وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوب پر کئی خیالات

1. وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوبوں کی تیاری کے بارے میں
وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوبیں طبی آلات کی مصنوعات سے تعلق رکھتی ہیں۔ زیادہ تر گھریلو مینوفیکچررز فرسٹ کلاس مصنوعات کے مطابق رجسٹرڈ ہیں، اور کچھ کمپنیاں دوسرے درجے کی مصنوعات کے مطابق رجسٹرڈ ہیں۔ حال ہی میں، ووہان اور دیگر مقامات کی ہنگامی ضروریات کو پورا کرنے کے لیے، بہت سی کمپنیوں نے "ایمرجنسی چینل" لیا ہے "فرسٹ کلاس ریکارڈ کی اجازت کے لیے درخواست دیں۔ وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوب نمونے لینے والے جھاڑو، وائرس کے تحفظ کے حل اور بیرونی پیکیجنگ پر مشتمل ہوتی ہے۔ چونکہ کوئی متحد قومی معیار یا صنعت کا معیار نہیں ہے، مختلف مینوفیکچررز کی مصنوعات بہت مختلف ہوتی ہیں۔

1. نمونے لینے والے جھاڑو: نمونے لینے کا جھاڑو براہ راست نمونے لینے کی جگہ سے رابطہ کرتا ہے، اور نمونے لینے والے سر کے مواد کا بعد میں ہونے والے پتہ لگانے سے گہرا تعلق ہے۔ نمونے لینے والے جھاڑو کے سر کو پالئیےسٹر (PE) مصنوعی فائبر یا ریون (انسانی ساختہ فائبر) سے بنایا جانا چاہیے۔ کیلشیم الجنیٹ سپنج یا لکڑی کی چھڑی کے جھاڑو (بشمول بانس کی لاٹھی) کا استعمال نہیں کیا جا سکتا، اور جھاڑو کے سر کا مواد کپاس کی مصنوعات نہیں ہو سکتا۔ چونکہ کپاس کے ریشے میں پروٹین کا مضبوط جذب ہوتا ہے، اس کے بعد ذخیرہ کرنے والے محلول میں شامل کرنا آسان نہیں ہے۔ اور جب لکڑی کی چھڑی یا بانس کی چھڑی جس میں کیلشیم الجنیٹ اور لکڑی کے اجزا ہوتے ہیں ٹوٹ جاتے ہیں، تو سٹوریج کے محلول میں بھگونے سے پروٹین بھی جذب ہو جائے گا، اور یہاں تک کہ یہ بعد میں ہونے والے PCR کے رد عمل کو روک سکتا ہے۔ جھاڑو کے سر کے مواد کے لئے مصنوعی ریشوں جیسے پی ای فائبر، پالئیےسٹر فائبر اور پولی پروپیلین فائبر استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ کپاس جیسے قدرتی ریشوں کی سفارش نہیں کی جاتی ہے۔ نایلان ریشوں کی بھی سفارش نہیں کی جاتی ہے کیونکہ نایلان ریشے (ٹوتھ برش کے سروں کی طرح) پانی جذب کرتے ہیں۔ ناقص، نمونے لینے کی ناکافی مقدار کے نتیجے میں، پتہ لگانے کی شرح کو متاثر کرتی ہے۔ کیلشیم الجنیٹ اسفنج جھاڑو والے مواد کے نمونے لینے کے لیے منع ہے! سویب ہینڈل کی دو قسمیں ہیں: ٹوٹا ہوا اور بلٹ ان۔ ٹوٹے ہوئے جھاڑو کو نمونے لینے کے بعد اسٹوریج ٹیوب میں رکھا جاتا ہے، اور ٹیوب کی ٹوپی نمونے لینے کے سر کے قریب کی پوزیشن سے ٹوٹ جانے کے بعد ٹوٹ جاتی ہے۔ بلٹ ان سویب سیمپلنگ کے بعد سیمپلنگ سویب کو براہ راست اسٹوریج ٹیوب میں ڈالتا ہے، اور اسٹوریج ٹیوب ٹیوب کور کو ہینڈل کے اوپری حصے کے ساتھ چھوٹے سوراخ کی سیدھ میں کریں اور ٹیوب کور کو سخت کریں۔ دونوں طریقوں کا موازنہ کرتے ہوئے، مؤخر الذکر نسبتاً محفوظ ہے۔ جب ٹوٹے ہوئے جھاڑو کو چھوٹے سائز کی اسٹوریج ٹیوب کے ساتھ استعمال کیا جاتا ہے، تو یہ ٹوٹنے پر ٹیوب میں مائع چھڑکنے کا سبب بن سکتا ہے، اور مصنوعات کے غلط استعمال کی وجہ سے آلودگی کے خطرے پر پوری توجہ دی جانی چاہیے۔ جھاڑو کے ہینڈل کے مواد کے لیے کھوکھلی پولی اسٹیرین (PS) ایکسٹروڈڈ ٹیوب یا پولی پروپیلین (PP) انجیکشن کریزنگ ٹیوب استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے۔ اس بات سے کوئی فرق نہیں پڑتا ہے کہ کون سا مواد استعمال کیا جاتا ہے، کیلشیم الجنیٹ شامل نہیں کیا جا سکتا؛ لکڑی کی لاٹھی یا بانس کی لاٹھی۔ مختصراً، نمونے لینے والے جھاڑو کو نمونے لینے کی مقدار اور رہائی کی مقدار کو یقینی بنانا چاہیے، اور منتخب کردہ مواد میں ایسے مادے نہیں ہونے چاہئیں جو بعد کی جانچ کو متاثر کریں۔

