัสได้ ตัวอย่างประเภทนี้ไม่สามารถใช้สำหรับการแยกเชื้อไวรัสได้

สารคีเลตไอออนของโลหะที่ใช้ในสารละลายถนอมไวรัสแนะนำให้ใช้เกลือ EDTA (เช่น กรดไดโพแทสเซียม เอทิลีนไดเอมีนเตตราอะซิติก กรดไดโซเดียม เอทิลีนไดเอมีนเตตราอะซิติก ฯลฯ) และไม่แนะนำให้ใช้เฮปาริน (เช่น โซเดียมเฮปาริน ลิเธียมเฮปาริน) เพื่อไม่ให้ส่งผลต่อการตรวจจับ PCR
3. ท่อเก็บรักษา: ควรเลือกวัสดุของท่อเก็บรักษาอย่างระมัดระวัง มีข้อมูลที่ชี้ให้เห็นว่าโพลีโพรพีลีน (Polypropylene) เกี่ยวข้องกับการดูดซับกรดนิวคลีอิก โดยเฉพาะอย่างยิ่งที่ความเข้มข้นของไอออนความตึงเครียดสูง โพลีเอทิลีน (Polyethylene) เป็นที่นิยมมากกว่าโพลีโพรพีลีน (Polypropylene) ง่ายต่อการเข้าใจ DNA/RNA พลาสติกโพลีเอทิลีน-โพรพิลีนโพลีเมอร์ (Polyallomer) และภาชนะพลาสติกโพลีโพรพีลีน (Polypropylene) ที่ผ่านกระบวนการพิเศษบางชนิดเหมาะสำหรับการจัดเก็บ DNA/RNA มากกว่า นอกจากนี้ เมื่อใช้ไม้กวาดที่แตกหักได้ หลอดเก็บควรพยายามเลือกภาชนะที่มีความสูงมากกว่า 8 ซม. เพื่อป้องกันไม่ให้สารกระเด็นและปนเปื้อนเมื่อไม้กวาดหัก

4. น้ำสำหรับสารละลายถนอมการผลิต: น้ำบริสุทธิ์พิเศษที่ใช้สำหรับสารละลายถนอมการผลิตควรกรองผ่านเมมเบรนกรองละเอียดที่มีน้ำหนักโมเลกุล 13,000 เพื่อให้แน่ใจว่าสามารถกำจัดสิ่งเจือปนโพลีเมอร์จากแหล่งทางชีวภาพ เช่น RNase, DNase และเอนโดทอกซิน และ ไม่แนะนำให้ทำให้บริสุทธิ์แบบธรรมดา น้ำหรือน้ำกลั่น

2. การใช้หลอดเก็บตัวอย่างไวรัส

การสุ่มตัวอย่างโดยใช้หลอดเก็บตัวอย่างไวรัสส่วนใหญ่จะแบ่งออกเป็นการสุ่มตัวอย่างช่องปากและช่องจมูก:

1. การสุ่มตัวอย่างช่องปาก: ขั้นแรกกดลิ้นด้วยเครื่องกดลิ้น จากนั้นขยายหัวของการสุ่มตัวอย่างเข้าไปในลำคอเพื่อเช็ดต่อมทอนซิลคอหอยทวิภาคีและผนังคอหอยด้านหลัง และเช็ดผนังคอหอยด้านหลังด้วยแรงเบา ๆ หลีกเลี่ยงการสัมผัสลิ้น หน่วย.

2. การเก็บตัวอย่างโพรงจมูก: วัดระยะห่างจากปลายจมูกถึงกลีบหูด้วยสำลีและทำเครื่องหมายด้วยนิ้ว จากนั้นสอดสำลีเก็บตัวอย่างเข้าไปในโพรงจมูกในทิศทางของจมูกแนวตั้ง (ใบหน้า) ไม้กวาดควรขยายออก อย่างน้อยครึ่งหนึ่งของความยาวกลีบหูจนถึงปลายจมูก ทิ้งผ้าเช็ดไว้ในจมูกเป็นเวลา 15-30 วินาที หมุนเบาๆ 3-5 ครั้ง แล้วดึงผ้าเช็ดออก
จากวิธีใช้ดูได้ไม่ยากไม่ว่าจะเป็น oropharyngeal swab หรือ nasopharyngeal swab การสุ่มตัวอย่างถือเป็นงานด้านเทคนิคที่ยากและมีการปนเปื้อน คุณภาพของตัวอย่างที่เก็บมาจะเกี่ยวข้องโดยตรงกับการตรวจจับในภายหลัง หากเก็บตัวอย่างมีปริมาณไวรัสต่ำ ทำให้เกิดผลลบลวงง่าย ยืนยันการวินิจฉัยยาก