1. Про виготовлення вірусопробірок
Пробірки для взяття вірусів належать до виробів медичного призначення. Більшість вітчизняних виробників зареєстровані за продукцією першого сорту, і мало компаній – за продукцією другого сорту. Останнім часом, щоб задовольнити надзвичайні потреби Уханя та інших місць, багато компаній взяли «надзвичайний канал» «Подати заявку на отримання дозволу на першокласний запис». Пробірка для зразків вірусів складається з тампона для зразків, розчину для збереження вірусів і зовнішньої упаковки. Оскільки єдиного національного або галузевого стандарту не існує, продукція різних виробників сильно відрізняється.
1. Тампон для відбору зразка: тампон для відбору зразка безпосередньо контактує з місцем відбору, а матеріал головки для відбору зразка тісно пов’язаний з подальшим виявленням. Головка тампона для відбору проб має бути виготовлена із синтетичного волокна з поліестеру (PE) або віскози (штучного волокна). Не можна використовувати губку з альгінату кальцію або дерев’яну паличку (включаючи бамбукові палички), а матеріал головки тампона не може бути бавовняним виробом. Оскільки бавовняне волокно має сильну адсорбцію білка, його непросто вимити в наступний розчин для зберігання; і коли дерев’яна паличка або бамбукова паличка, що містить альгінат кальцію та дерев’яні компоненти, зламана, замочування в розчині для зберігання також адсорбує білок і навіть може пригнічувати подальшу реакцію ПЛР. Для виготовлення головки тампона рекомендується використовувати синтетичні волокна, такі як поліетиленове волокно, поліефірне волокно та поліпропіленове волокно. Не рекомендується використовувати натуральні тканини, такі як бавовна. Нейлонові волокна також не рекомендуються, оскільки нейлонові волокна (подібні до насадок для зубних щіток) вбирають воду. Погано, що призводить до недостатнього об’єму вибірки, що впливає на швидкість виявлення. Губка з альгінату кальцію заборонена для забору матеріалу мазка! Ручка тампона буває двох видів: ламана і вбудована. Зламаний тампон поміщають у пробірку для зберігання після відбору зразка, а кришку пробірки розбивають після того, як її зламали з місця біля головки відбору зразка; вбудований тампон безпосередньо поміщає тампон для зразків у пробірку для зберігання після відбору, а кришка пробірки для зберігання вбудована. Вирівняйте маленький отвір із верхньою частиною ручки та затягніть кришку пробірки. Порівнюючи два способи, останній є відносно безпечним. Коли зламаний тампон використовується разом із пробіркою для зберігання меншого розміру, це може призвести до розбризкування рідини в пробірці, тому слід приділити повну увагу ризику забруднення, спричиненого неправильним використанням продукту. Для виготовлення ручки тампона рекомендується використовувати порожнисту екструдовану трубку з полістиролу (PS) або поліпропіленову (PP) ін’єкційну трубку для згинання. Незалежно від того, який матеріал використовується, добавки альгінату кальцію додавати не можна; дерев'яні палички або бамбукові палички. Коротше кажучи, тампон для відбору зразків повинен забезпечувати кількість відбору та кількість виділення, а відібрані матеріали не повинні містити речовин, які впливають на подальше тестування.
2. Рішення для збереження вірусів. На ринку широко використовуються два типи розчинів для збереження вірусів: один — це розчин для підтримки вірусів, модифікований на основі транспортного середовища, а інший — модифікований розчин для лізату екстракції нуклеїнової кислоти.
Основним компонентом першого є базове культуральне середовище Ігла (MEM) або збалансована сіль Хенка, до якої додаються солі, амінокислоти, вітаміни, глюкоза та білок, необхідні для виживання вірусу. Цей розчин для зберігання використовує натрієву сіль фенолового червоного як індикатор і розчин. При значенні рН 6,6-8,0 розчин має рожевий колір. У консерваційний розчин додають необхідну глюкозу, L-глутамін і білок. Білок надається у формі фетальної бичачої сироватки або бичачого сироваткового альбуміну, який може стабілізувати білкову оболонку вірусу. Оскільки консервуючий розчин багатий поживними речовинами, він сприяє виживанню вірусу, але також сприятливий для росту бактерій. Якщо консерваційний розчин забруднений бактеріями, вони будуть розмножуватися у великих кількостях. Вуглекислий газ у його метаболітах призведе до зниження рН консерваційного розчину з рожевого. Стане жовтим. Тому більшість виробників додають у склади антибактеріальні компоненти. Рекомендованими антибактеріальними засобами є пеніцилін, стрептоміцин, гентаміцин і поліміксин B. Азид натрію та 2-метил не рекомендовані Інгібітори, такі як 4-метил-4-ізотіазолін-3-он (MCI) і 5-хлор-2-метил-4 -ізотіазолін-3-он (CMCI), оскільки ці компоненти впливають на реакцію ПЛР. Оскільки зразок, наданий цим консервуючим розчином, в основному є живим вірусом, оригінальність зразка може бути максимально збережена, і його можна використовувати не тільки для екстракції та виявлення нуклеїнових кислот вірусу, але також для культивування та виділення вірусів. Однак слід зазначити, що при використанні для детекції екстракцію та очищення нуклеїнової кислоти необхідно проводити після інактивації.