2. وائرس سے بچاؤ کا حل: مارکیٹ میں دو طرح کے وائرس پرزرویشن سلوشنز بڑے پیمانے پر استعمال ہوتے ہیں، ایک وائرس مینٹیننس سلوشن ہے جو ٹرانسپورٹ میڈیم کی بنیاد پر تبدیل کیا جاتا ہے، اور دوسرا نیوکلک ایسڈ نکالنے والے لائسیٹ کے لیے ترمیم شدہ حل ہے۔
سابق کا بنیادی جزو ایگل کا بنیادی کلچر میڈیم (MEM) یا ہانک کا متوازن نمک ہے، جو وائرس کی بقا کے لیے ضروری نمکیات، امینو ایسڈز، وٹامنز، گلوکوز اور پروٹین کے ساتھ ملایا جاتا ہے۔ یہ ذخیرہ محلول فینول ریڈ سوڈیم نمک کو اشارے اور حل کے طور پر استعمال کرتا ہے۔ جب pH قدر 6.6-8.0 ہے، تو محلول گلابی ہوتا ہے۔ ضروری گلوکوز، L-glutamine اور پروٹین کو تحفظ کے محلول میں شامل کیا جاتا ہے۔ پروٹین فیٹل بوائین سیرم یا بوائین سیرم البومین کی شکل میں فراہم کیا جاتا ہے، جو وائرس کے پروٹین شیل کو مستحکم کر سکتا ہے۔ چونکہ تحفظ کا محلول غذائی اجزاء سے بھرپور ہوتا ہے، یہ وائرس کی بقا کے لیے سازگار ہے بلکہ بیکٹیریا کی افزائش کے لیے بھی فائدہ مند ہے۔ اگر تحفظ کا محلول بیکٹیریا سے آلودہ ہو تو یہ بڑی مقدار میں بڑھ جائے گا۔ اس کے میٹابولائٹس میں کاربن ڈائی آکسائیڈ تحفظاتی محلول پی ایچ کو گلابی رنگ سے پیلا کرنے کا سبب بنے گی۔ لہذا، زیادہ تر مینوفیکچررز نے اپنے فارمولیشنز میں اینٹی بیکٹیریل اجزاء شامل کیے ہیں۔ تجویز کردہ اینٹی بیکٹیریل ایجنٹ پینسلن، اسٹریپٹومائسن، جینٹامیسن اور پولیمیکسن بی ہیں۔ سوڈیم ایزائیڈ اور 2-میتائل تجویز کردہ نہیں روکے جاتے ہیں جیسے کہ 4-میتھائل-4-اسوتھیازولن-3-ون (MCI) اور 5-chloro-2-methyl-4 -isothiazolin-3-one (CMCI) کیونکہ یہ اجزاء PCR کے رد عمل پر اثر انداز ہوتے ہیں۔ چونکہ اس پرزرویشن سلوشن کے ذریعے فراہم کردہ نمونہ بنیادی طور پر ایک زندہ وائرس ہے، اس لیے نمونے کی اصلیت کو زیادہ سے زیادہ برقرار رکھا جا سکتا ہے، اور اسے نہ صرف وائرس نیوکلک ایسڈز کو نکالنے اور ان کا پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جا سکتا ہے، بلکہ اس کی کاشت کے لیے بھی استعمال کیا جا سکتا ہے۔ وائرس کی تنہائی. تاہم، یہ غور کرنا چاہیے کہ جب پتہ لگانے کے لیے استعمال کیا جاتا ہے، تو نیوکلک ایسڈ نکالنے اور صاف کرنے کا عمل غیر فعال ہونے کے بعد کرنا چاہیے۔
نیوکلک ایسڈ نکالنے والے لائسیٹ کی بنیاد پر تیار کردہ تحفظ کے حل کی ایک اور قسم، اہم اجزاء ہیں متوازن نمکیات، EDTA chelating agent، guanidine salt (جیسے guanidine isothiocyanate، guanidine hydrochloride، وغیرہ)، anionic surfactant (جیسے dodecane Sodium sudium) سرفیکٹینٹس (جیسے tetradecyltrimethylammonium oxalate)، فینول، 8-hydroxyquinoline، dithiothreitol (DTT)، proteinase K اور دیگر اجزاء، یہ ذخیرہ کرنے کا حل نیوکلک ایسڈ کو چھوڑنے اور RNase کو ختم کرنے کے لیے وائرس کو براہ راست صاف کرنا ہے۔ اگر صرف RT-PCR کے لیے استعمال کیا جائے تو یہ زیادہ موزوں ہے، لیکن lysate وائرس کو غیر فعال کر سکتا ہے۔ اس قسم کا نمونہ وائرس کی ثقافت کو الگ کرنے کے لیے استعمال نہیں کیا جا سکتا۔

وائرس کے تحفظ کے محلول میں استعمال ہونے والے دھاتی آئن چیلیٹنگ ایجنٹ کو EDTA نمکیات (جیسے dipotassium ethylenediaminetetraacetic acid، disodium ethylenediaminetetraacetic acid، وغیرہ) استعمال کرنے کی سفارش کی جاتی ہے، اور اسے heparin (جیسے سوڈیم heparin، lithium heparin) استعمال کرنے کی سفارش نہیں کی جاتی ہے۔ تاکہ پی سی آر کا پتہ لگانے پر اثر نہ پڑے۔
3. تحفظ ٹیوب: تحفظ ٹیوب کے مواد کو احتیاط سے منتخب کیا جانا چاہئے. ایسے اعداد و شمار موجود ہیں جو تجویز کرتے ہیں کہ پولی پروپیلین (پولی پروپیلین) نیوکلک ایسڈ کے جذب سے متعلق ہے، خاص طور پر ہائی ٹینشن آئن ارتکاز میں، پولی تھیلین (پولی تھیلین) پولی پروپیلین (پولی پروپیلین) سے زیادہ ترجیح دی جاتی ہے DNA/RNA کو سمجھنے میں آسان۔ Polyethylene-propylene polymer (Polyallomer) پلاسٹک اور کچھ خاص طور پر پروسیس شدہ پولی پروپیلین (Polypropylene) پلاسٹک کے کنٹینرز DNA/RNA اسٹوریج کے لیے زیادہ موزوں ہیں۔ اس کے علاوہ، ٹوٹنے کے قابل جھاڑو استعمال کرتے وقت، اسٹوریج ٹیوب کو 8 سینٹی میٹر سے زیادہ اونچائی والے کنٹینر کو منتخب کرنے کی کوشش کرنی چاہیے تاکہ جھاڑو ٹوٹنے پر مواد کو چھڑکنے اور آلودہ ہونے سے بچایا جا سکے۔

4. پروڈکشن پرزرویشن سلوشن کے لیے پانی: پروڈکشن پرزرویشن سلوشن کے لیے استعمال ہونے والے الٹرا پیور پانی کو 13,000 مالیکیولر وزن کے ساتھ الٹرا فلٹریشن جھلی کے ذریعے فلٹر کیا جانا چاہیے تاکہ حیاتیاتی ذرائع جیسے RNase، DNase، اور endotoxin، اور سے پولیمر کی نجاست کے خاتمے کو یقینی بنایا جا سکے۔ عام طہارت کی سفارش نہیں کی جاتی ہے۔ پانی یا آست پانی۔

2. وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوبوں کا استعمال

وائرس کے نمونے لینے والی ٹیوب کا استعمال کرتے ہوئے نمونے لینے کو بنیادی طور پر oropharyngeal سیمپلنگ اور nasopharyngeal سیمپلنگ میں تقسیم کیا جاتا ہے:

1. Oropharyngeal سیمپلنگ: سب سے پہلے زبان کو ڈپریشن کرنے والے کے ساتھ زبان کو دبائیں، پھر دو طرفہ فارینجیل ٹانسلز اور پچھلے فارینجیل وال کو مسح کرنے کے لیے سیمپلنگ سویب کے سر کو گلے میں پھیلائیں، اور کولہوں کی گردن کی دیوار کو ہلکی زبان سے چھونے سے گریز کریں۔ یونٹ

2. ناسوفرینجیل سیمپلنگ: جھاڑو سے ناک کی نوک سے کان کی لو تک کے فاصلے کی پیمائش کریں اور انگلی سے نشان لگائیں، سیمپلنگ جھاڑو کو ناک کی گہا میں عمودی ناک (چہرے) کی سمت میں داخل کریں، جھاڑو کو بڑھانا چاہیے۔ ناک کی نوک تک کان کی لوب کی کم از کم نصف لمبائی، 15-30 سیکنڈ کے لیے ناک میں جھاڑو چھوڑیں، آہستہ سے 3-5 بار گھمائیں، اور جھاڑو واپس لے لیں۔
استعمال کے طریقہ کار سے یہ دیکھنا مشکل نہیں ہے، خواہ یہ oropharyngeal swab ہے یا nasopharyngeal swab، نمونے لینا ایک تکنیکی کام ہے، جو مشکل اور آلودہ ہے۔ جمع کردہ نمونے کے معیار کا براہ راست تعلق بعد میں ہونے والے پتہ لگانے سے ہے۔ اگر جمع کیے گئے نمونے میں وائرل بوجھ کم ہے، غلط منفی پیدا کرنا آسان ہے، تشخیص کی تصدیق کرنا مشکل ہے۔