Інший вид консерваційного розчину, виготовленого на основі лізату екстракції нуклеїнової кислоти, основними компонентами якого є збалансовані солі, хелатуючий агент EDTA, сіль гуанідину (така як гуанідинізотіоціанат, гуанідин гідрохлорид тощо), аніонна поверхнево-активна речовина (така як додекан сульфат натрію), катіонна поверхнево-активні речовини (такі як тетрадецилтриметиламоній оксалат), фенол, 8-гідроксихінолін, дитіотреїтол (DTT), протеїназа K та інші компоненти. Цей розчин для зберігання призначений для безпосереднього розщеплення вірусу для вивільнення нуклеїнової кислоти та усунення РНКази. Якщо використовувати лише для RT-PCR, це більше підходить, але лізат може інактивувати вірус. Цей вид зразка не можна використовувати для розділення культури вірусу.
Хелатуючий агент іонів металів, який використовується в розчині для збереження вірусів, рекомендується використовувати солі EDTA (такі як дикалій етилендіамінтетраоцтова кислота, динатрій етилендіамінтетраоцтова кислота тощо), і не рекомендується використовувати гепарин (такий як гепарин натрію, гепарин літію), щоб не вплинути на виявлення ПЛР.
3. Консерваційна трубка: матеріал для консерваційної трубки слід ретельно вибирати. Є дані, які свідчать про те, що поліпропілен (Поліпропілен) пов’язаний з адсорбцією нуклеїнової кислоти, особливо при високій концентрації іонів напруги, поліетилен (Поліетилен) є кращим, ніж поліпропілен (Поліпропілен). Легко сприймати ДНК/РНК. Поліетилен-пропіленовий полімер (Polyallomer) пластик і деякі спеціально оброблені поліпропіленові (Polypropylene) пластикові контейнери більше підходять для зберігання ДНК/РНК. Крім того, під час використання тампона, що розривається, пробірку для зберігання слід намагатися вибрати контейнер висотою понад 8 см, щоб запобігти розбризкуванню та забрудненню вмісту, коли тампон зламаний.
4. Вода для виробничого консерваційного розчину: надчисту воду, яка використовується для виробничого консерваційного розчину, слід фільтрувати через ультрафільтраційну мембрану з молекулярною масою 13 000, щоб забезпечити видалення полімерних домішок із біологічних джерел, таких як РНКаза, ДНКаза та ендотоксин, і звичайне очищення не рекомендується. Вода або дистильована вода.
2. Використання пробірок для взяття вірусів
Відбір проб за допомогою пробірки для забору вірусу в основному поділяється на забір проб з ротоглотки та забір проб з носоглотки:
1. Взяття зразків з ротоглотки: спочатку натисніть на язик язиковим притискачем, потім простягніть головку тампона для взяття зразків у горло, щоб протерти двосторонні глоткові мигдалини та задню стінку глотки, а потім протріть задню стінку глотки з легким зусиллям, не торкаючись язика одиниця.
2. Взяття зразка з носоглотки: тампоном виміряйте відстань від кінчика носа до мочки вуха та відзначте пальцем, вставте тампон у порожнину носа у напрямку вертикального носа (обличчя), тампон має витягуватися принаймні половина довжини мочки вуха до кінчика носа. Залиште тампон у носі на 15-30 секунд, обережно покрутіть 3-5 разів і витягніть тампон.
За методикою використання неважко зрозуміти, будь то мазок з ротоглотки чи носоглотки, взяття зразка є технічною задачею, складною та забрудненою. Якість зібраного зразка безпосередньо залежить від подальшого виявлення. Якщо зібраний зразок має низьке вірусне навантаження, легко викликати помилкові негативні результати, важко підтвердити діагноз.
Час публікації: 21 червня 2020 р
